Die Bedeutung parakrin freigesetzter Zytokine adulter kardialer Progenitorzellen für das Remodeling des insuffizienten Herzens:
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| Published: |
Gießen, Lahn
VVB Laufersweiler Verlag
2017
|
| Series: | Edition Scientifique
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INHALTSVERZEICHNIS..........
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS............................................................................................VIII
1
EINLEITUNG.....................................................................................................................
1
1.1 H
ERZINSUFFIZIENZ
....................................................................................................................
1
1.1.1 HERZERKRANKUNGEN DER
HAUSTIERE..................................................................................3
1.2 S
TAMMZELLEN
..........................................................................................................................
5
1.3 K
ARDIALE
P
ROGENITORZELLEN
.................................................................................................
5
1.4 Z
YTOKINE
.................................................................................................................................
6
1.4.1
LNTERLEUKIN-6....................................................................................................................
7
1.4.2
LNTERLEUKIN-8....................................................................................................................8
1.4.3 MONOCYTE CHEMOATTRACTANT
PROTEIN-1.............................................................................9
1.4.4 GROWTH DIFFERENTIATION
FACTOR-15.....................................................................................9
1.4.5 TISSUE INHIBITOR OF
METALLOPROTEINASES-1......................................................................10
1.5 P
ARAKRINE
E
FFEKTE
DURCH
Z
YTOKINE
...................................................................................
11
1.6 K
ARDIOMYOZYTEN
..................................................................................................................14
1.7 A
UFGABENSTELLUNG
..............................................................................................................17
2
MATERIAL.........................................................................................................................18
2.1 C
HEMIKALIEN
..........................................................................................................................
16
2.2 P
UFFER
, L
OESUNGEN
UND
M
EDIEN
..........................................................................................20
2.2.1
ZELLVERKUERZUNG..............................................................................................................
20
2.2.2
ZELLKULTUR.......................................................................................................................21
2.2.3 WESTERN
BLOT.................................................................................................................22
2.2.4
ELISA............................................................................................................................
23
2.3 Z
YTOKINE
, A
NTIKOERPER
UND
SI
RNA......................................................................................23
2.3.1
ZYTOKINE........................................................................................................................
23
2.3.2
SIRNA............................................................................................................................
23
2.3.3
ANTIKOERPER.....................................................................................................................24
2.3.4
ELISA............................................................................................................................
24
2.4 G
ERAETE
, G
EBRAUCHSGEGENSTAENDE
UND
S
OFTWARE
............................................................
24
2.4.1
ALLGEMEIN.......................................................................................................................24
2.4.2
MYOZYTENPRAEPARATION...................................................................................................
25
2.4.3
MYOZYTENISOLIERUNG......................................................................................................
25
2.4.4
ZELLVERKUERZUNG...............................................................................................................25
2.4.5 WESTERN
BLOT..................................................................................................................26
2.4.6
ZELLKULTUR........................................................................................................................26
2.4.7
ELISA............................................................................................................................
26
3
METHODEN.....................................................................................................................
27
3.1 Z
ELLVERKUERZUNG
..................................................................................................................27
3.1.1 GEWINNUNG ADULTER VENTRIKULAERER KARDIOMYOZYTEN AUS DEM RATTENHERZ
....................
27
3.1.2 KULTIVIERUNG UND INKUBATION DER ISOLIERTEN
KARDIOMYOZYTEN.......................................29
3.1.3
ZELLVERKUERZUNGSMESSUNG.............................................................................................
34
3.1.4 ISOLIERUNG DER KARDIOMYOZYTEN FUER DIE WESTERN BLOT
ANALYSE.....................................37
3.2 K
ULTIVIERUNG
VON
P
ROGENITORZELLEN
AUS
H
ERZGEWEBE
..................................................37
3.2.1 GEWINNUNG MYOKARDIALER PROGENITORZELLEN
.................................................................
37
3.2.2 ANLEGEN PRIMAERER ZELLKULTUREN AUS KARDIALEM
GEWEBE..............................................38
3.2.3 ETABLIERUNG DER PROGENITORZELLKULTUREN
.......................................................................
39
3.2.4 GEWINNUNG DER UEBERSTAENDE UND ZELLEN FUER WESTERN BLOT ANALYSEN
...........................
41
3.2.5 TRANSFEKTION DER ZELLEN MIT SHORT-INTERFERING RNA
.......................................................
41
3.2.6 STIMULATION DER ZELLKULTUR MIT ZYTOKINEN
......................................................................
44
3.3 W
ESTERN
BLOT
A
NALYSE
.......................................................................................................45
3.3.1 SDS-HALTIGE POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)........................................45
3.3.2 BLOTTING DER PROTEINE AUF MEMBRANEN
.........................................................................
46
3.3.3 IMMUNOLOGISCHER
NACHWEIS........................................................................................46
3.3.4 AUSWERTUNG DER WESTERN
BLOTS....................................................................................47
3.4 E
NZYME
L
INKED
I
MMUNOSORBENT
A
SSAY
(ELISA)...............................................................48
4
ERGEBNISSE.................................................................................................................
50
4.1 W
IRKUNG
EINZELNER
Z
YTOKINE
AUF
ISOLIERTE
K
ARDIOMYOZYTEN
NORMOTENSI
-
VER
R
ATTENOE
O
4.1.1
LNTERLEUKIN-6.................................................................................................................
51
4.1.2
LNTERLEUKIN-8.................................................................................................................
52
4.1.3 MONOCYTE CHEMOATTRACTANT PROTEIN-1
..........................................................................
53
4.1.4 GROWTH AND DIFFERENTIATION FACTOR-15
...........................................................................
54
4.1.5 TISSUE INHIBITOR OF
METALLOPROTEINASES-1.....................................................................
55
4.2 SERCA / NCX E
XPRESSIONSVERHAELTNIS
ISOLIERTER
K
ARDIOMYOZYTEN
NORMOTENSIVER
R
ATTEN
.....................................................................................................................................56
4.2.1
LNTERLEUKIN-6.................................................................................................................
57
4.2.2
LNTERLEUKIN-8.................................................................................................................
58
4.2.3 MONOCYTE CHEMOATTRACTANT PROTEIN-1
...........................................................................
59
4.2.4 GROWTH AND DIFFERENTIATION
FACTOR-15.............................................................................60
4.2.5 TISSUE INHIBITOR OF
METALLOPROTEINASES-1.......................................................................61
4.3 W
IRKUNG
EINZELNER
Z
YTOKINE
AUF
ISOLIERTE
K
ARDIOMYOZYTEN
HYPERTENSIVER
R
ATTEN
. 62
4.3.1
LNTERLEUKIN-6.................................................................................................................
63
4.3.2
LNTERLEUKIN-8.................................................................................................................
63
4.3.3 MONOCYTE CHEMOATTRACTANT PROTEIN-1
...........................................................................
64
4.3.4 GROWTH AND DIFFERENTIATION
FACTOR-15.............................................................................65
4.3.5 TISSUE INHIBITOR OF
METALLOPROTEINASES-1.......................................................................66
4.4 E
INFLUSS
VON
Z
YTOKINKOMBINATIONEN
AUF
DIE
F
UNKTION
ISOLIERTER
K
ARDIO
-
MYOZYTEN
NORMOTENSIVER RATTEN
.........................................................................................................67
4.4.1 KONTRAKTILE FUNKTION BEI *HOHEN
ZYTOKINKONZENTRATIONEN*...........................................67
4.4.2 SERCA / NCX EXPRESSIONSVERHAELTNIS BEI *HOHEN
ZYTOKINKONZENTRATIONEN*
..............
72
4.4.3 KONTRAKTILE FUNKTION BEI *NIEDRIGEN ZYTOKINKONZENTRATIONEN*
....................................
75
4.4.4 SERCA / NCX EXPRESSIONSVERHAELTNIS BEI *NIEDRIGEN
ZYTOKINKONZENTRATIONEN*
.......
76
4.5 B
LOCKADE
DER
Z
YTOKINWIRKUNG
AUF
DIE
KONTRAKTILE
F
UNKTION
ISOLIERTER
K
ARDIOMYOZYTEN
DURCH
B
INDUNG
AN
ZYTOKINSPEZIFISCHE
A
NTIKOERPER
...............................
78
4.6 W
IRKUNG
VON
Z
YTOKINZUGABEN
ZU
CPC-K
ULTUREN
...............................................................82
4.7 R
EDUKTION
DER
IL-6 E
XPRESSION
HUMANER
CPC
S
DURCH
E
INSATZ
VON
IL-6
SPEZIFISCHE
SI
RNA.....................................................................................................................................
84
4.8 W
IRKUNG
HUMANER
MIT
SI
RNA
GEGEN
IL-6
BEHANDELTER
CPC-K
ULTURUEBERSTAENDE
AUF
ISOLIERTE
K
ARDIOMYOZYTEN
...................................................................................................
89
5
DISKUSSION..................................................................................................................
91
5.1 Z
YTOKINE
IM
A
LLGEMEINEN
...................................................................................................
91
5.2 Z
YTOKINE
IM
S
PEZIELLEN
.......................................................................................................91
5.2.1
LNTERLEUKIN-6.................................................................................................................
91
5.2.2
LNTERLEUKIN-8.................................................................................................................
94
5.2.3 MONOCYTE CHEMOATTRACTANT
PROTEIN-1............................................................................95
5.2.4 GROWTH DIFFERENTIATION
FACTOR-15....................................................................................96
5.2.5 TISSUE INHIBITOR OF
METALLOPROTEINASES-1.......................................................................97
5.3 K
OMBINATIONEN
....................................................................................................................99
5.4 D
IE
U
RSACHE
DER
GESTEIGERTEN
KONTRAKTILEN
F
UNKTION
- SERCA/NCX-V
ERHAELTNIS
. 103
5.5 W
ESTERN
B
LOT
ALS
M
ETHODE
DER
K
ALZIUMKANALBESTIMMUNG
.........................................
105
5.6 Z
YTOKINWIRKUNG
AUF
ISOLIERTE
K
ARDIOMYOZYTEN
HYPERTENSIVER
R
ATTEN
..................
106
5.7 V
ERGLEICHBARKEIT
ISOLIERTE
K
ARDIOMYOZYTEN
UND
M
YOKARDKONTRAKTILITAET
.............
109
5.8 P
ROGENITORZELLKULTUREN
...............................................................................................110
5.9 I
NHIBITION
DER
E
XPRESSION
VON
IL-6
IN
DEN
P
ROGENITORZELLKULTUREN
.........................
113
6
ZUSAMMENFASSUNG.................................................................................................116
7
SUMMARY.....................................................................................................................
118
8 LITERATURVERZEICHNIS
..........................................................................................
120
9
ERKLAERUNG.................................................................................................................
137
10
DANKSAGUNG..............................................................................................................138
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| title | Die Bedeutung parakrin freigesetzter Zytokine adulter kardialer Progenitorzellen für das Remodeling des insuffizienten Herzens |
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| title_full | Die Bedeutung parakrin freigesetzter Zytokine adulter kardialer Progenitorzellen für das Remodeling des insuffizienten Herzens Eingereicht von Friederike Dülfer, Münzenberg |
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| topic | cardiovascular system cabt surgical operations cabt histology cabt heart diseases cabt veterinary medicine cabt |
| topic_facet | cardiovascular system surgical operations histology heart diseases veterinary medicine Hochschulschrift |
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