Funktionelle Charakterisierung einer primären Zahndurchbruchstörung: = Functional characterisation of primary failure of eruption
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Würzburg
April 2016
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adam_text | AUS DEM INSTITUT FUER PHYSIOLOGIE
DER UNIVERSITAET WUERZBURG
VORSTAND: PROFESSOR DR. MANFRED HECKMANN
FUNKTIONELLE CHARAKTERISIERUNG EINER PRIMAEREN ZAHNDURCHBRUCHSTOERUNG
INAUGURAL - DISSERTATION
ZUR ERLANGUNG DER DOKTORWUERDE DER
MEDIZINISCHEN FAKULTAET
DER
JULIUS-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET WUERZBURG
VORGELEGT VON
JULIA CHRISTINE STURM
AUS BAD MERGENTHEIM
WUERZBURG, APRIL 2016
INHALTSVERZEICHNIS
ABBILDUNGSVERZEICHNIS........................................................................................V
TABELLENVERZEICHNIS............................................................................................
VI
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.....................................................................................VII
1
EINLEITUNG.........................................................................................................
1
1.1 PRIMARY FAILURE OF
ERUPTION...........................................................................1
1.1.1 SYMPTOME DER
PFE.............................................................................1
1.1.2
EPIDEMIOLOGIE......................................................................................2
1.1.3 KOMBINATION VON PFE MIT ANDEREN ERKRANKUNGEN
............................
2
1.1.4 MOLEKULARBIOLOGISCHE URSACHE
...........................
...............................
3
1.1.5 BISHERIGE
THERAPIEOPTIONEN................................................................4
1.1.6
AUSBLICK...............................................................................................
4
1.2 MEMBRANREZEPTOREN UND
LONENKANAELE.........................................................5
1.2.1 AUFBAU VON BIOLOGISCHEN MEMBRANEN UND DIE ROLLE VON
TRANSPORTPROTEINEN..............................................................................5
1.2.2 DIE FAMILIE DER TANDEMPORENKALIUMKANAELE (K
2
P-KANAELE)
...............
5
1.2.3 VORKOMMEN DER TRESK
KANAELE........................................................ 5
1.2.4 STRUKTUR DER TRESK KANAELE
...............................................................
6
1.2.5 FUNKTION DER TRESK KANAELE
.............................................................
6
1.2.6 UNTERSCHEIDUNG MTRESK UND
HTRESK...........................................7
1.2.7 PARATHORMONREZEPTOR................................... 8
1.3 ZIELSETZUNG DER
ARBEIT...................................................................................9
2 MATERIAL UND
METHODEN................................................................................10
2.1 REAGENZIEN, PUFFER UND
LOESUNGEN..........................................................10
2.1.1 BADLOESUNG ZUR AUFBEWAHRUNG VON OOZYTEN
....................................
10
2.1.2
MESSLOESUNG.......................................................................................
10
2.1.3 WASCHLOESUNG
2.1.4
PARATHORMON......................................................................................
11
2.1.5 5X MOPS
LAUFPUFFER..........................................................................12
2.1.6 AUFTRAGSPUFFER
............................................
12
2.1.7 50X TAE-PUFFER (TRIS-ACETAT-EDTA-PUFFER)
......................................
12
2.1.8 TE-PUFFER
(TRIS-EDTA-PUFFER)...........................................................
13
2.2
NUKLEINSAEUREN.............................................................................................
13
2.3
OLIGONUKLEOTIDE...........................................................................................
13
2.4
ENZYME........................................................................................................14
2.5
ANTIBIOTIKA............................................................
14
2.6
HORMON........................................................................................................15
2.7 VERWENDETE
REAKTIONSKITS..........................................................................15
2.8 VERWENDETE LOESUNGEN UND
CHEMIKALIEN...................................................15
2.9 VERWENDETE
GERAETE.....................................................................................
16
2.10
VERBRAUCHSMATERIAL.................................................................................17
2.11
COMPUTERPROGRAMME..............................................................................18
2.12 MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN............................................................. 18
2.12.1
MUTAGENESE.......................................................................................
18
2.12.2 PICKEN VON
MUTANTENKOLONIEN...........................................................19
2.12.3 PRAEPARATION VON PLASMID
DNA..........................................................20
2.12.4 SPEKTRALE KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
.............................................
20
2.12.5 MIDI PREP.................................................... 21
2.12.6 IN VITRO TRANSKRIPTION VON C-RNA FUER DIE EXPRESSION
.......................
22
2.12.7 AUFREINIGUNG DER R
NA......................................................................
24
2.12.8 AGAROSEGEL ZUR UEBERPRUEFUNG DER TRANSKRIPTION
...............................
25
2.12.9 ANSAETZE FUER DAS AGAROSEGEL
2.13 ELEKTROPHYSIOLOGISCHE
METHODEN............................................................26
2.13.1 XENOPUS LAEVIS ALS HETEROLOGES EXPRESSIONSSYSTEM
.....................
26
2.13.2 VORBEREITUNG DER
XENOPUS-OOZYTEN
................................................
27
2.13.3 INJEKTION VON
RNA..............................................................................27
2.13.4 KULTIVIERUNG DER
OOZYTEN..................................................................
28
2.13.5 HERSTELLUNG DER INJEKTIONS- UND
MESSPIPETTEN..................................28
2.13.6 GANZZELLENABLEITUNG MIT DER ZWEI-ELEKTRODEN-SPANNUNGSKLEMME 28
2.13.7 AUFBAU DES
MESSSTANDES.................................................................
29
2.13.6
MESSPROTOKOLL.................................................................................29
2.14 STATISTISCHE METHODEN..............................................
31
3
ERGEBNISSE.....................................................................................................33
3.1 KONTROLLE DES VERDAUS NACH DER IN VITRO TRANSKRIPTION
.............................
33
3.2 GELELEKTROPHORESE ZUR UEBERPRUEFUNG DER TRANSKRIPTION
.............................
34
3.3 SPEKTRALE
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG.......................................................35
3.4
ZWEI-ELEKTRODEN-SPANNUNGSKLEMME.........................................................35
3.4.1 WIRKUNG VON PARATHORMON AUF DEN PTHR1-WILDTYP
.......................
35
3.4.2 WIRKUNG VON PARATHORMON AUF DIE PTHR1-MUTATION G452E..........38
3.4.3 WIRKUNG VON PARATHORMON AUF DIE PTHR1-MUTATION W339*
..........
41
3.4.4 WIRKUNG VON PARATHORMON AUF DIE PTHR1-MUTATION G452A
.........
44
3.4.5 ZUSAMMENFASSUNG DER TEVC-MESSUNGEN MIT TRESK UND PTHR1
...........................................................................................................46
3.4.6 REPRODUKTION DER TEVC-ERGEBNISSE MIT DEM EXPRESSIONSSYSTEM
TASK................................................................................................
50
4
DISKUSSION.....................................................................................................54
4.1 URSACHEN DER
PFE....................................................................................54
4.1.1 DIE PTHR1-MUTANTE G452E UND IHRE ROLLE BEI DER PFE
54
4.1.2 DIE PTHR1-MUTANTE W339* UND IHRE ROLLE BEI DER PFE
55
4.1.3 DIE PTHR1-MUTANTE G452A UND IHRE ROLLE BEI DER PFE
..............
56
4.2 LONENKANAELE ALS MONITOR FUER REZEPTORSTOERUNGEN
.......................................
57
4.3 THERAPIE DER
PFE.......................................................................................
58
4.4 MOEGLICHKEITEN DER DIAGNOSTIK DER
PFE.......................................................60
5
ZUSAMMENFASSUNG......................................................................................
62
6
LITERATURVERZEICHNIS.....................................................................................
65
DANKSAGUNG.........................................................................................................
IX
LEBENSLAUF...........................................................................................................
XI
PERSOENLICHE
DATEN..............................................................................................XI
SCHULISCHER UND AKADEMISCHER WERDEGANG
.....................................................
XI
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