Zelluläre und molekulare Charakterisierung neocorticaler Laminierungsstörungen an humanem Gewebe bei fokaler corticaler Dysplasie:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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Freiburg i. Br.
[2017]
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| adam_text | AUS DEM NEUROZENTRUM
KLINIK FUER NEUROCHIRURGIE
DES UNIVERSITAETSKLINIKUMS
DER ALBERT-LUDWIGS-UNIVERSITAET FREIBURG IM BREISGAU
ZELLULAERE UND MOLEKULARE CHARAKTERISIERUNG
NEOCORTICALER LAMINIERUNGSSTOERUNGEN AN
HUMANEM GEWEBE BEI
FOKALER CORTICALER DYSPLASIE
INAUGURAL-DISSERTATION
ZUR ERLANGUNG DES MEDIZINISCHEN DOKTORGRADES
DER MEDIZINISCHEN FAKULTAET
DER ALBERT-LUDWIGS-UNIVERSITAET FREIBURG I. BR.
VORGELEGT 2013
VON JULIA MICHIKO NAKAGAWA
GEBOREN IN KAMAKURA (JAPAN)
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS.................................................................................................
I
ABBILDUNGEN..............................................................................................................
V
TABELLEN...................................................................................................................
VII
ABKUERZUNGEN.........................................................................................................
VIII
1
EINLEITUNG..............................................................
1
1.1
EPILEPSIE................................................................................................................................................
1
1.1.1
HISTORIE.......................................................................................................................................
1
1.1.2 DEFINITION, EPIDEMIOLOGIE UND KLASSIFIKATION DER EPILEPSIE
........................................................
2
1.2 DER HUMANE NEOCORTEX
........................
4
1.2.1 HISTOLOGIE DES HUMANEN
NEOCORTEX.............................................................................................4
1.2.2 EMBRYONALE ENTWICKLUNG NEOCORTICALER STRUKTUREN - NEURONALE
MIGRATIONSPROZESSE
.................
5
1.2.3 CORTICALE
MALFORMATIONEN.........................................................................................................
10
1.3 FOKALE CORTICALE DYSPLASIEN
....................
11
1.3.1 KLINIK DER
FCD.......................................................................................................
11
1.3.2 DIAGNOSTISCHE
VERFAHREN...........................................................................................................
12
1.3.2.1 BILDGEBENDE
VERFAHREN.....................................................................................................
12
1.3.2.2
ELEKTROENCEPHALOGRAPHIE..................................................................................................
13
1.3.2.3 NEUROPSYCHOLOGIE
.............
................................................................................................14
1.3.3
THERAPIE...................................................................................................................................
15
1.3.4 NEUROPATHOLOGIE UND KLASSIFIKATION DER
FCD.............................................................................
16
1.4 ZELL- UND LAMINA-SPEZIFISCHE
MARKER..............................................................................................
20
1.4.1 MARKIERUNG VON
PROJEKTIONSNEURONEN.......................................................................................21
1.4.2 CALCIUM-BINDENDE PROTEINE UND ZIELANTIGENE INTERZELLULAERER
TRANSMISSION
.............................
22
1.4.3
REELIN.......................................................................................................................................
24
1.5 BALLOON
CELLS.................................................................................................
.25
1.6 FRAGESTELLUNG DER ARBEIT
.....
.
............................................................................................................28
2 MATERIAL UND
METHODEN...............................................................................29
2.1
MATERIAL................................................................................................................................................
29
2.1.1 AUSWAHL UND AUFBEREITUNG DER
GEWEBEPROBEN........................................................................
29
2.1.1.1 AUSWAHL DES
PATIENTENKOLLEKTIVS......................................................................................
29
2.1.1.2 KONTROLLGEWEBE
............
....................................................................................................30
2.1.1.3 VORBEHANDLUNG UND FIXIERUNG DER
GEWEBEPROBEN...........................................................35
2.1.2 VERWENDETE MATERIALIEN UND
GERAETE.............................................................................
35
2.1.2.1 REAGENZIEN UND
CHEMIKALIEN..........................................................................................
35
2.1.2.2
ANTIKOERPER.........................................................................................................................37
2.1.2.3 ZUSAMMENSETZUNG VERWENDETER
LOESUNGEN......................................................................38
2.1.2.4 GERAETE UND
VERBRAUCHSMATERIALIEN....................................................
39
2.1.2.5
SOFTWARE............................................................................................................................40
2.2
METHODEN..............................................................................................................................................
41
2.2.1 IMMUNHISTOCHEMIE AN
PARAFFINGEWEBE....................................................................................41
2.2.1.1 GRUNDLAGEN DER
IMMUNHISTOCHEMIE..................................................................................41
2.2.1.2 HERSTELLUNG VON SCHNITTEN PARAFFINIERTER GEWEBEBLOECKE
..................................................
42
2.2.1.3 AUFARBEITUNG PARAFFIN-EINGEBETTETER GEWEBESCHNITTE
.......................................................
42
2.2.1.4 IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNG ZUR
ANTIGENDETEKTION......................................................42
2.2.1.5 GEGENFAERBUNG DURCH
HAEMALAUN........................................................................................44
2.2.1.6 DOPPELIMMUNFLUORESZENZFAERBUNG
.......................................
44
2.2.2 BIELSCHOWSKY
SILBERNITRAT-FAERBUNG...........................................................................................45
2.2.3 PROTEINBIOCHEMISCHE
METHODEN...............................................................................................46
2.2.3.1
PROTEINEXTRAKTION..............................................................................................................
46
2.2.3.2 PROTEINBESTIMMUNG NACH DER BICINCHONINSAEURE (BCA)-METHODE
....................................
46
2.2.3.3 WESTERN
BLOT....................................................................................................................
47
2.2.3.3.1 NATRIUMDODECYLSULFAT-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
......................
47
2.2.3.3.2 PROTEINTRANSFER AUF DIE POLYVINYLIDENFLUORID (PVDF)-MEMBRAN
...................................
48
2.2.3.3 3 IMMUNODETEKTION VON
PROTEINEN...............................................................................
49
2.2.S.3.4
CHEMILUMINESZENZ-METHODE.......................................................................................49
2.2.4. AUSWERTUNG UND
DOKUMENTATION..............................................................................................51
2.2.3.4 AUSWERTUNG IMMUNHISTOCHEMISCHER DATEN
.....................................................................
51
2.2.3.5 AUSWERTUNG DER WESTERN BLOT
ANALYSE............................................................................53
2.2.4 STATISTISCHE
AUSWERTUNG.........................................................................................................
..54
3
ERGEBNISSE......................................................................................................
55
3.1 FOKALE CORTICALE DYSPLASIE OHNE BALLOON
CELLS............................................................................55
3.1.1 CHARAKTERISIERUNG MITTELS ZELL- UND LAMINA-SPEZIFISCHER
MARKER...............................................55
3.1.1.1 MORPHOLOGIE DER
LAMINIERUNGSSTOERUNG.............................................................................56
3.1.1.2 ANALYSE VON NEURONENPOPULATIONEN IM DYSPLASTISCHEN CODEX OHNE
BALLOON CELLS
.......
57
3.1.1.2.1
PROJEKTIONSNEURONE.....................................................................................................
57
3.1.1.2.1.1
SMI32...................................................................................................................
57
3.1.1.2.1.2
TLE4.....................................................................................................................
60
3.1.1.2.2
INTERNEURONE................................................................................................................
62
3.1.1.2.2.1
REELIN....................................................................................................................
62
3.1.1.2.2.2
CALBINDIN...............................................................................................................
65
3.1.1.2.2.3
CALRETININ...............................................................................................................
67
3.1.1.2.2.4
PARVALBUMIN..........................................................................................................
68
3.1.2 REPRAESENTATIVE PROTEINE DER NEURONALEN INHIBITORISCHEN UND
EXZITATORISCHEN WIRKUNG IM
DYSPLASTISCHEN
CODEX...........................................................................................................................
70
3.1.2.1
GAD65/67........................................................................................................................
70
3.1.2.2
GLUR2/3............................................................................................................................
71
3.1.2.3
EAAT2/GLT1....................................................................................................................
72
3.2 FOKALE CORTICALE DYSPLASIE MIT BALLOON
CELLS...............................................................................73
3.2.1 CHARAKTERISIERUNG MITTELS ZELL- UND LAMINA-SPEZIFISCHER
MARKER.............................................73
3.2.1.1 MORPHOLOGIE DER LAMINIERUNGSSTOERUNG
............................................................................
74
3.2.1.2 BREITE VON GESAMTCODEX UND MOLEKULARSCHICHT
...............................................................
75
3.2.1.3 ANALYSE VON NEURONENPOPULATIONEN IM DYSPLASTISCHEN CODEX MIT
BALLOON CELLS...........76
3.2.1.3.1
PROJEKTIONSNEURONE.....................................................................................................
77
3.2.1.3.1.1
SMI32...................................................................................................................
77
3.2.1.3.1.2
TLE4.....................................................................................................................
78
3.2.1.3.2
INTERNEURONE................................................................................................................
80
3.2.1.3.2.1
REELIN....................................................................................................................
80
3.2.1.3.2.2
CALBINDIN...............................................................................................................
81
3.2.1.3.2.3
CALRETININ...............................................................................................................
83
3.2.1.3.2.4
PARVALBUMIN..........................................................................................................
84
3.2.1.3.2.5
GAD65/67.............................................................................................................
86
3.2.2 DIFFERENZIELLE EXPRESSION NEURONALER MARKER IN ABHAENGIGKEIT VON
LEBENSALTER UND
ANATOMISCHER LOKALISATION
..................................
.................................................................................
87
3.2.2.1
INTERNEURONE....................................................................................................................87
Z.2.2.2
PROJEKTIONSNEURONE...........................................................................................................
89
3.2.3 NEUROPATHOLOGIE UND KLINISCH SYMPTOMATISCHE EPILEPSIE
........................................................
92
3.2.4
BALLOONCELLS.............................................................................................................................
94
3.2.4.1 VERTEILUNGSMUSTER VON BALLOON CELLS BEI FCD2B
...................................................
94
3.2.4.2 EXPRESSION NEURONALER STAMMZELL MARKE R IN BALLOON CELLS
...............................................
97
3.2.5 FASERSTRUKTUR IM DYSPLASTISCHEN
CODEX.................................................................................100
4
DISKUSSION.......................................................................................................
102
4.1 BESONDERHEITEN EXPERIMENTELLER UNTERSUCHUNGEN AM HUMANEN CORTICALEN
GEWEBE
.......
102
4.2 STOERUNG DER NEOCORTICALEN LAMINAREN ARCHITEKTUR BEI FCD UND DIE
BEDEUTUNG LAMINA
SPEZIFISCHER
MARKER......................................................................................................
105
4.2.1 ANWENDUNG LAMINA-SPEZIFISCHER MARKER
..............................
105
4.2.2 CHARAKTERISIERUNG DER CORTICALEN LAMINIERUNGSSTOERUNG
.........................................................
106
4.3 DIFFERENZIELLE VULNERABILITAET VON
INTERNEURONEN.........................................................................109
4.3.1 CALBINDIN- UND CALRETININ-POSITIVE INTERNEURONE DES
SUPRAGRANULAEREN CODEX
.......................
109
4.3.1.1 REDUKTION CALBINDIN-POSITIVER ZELLEN BEI NIEDRIGGRADIGER
CORIICALER DYSPLASIE
................
109
4.3.1.2 REDUKTION DER SUPRAGRANULAEREN CALBINDIN-POSITIVEN
INTERNEURONPOPULATION BEI
FCD2B.............................................................................................................................................
110
4.3.1.3 CALRETININ-POSITIVE INTERNEURONE BEI
FCD........................................................................111
4.3.2 REDUKTION PARVALBUMIN-POSITIVER INTERNEURONE BEI FCD
.....................
112
4.3.2.1 VULNERABILITAET VON INTEMEURONEN VOR DEM HINTERGRUND
PHYSIOLOGISCHER CODICALER
ENTWICKLUNGSPROZESSE....................................................................................................................
112
4.3.3 VERAENDERTE EXPRESSIONSMUSTER CALCIUM-BINDENDER PROTEINE IN
INTERNEURONEN DES
EPILEPTOGENEN DYSPLASTISCHEN
CODEX................................................................................
.
................
114
4.3.4 NEURONALE INHIBITORISCHE UND EXZITATORISCHE WIRKUNG BEI FCD
..............................................
116
4.3.5 MOLEKULARE PATHOLOGIE UND KLINISCH SYMPTOMATISCHE EPILEPSIE
.............................................
117
4.4 ERHOEHTE EXPRESSION VON TLE4 IN NEURONEN UND BALLOON
CELLS..............................................118
4.5 REELIN IM DYSPLASTISCHEN C
ODEX.................................................................................................
120
4.5.1 BEDEUTUNG VON REELIN FUER DIE LAMINAERE CODICALE ARCHITEKTUR IM
EPILEPTISCHEN GEWEBE
.......
120
4.5.2 REELIN-ISOFORMEN UND PROTEOLYTISCHE
PROZESSIERUNG..............................................................121
4.6
BALLOONCELLS....................................................................................................................................
125
4.6.1 BALLOON CELLS IM NEOCORIICALEN
GEFUEGE...................................................................................125
4.6.2 EXPRESSION VON STAMMZELLMARKERN IN BALLOON CELLS - WAS SIND
BALLOON CELLS WIRKLICH UND
WELCHES POTENTIAL STECKT IN
IHNEN?.....................................................................................................
127
4.7 ZUSAMMENFASSENDE BETRACHTUNG UND AUSBLICK
.......................................................................
131
5
ZUSAMMENFASSUNG.......................................................................................
132
6 LITERATUR
..........................................
133
7
DANKSAGUNG...................I..............................................................................
153
8
LEBENSLAUF.....................................................................................................
155
|
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