Zytotoxizität und Apoptoseinduktion durch das Alkylphosphocholin Erufosin bei chronischer lymphatischer Leukämie in vitro:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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Köln
2017
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS................................................................................................7
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS...............................................................................................
10
1
EINLEITUNG.......................................................................................................................14
1.1
APOPTOSE................................................................................................................14
1.1.1 DER EXTRINSISCHE W E G
..................................................................................15
1.1.3 DER MITOCHONDRIALE W EG
..........................................................................
15
1.1.2 DIE CASPASEN-KASKADE
..............................................................................
16
1.2 DIE CHRONISCHE LYMPHATISCHE
LEUKAEMIE..........................................................16
1.2.1
GRUNDLAGEN...................................................................................................
17
1.2.2 PROGNOSTISCHE MARKER BEI DER
CLL...........................................................18
1.2.2.1
ZYTOGENETIK.........................................................................................
18
1.2.2.3
CD38-EXPRESSION..................................................................................19
1.2.2.4 ZAP-70-EXPRESSION
..............................................................................
19
1.2.2.5 WEITERE
FAKTOREN..................................................................................20
1.2.3 THERAPIE DER C L L
........................................................................................
20
1.3
ALKYLPHOSPHOCHOLINE...........................................................................................21
1.3.1 ENTWICKLUNG UND CHEMISCHE STRUKTUR
.......................................................
21
1.3.2 POTENTIELLE
WIRKMECHANISMEN...................................................................23
2
METHODIK......................................................................................................................
25
2.1
MATERIALIEN.........................................................................................................
25
2.1.1 G
ERAETE............................................................................................................25
2.1.2
VERBRAUCHSMATERIAL.....................................................................................
27
2.1.3 CHEMIKALIEN, BIOREAGENZIEN UND FERTIG ZUM GEBRAUCH ERHAELTLICHE
BAUKAESTEN...............................................................................................................
26
2.1.4 IMMUNREAGENZIEN, PROTEINE,
INHIBITOREN..................................................30
2.1.5
ANTIBIOTIKA......................................................................................................
31
2.1.6
ANTIKOERPER......................................................................................................
31
2.1.7
PUFFERLOESUNGEN.............................................................................................
32
2.1.8 VERWENDETE
SOFTWARE...................................................................................34
2.2
METHODEN...........................................................................................................
35
2.2.1
PROBENGEWINNUNG........................................................................................35
2.2.2 ISOLIERUNG VON
LEUKOZYTEN..........................................................................35
2.2.2.1 ISOLIERUNG VON LEUKOZYTEN AUS PERIPHEREM
BLUT............................35
2.2.2.2 B-ZELL-ISOLIERUNG AUS VOLLBLUT VON CLL-PATIENTEN
.........................
36
2.2.2.4 ISOLIERUNG VON GESUNDEN T-ZELLEN AUS LEUKOZYTENKONZENTRATEN37
2.2.3
ZELLZAHLBESTIMMUNG....................................................................................
37
2.2.4 DURCHFLUSSZYTOMETRIE
(FACS)....................................................................37
2.2.4.1 MESSUNG VON OBERFLAECHENANTIGENEN
...............................................
38
2.2.4 2 INTRAZELLULAERE MESSUNG VON Z A P
70.................................................36
2.2.5 MESSUNG DES
ZELLUEBERLEBENS....................................................................39
2.2.5.1 MESSUNG DES ZELLUEBERLEBENS MITTELS
XXT-ASSAY...........................39
2.2.5.2 MESSUNG DER APOPTOSE MITTELS DURCHFLUSSZYTOMETRIE
..................
40
2.2.6 BEHANDLUNG DER ZELLEN MIT ERUFOSIN UND
FLUDARABIN.............................40
2.2.6.1 BEHANDLUNG MIT
ERUFOSIN.....................................................................
40
2.2.6 2 BEHANDLUNG MIT FLUDARABIN
................................................................
41
2.2.6.3
KOMBINATIONSEXPERIMENTE..................................................................41
2.2.7 NACHWEIS VON
PROTEINEN.............................................................................
42
2.2.7.1 HERSTELLUNG VON PROTEINLYSATEN
.........................................................
42
2.2.7 2
PROTEINKONZENTRATIONSBESTIMMUNG....................................................42
2.2.7.3 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) VON
PROTEINEN.............................................................................................................
42
2.2.7 4 WESTERN
BLOT..........................................................................................44
2.2.6 MESSUNG DER PHOSPHOLIPASE A2-AKTIVITAET
...............................................
45
2.2.6
STATISTIK...........................................................................................................
45
2.2.6.1 DOSIS-WIRKUNGSKURVEN UND ISOBOLOGRAMME
..................................
45
2.2.6.2
SIGNIFIKANZTESTS.....................................................................................
47
3 ERGEBNISSE.............
3.1
PATIENTENDATEN.....................................................................................................
48
3.2 WIRKUNG VON ERUFOSIN AUF CLL-ZELLEN SOWIE PBMC UND B-ZELLEN VON
GESUNDEN
SPENDERN..................................................................................................49
3.3 PHOSPHORYLIERUNG VON AKT UNTER ERUFOSINBEHANDLUNG
.................................
52
3.4 ERUFOSIN UND
LIPASE-AKTIVITAET............................................................................53
3.4.1.
LIPOPROTEINLIPASE.........................................................................................53
3.4.2 CYTOSOLISCHE PHOSPHOLIPASE A 2
.............................................................
54
3.5 CASPASENAKTIVIERUNG DURCH ERUFOSIN
..............................................................
55
3.5.1 SPALTUNG DER
POLY-ADP-RIBOSE-POLYMERASE..........................................55
3.5.2 CASPASENINHIBITION DURCH Z-VAD-FMK
......................................................
56
3.6 KOMBINATION VON ERUFOSIN MIT FLUDARABIN
......................................................
57
3.6 KORRELATION DER IN VITRO DATEN MIT KLINISCHEN PROGNOSEFAKTOREN
.................
60
4
DISKUSSION....................................................................................................................62
4.1 APOPTOSEINDUKTION UND WIRKMECHANISMUS VON ERUFOSIN
............................
62
4.2 AUSBLICK UND ZUKUENFTIGE KLINISCHE BEDEUTUNG VON
ERUFOSIN.........................64
5
ZUSAMMENFASSUNG.....................................................................................................
67
6
LITERATURVERZEICHNIS....................................................................................................
66
7 VORABVEROEFFENTLICHUNG VON
ERGEBNISSEN.................................................................80
6
LEBENSLAUF....................................................................................................................
61
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