Einfluss inflammatorischer Zellen auf die Thrombusentstehung und -auflösung im Mausmodell der venösen Thrombose:
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Gießen, Lahn
VVB Laufersweiler Verlag
2017
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|---|---|
| adam_text | INHALT
I.
EINLEITUNG..................................................................................................................................
6
1. VENOESE
THROMBOSE...............................................................................................................
7
1.1
DEFINITION..........................................................................................................................7
1.2 MORPHOLOGIE DER
VENE.....................................................................................................7
1.3 ALLGEMEINE STRUKTUR UND FUNKTION DES ENDOTHELS
.......................................................
8
1.4 ENTSTEHUNG EINER VENOESEN
THROMBOSE..........................................................................9
1.5 KOMPLIKATIONEN IM WEITEREN VERLAUF EINER VENOESEN
THROMBOSE.................................11
1.6 NATUERLICHE
THROMBENAUFLOESUNG.....................................................................................13
1.7 MAUSMODELLE DER VENOESEN
THROMBOSE........................................................................
14
2. EINFLUSS INFLAMMATORISCHER ZELLEN IM GESCHEHEN DER VENOESEN
THROMBOSE....................17
2.1
LEUKOZYTEN.....................................................................................................................17
2.1.1
MONOZYTEN/MAKROPHAGEN..........................................................................................
18
2.1.2 NEUTROPHILE
GRANULOZYTEN..........................................................................................
19
2.1.3
LYMPHOZYTEN..............................................................................................................
20
T
H
1- UND
TH2-LMMUNANTWORTEN...................................................................................21
2.2 DIE ROLLE DER LEUKOZYTEN IM ENTSTEHUNGSPROZESS DER VENOESEN THROMBOSE
............
23
2.3 DIE ROLLE VON LEUKOZYTEN IM AUFLOESUNGSPROZESS DER VENOESEN THROMBOSE
..............
25
II.
ZIELSETZUNG............................................................................................................................
28
1. STANDARDISIERUNG UND EVALUATION DER SONOGRAPHISCHEN DARSTELLUNG VON
VENOESEN
THROMBEN IM VENA CAVA CAUDALIS STENOSE
MODELL.........................................................28
2. GENAUERE BETRACHTUNG DES VERWENDETEN MAUSMODELLS UND DARSTELLUNG DES
EINFLUSSES
VENOESER SEITENAESTE AUF DIE
THROMBENENTSTEHUNG..........................................................28
3. EVALUATION DER FACS-ANALYSE VON THROMBEN- UND VENENGEWEBE ZUR
UNTERSUCHUNG
DER VORHANDENEN
LEUKOZYTENPOPULATION..........................................................................
26
4. CHARAKTERISIERUNG DER AUSWIRKUNG AUF DIE THROMBENENTSTEHUNG UND
AUFLOESUNG DURCH
DIE DEPLETION VON MONOZYTEN/MAKROPHAGEN IM MODELL DER LYSMCRE-IDTR MAUS
.......
28
5. UNTERSUCHUNG DER AUSWIRKUNG EINER VERSCHIEBUNG ZUR TH2 IMMUNANTWORT
AUF DEN
AUFLOESUNGSPROZESS VENOESER
THROMBEN...........................................................................
26
6. AUSWIRKUNG AUF DIE BILDUNG EINES VENOESEN THROMBUS IN DER ABWESENHEIT
VON CD4-
POSITIVEN
ZELLEN.................................................................................................................
29
III.
MATERIAL..................................................................................................................................30
1. LABORGERAETE UND TECHNISCHES
ZUBEHOER..............................................................................
30
2. CHIRURGISCHE
INSTRUMENTE...................................................................................................
31
3.
VERBRAUCHSMATERIALIEN........................................................................................................31
4. CHEMIKALIEN, GEBRAUCHSFERTIGE
LOESUNGEN.........................................................................33
5. REAGENZIEN ZUR
RNA-ANALYSE...........................................................................................35
6.
DURCHFLUSSZYTOMETRIE.........................................................................................................
35
7.
PRIMER..................................................................................................................................36
8.
PUFFER...................................................................................................................................
36
9. SPEZIELLE
SOFTWARE..............................................................................................................37
IV.
METHODEN..........................................................................................................................
38
1.
VERSUCHSTIERE....................................................................................................................
38
1.1 RECHTLICHE
VORAUSSETZUNGEN......................................................................................
36
1.2 HALTUNG UND ZUCHT DER
VERSUCHSTIERE..........................................................................38
1.3
KONTROLLSTAEMME.............................................................................................................39
1.3.1 C57BL/6J
MAEUSE.......................................................................................................
39
1.4 TRANSGENE
STAEMME.....................................................................................................
39
1.4.1 TBX 21 KO
MAEUSE.......................................................................................................
39
1.4.2 LYSMCRE
MAEUSE........................................................................................................
40
1.4.3 IDTR (LYSMCRE-IDTR)
MAEUSE...................................................................................40
1.5 DEPLETION DER MYELOMONOZYTAEREN ZELLEN UNTER VERWENDUNG VON
DIPHTERIETOXIN IN
LYSMCRE-IDTR
MAEUSEN...............................................................................................40
1.6 IN VIVO DEPLETION VON CD4-POSITIVEN
T-ZELLEN............................................................43
2. WAHL UND DURCHFUEHRUNG DER
NARKOSE................................................................................44
2.1 ANAESTHESIE FUER DEN OPERATIVEN EINGRIFF (VENA CAVA LIGATUR)
......................................
45
2.2 ANAESTHESIE FUER SONOGRAPHISCHE UNTERSUCHUNGEN
.......................................................
46
3. MAUSMODELL DER VENOESEN
THROMBOSE...............................................................................46
4. HALTUNGSBEDINGUNGEN DER TIERE IM
EXPERIMENT...............................................................47
5. SONOGRAPHISCHE
UNTERSUCHUNG.........................................................................................
48
5.1 APPARATIVER AUFBAU ZUR ULTRASCHALLUNTERSUCHUNG
.......................................................
48
5.2 VERWENDETE DARSTELLUNGSMETHODEN DER ULTRASCHALLSIGNALE
......................................
50
5.2.1 B-MODE
DARSTELLUNG...................................................................................................50
5.2.2 DUPLEX-SONOGRAPHIE DER BLUTGEFAESSE
........................................................................
51
5.2.3 FARBKODIERTE
DOPPLER-SONOGRAPHIE...........................................................................52
5.3 DARSTELLUNG DER VENA CAVA CAUDALIS BEI DER
MAUS....................................................53
6. PRAEPARATION VON BLUT, VENA CAVA CAUDALIS UND
THROMBENGEWEBE..................................54
6.1
BLUTENTNAHME...............................................................................................................
54
6.2 TOETUNG DER MAUS UND PRAEPARATION DER VENA CAVA CAUDALIS/EXTRAKTION
DES
THROMBENMATERIALS......................................................................................................
55
6.3 BESTIMMUNG DES THROMBENGEWICHTES
........................................................................
55
7. ANALYSE MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE...............................................................................56
7.1 PRINZIP DER
DURCHFLUSSZYTOMETRIE.................................................................................56
7.2 AUFARBEITUNG DER PROBEN ZUR GEWINNUNG VERSCHIEDENER
LEUKOZYTENPOPULATIONEN..57
7.2.1 AUFARBEITUNG DER
VENEN............................................................................................
57
7.2.2 AUFARBEITUNG DER
THROMBEN......................................................................................59
7.2.3 AUFARBEITUNG DES
BLUTES...........................................................................................
59
7.2.4 AUFARBEITUNG DES BLUTES ZUR ANALYSE VON APOPTOTISCHEN ZELLEN
............................
59
8. MRNA-ANALYSE MITTELS QUANTITATIVER REAL-TIME-PCR
(QRT-PCR)...............................62
8.1 PRINZIP DER
RNA-ANALYSE..............................................................................................
62
6.2 PRINZIP DER
QRT-PCR.....................................................................................................62
8.3
RNA-ISOLIERUNG..............................................................................................................63
8.4 BESTIMMUNG DER
RNA-KONZENTRATION...........................................................................64
8.5 DURCHFUEHRUNG DER
QRT-PCR.........................................................................................64
8.6 AUSWERTUNG DER
ERGEBNISSE..........................................................................................65
9. STATISTISCHE
ANALYSE....................................................................................................
65
V.
ERGEBNISSE.........................................................................................................................67
1. STANDARDISIERUNG UND EVALUATION DER SONOGRAPHISCHEN DARSTELLUNG VON
VENOESEN
THROMBEN...........................................................................................................................67
1.1 ERMITTLUNG DER FLUSSGESCHWINDIGKEIT MIT HILFE DER
DUPLEX-SONOGRAPHIE....................67
2. GENAUERE BETRACHTUNG DES VERWENDETEN MAUSMODELLS UND DARSTELLUNG DES
..............
70
2.1 DIE LIGATION VENOESER SEITENAESTE BEINFLUSST WEDER DIE PRAEVALENZ DER
THROMBENBILDUNG NOCH DEREN
GEWICHT.......................................................................75
3. ANALYSE VON THROMBEN- UND VENENGEWEBE HINSICHTLICH VORHANDENER
LEUKOZYTENPOPULATIONEN UNTER VERWENDUNG DER DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.........................
76
3.1 REDUKTION DER ANZAHL VITALER, CD45 POSITIVER ZELLEN IM
THROMBENGEWEBE IM VERLAUF
DES
AUFLOESUNGSPROZESSES............................................................................................76
3.2 ANALYSE DER VITALEN LEUKOZYTAEREN SUBPOPULATIONEN IM VERLAUF EINER
VENOESEN
THROMBOSE...................................................................................................................
77
3.2.1 NEUTROPHILE
GRANULOZYTEN..........................................................................................78
3.2.2
MONOZYTEN..................................................................................................................
80
3.2.3 T-
ZELLEN......................................................................................................................81
3.2.4 NATUERLICHE
KILLERZELLEN................................................................................................
86
4. BEDEUTUNG IMMUNKOMPETENTER ZELLEN FUER DIE ENTSTEHUNG UND AUFLOESUNG
VENOESER
THROMBEN: MODELLSYSTEM DER LYSMCRE-IDTR
MAUS.......................................................86
4.1 DEPLETION MONOZYTAERER, IMMUNKOMPETENTER ZELLEN IM MODELL DER
LYSMCRE-IDTR
MAUS..............................................................................................................................66
4.2 EINFLUSS EINER REDUKTION AN MONOZYTAEREN ZELLEN AUF DIE
THROMBENENTSTEHUNG IM
VENA CAVA CAUDALIS STENOSE
MODELL...........................................................................89
4.3 EINFLUSS EINER REDUKTION AN MONOZYTAEREN ZELLEN AUF DIE
THROMBENAUFLOESUNG IM
VENA CAVA CAUDALIS STENOSE
MODELL...........................................................................94
4.4 VERAENDERUNGEN DER INFILTRATION INFLAMMATORISCHER ZELLEN UND
VERAENDERTE MRNA-
EXPRESSIONSWERTE BEEINFLUSSEN DIE AUFLOESUNG VENOESER THROMBEN IM MODELL
DER
LYSMCRE-IDTR
MAUS.................................................................................................
100
4.5 POTENTIELLE STIMULATION DER THROMBUSBILDUNG DURCH APOPTOSE DER
MONOZYTAEREN
ZELLEN DER BEHANDELTEN LYSMCRE-IDTR
MAUS.......................................................... 103
5. AUSWIRKUNG EINER VERSCHIEBUNG ZUR TH2 IMMUNANTWORT AUF DEN
AUFLOESUNGSPROZESS
VENOESER THROMBEN IM MODELL DER TBX 21 KNOCKOUT MAUS
............................................
107
5.1 VERSCHIEBUNG ZUR TH2 IMMUNANTWORT FOERDERT DEN AUFLOESUNGSPROZESS IM
CHRONISCHEN
STADIUM EINES VENOESEN
THROMBUS............................................................................
107
5.2 DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE ANALYSE DER LEUKOZYTENPOPULATIONEN IM RAHMEN
DES
AUFLOESUNGSPROZESSES VENOESER THROMBEN IN DER TBX 21 KO MAUS
...........................
112
5.3 VERSCHIEBUNG DER ZYTOKINMUSTER ZUR TH2 IMMUNITAET UND REIFUNG VON M2-
MAKROPHAGEN..............................................................................................................
114
6. AUSWIRKUNG AUF DIE BILDUNG EINES VENOESEN THROMBUS IN DER ABWESENHEIT
VON CD4
POSITIVEN
ZELLEN...............................................................................................................
119
VI.
DISKUSSION......................................................................................................................124
1. STANDARDISIERUNG UND EVALUATION DER SONOGRAPHISCHEN DARSTELLUNG VON
VENOESEN
THROMBEN........................................................................................................................124
2. GENAUERE BETRACHTUNG DES VERWENDETEN MAUSMODELLES UND DARSTELLUNG DES
EINFLUSSES VENOESER SEITENAESTE AUF DIE THROMBENENTSTEHUNG
.....................................
125
3. EVALUATION DER FACS-ANALYSE VON THROMBEN- UND VENENGEWEBE ZUR
UNTERSUCHUNG
DER VORHANDENEN
LEUKOZYTENPOPULATION........................................................................126
4. AUSWIRKUNG AUF DIE THROMBENENTSTEHUNG UND -AUFLOESUNG IM MODELL DER
LYSMCRE-IDTR
MAUS................................................................................................................................
129
4.1 EINE DEPLETION MONOZYTAERER ZELLEN ZEIGT KEINEN EINFLUSS AUF DIE
ENTSTEHUNG EINER
VENOESEN THROMBOSE IM MAUSMODELL DER LYSMCRE-IDTR MAUS
.............................
129
4.2 EINE LONGITUDINALSTUDIE ZEIGTE EINE VERBESSERTE REDUKTION DER
THROMBENFLAECHE IM
MAUSMODELL DER LYSMCRE-IDTR
MAUS......................................................................130
4.3 EIN HOHER ANTEIL AN MONOZYTEN IM THROMBENGEWEBE VERBESSERT DIE
AUFLOESUNG ...132
4.4 APOPTOTISCHE ZELLEN IN DER ZIRKULATION STIMULIEREN DIE ENTSTEHUNG
EINES VENOESEN
THROMBUS...................................................................................................................
134
4.5 EIN ANSTIEG VON VCAM-1 UND MCP-1 IM VENENGEWEBE FOERDERT DAS
ENTSTEHEN EINER
THROMBOSE.................................................................................................................
135
5. UNTERSUCHUNG DER AUSWIRKUNG EINER VERSCHIEBUNG ZUR TH2-LMMUNANTWORT
AUF DEN
AUFLOESUNGSPROZESS VENOESER
THROMBEN.........................................................................136
5.1 DIE TBX 21 KO MAUS ZEIGT EINE VERBESSERTE AUFLOESUNG DES VENOESEN
THROMBUS.... 136
5.2 DIE VERSCHIEBUNG ZUR TH2-LMMUNANTWORT ZEIGT NUR GERINGE
VERAENDERUNGEN IN DER
ZELLULAEREN ZUSAMMENSETZUNG VOM THROMBENGEWEBE
............................................
138
5.3 DIE ZYTOKINMUSTER IN DER TBX 21 KO MAUS ZEIGEN EINEN VERMEHRT
ANTIINFLAMMATORISCHEN
PHAENOTYP...............................................................................
139
6. AUSWIRKUNG AUF DIE BILDUNG EINES VENOESEN THROMBUS IN ABWESENHEIT VON
CD4
POSITIVEN
ZELLEN...............................................................................................................143
VII.
ZUSAMMENFASSUNG..........................................................................................................
145
VIII.
SUMMARY..........................................................................................................................147
IX.
LITERATURVERZEICHNIS.........................................................................................................
148
X.
TABELLENVERZEICHNIS...........................................................................................................
163
XI.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS.....................................................................................................164
XII.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS...................................................................................................169
XIII.
DANKSAGUNG.....................................................................................................................171
|
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