Altersabhängige Effekte auf inflammatorische Mediatoren und zentralnervös kontrollierte Krankheitssymptome bei systemischen Entzündungsreaktionen der Ratte:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Gießen
VVB Laufersweiler Verlag
2015
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| Ausgabe: | 1. Auflage |
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
I. EINLEITUNG 11
1. ALTEM UND DAS IMMUNSYSTEM 11
2. DIE SYSTEMISCHE ENTZUENDUNGSREAKTION 13
2.1 *SICKNESS BEHAVIOUR" 13
2.2 SIGNALWEGE DER SYSTEMISCHEN ENTZUENDUNGSREAKTION 14
2.2.1 NERVALE SIGNALUEBETRAGUNG 14
2.2.2 HUMORALE SIGNALUEBERTRAGUNG 14
2.3 INFLAMMATORISCHE MEDIATOREN 16
2.3.1 ZYTOKINE 16
2.3.2 TRANSKRIPTIONSFAKTOREN 18
2.3.3 PROSTAGLANDINE 19
2.3.4 MICRORNAS 19
3. VERAENDERUNGEN DER SYSTEMISCHEN ENTZUENDUNGSREAKTION IM ALTER 22
4. LEPTIN 25
4.1 DIE ROLLE VON LEPTIN IM IMMUNSYSTEM 29
4.2 DIE ROLLE VON LEPTIN IN DER ENTZUENDUNGSREAKTION 29
5. DIE ROLLE VON ADIPOSITAS IN DER ENTZUENDUNGSREAKTION 31
6. OXIDATIVER STRESS UND ALTERA 33
6.1 PGC-LA 33
6.2 DER PPAR-Y AGONIST ROSIGLITAZON 35
7. DIE HYPOTHALAMUS-HYPOPHYSEN-NEBENNIERENRINDEN-ACHSE 39
7.1 DIE AKTIVIERUNG DER HPA-ACHSE DURCH ZYTOKINE 39
7.2 EINFLUSS DES ALTERNS AUF DIE HPA-ACHSE 40
8. ZIELE UND FRAGESTELLUNGEN DER ARBEIT 42
II. MATERIAL UND METHODEN 45
1. IN VITRO MODELLE 48
1.1 VERSUCHSTIERE 49
1.2 PRIMAERE ZELLKULTUR DES HYPOPHYSENVORDERLAPPENS 49
1.2.1 VERSUCHSAUFBAU 49
1.2.2 DURCHFUHRUNG 50
1.3 FATEXPLANTS 53
1.3.1 VERSUCHSAUFBAU 53
6
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INHALTSVERZEICHNIS
1.3.2 DURCHFUHRUNG 53
2. IN VIVO MODELLE 56
2.1 VERSUCHSAUFBAU 57
2.1.1 STUDIE *ALTEM" 57
2.1.2 STUDIE *LEPTIN ANTISERUM" 58
2.1.3 STUDIE *ROSIGLITAZON" 59
2.2 INTRAABDOMINALE IMPLANTATION DES RADIOTRANSMITTERS 60
2.3 INTRAPERITONEALE INJEKTIONEN 60
2.3.1 LIPOPOLYSACCHARID (LPS) 60
2.3.2 LEPTIN ANTISERUM (LAS) 61
2.3.3 ROSIGLITAZON (RZG) 61
3. ERFASSUNG PHYSIOLOGISCHER DATEN 62
3.1 TELEMETRIE 62
3.1.1 DER SENDER 62
3.1.2 DER TELEMETRISCHE VERSUCHSAUFBAU UND DURCHGEFUEHRTE MESSUNGEN 63
3.2 PERFUSION UND ORGANENTNAHME 64
3.3 GEWINNUNG UND AUFBEREITUNG DER BLUTPROBEN 66
3.4 ORGANVERARBEITUNG AM KRYOSTAT FUER IMMUNHISTOCHEMIE UND RT-PCR 66
4. ERFASSUNG BIOCHEMISCHER PARAMETER 67
4.1 PLASMAPROBENANALYSE 67
4.1.1. GRUNDLAGEN DES BIOASSAYS 68
4.1.2 IL-6 BIOASSAY 68
4.1.3 TNFA BIOASSAY 71
4.1.4 GRUNDLAGEN DES ELISA 72
4.1.5 IL-LRA UND IL-10 ELISA 74
4.1.6. LEPTIN ELISA 77
4.2 IMMUNHISTOCHEMIE UND IMMUNZYTOCHEMIE 78
4.2.1 GRUNDLAGEN DER METHODE 79
4.2.2 ANTIKOERPER 80
4.2.3 VERSUCHSPROTOKOLL IMMUNHISTOCHEMIE 81
4.2.4 VERSUCHSPROTOKOLL IMMUNZYTOCHEMIE 83
4.2.5 FLUORESZENZMIKROSKOPIE UND AUSWERTUNG 83
4.3 QUANTITATIVE REAL-TIME PCR 84
7
INHALTSVERZEICHNIS
4.3.1 GRUNDLAGEN DER METHODE 85
4.3.2 RNA-EXTRAKTION 88
4.3.3 CDNA-SYNTHESE 89
4.3.4 DURCHFUEHRUNG DER QUANTITATIVEN REAL-TIME PCR 90
4.4 QUANTITATIVE REAL-TIME PCR FUER MICRORNAS 91
4.4.1 GRUNDLAGEN DER METHODE 91
4.4.2 CDNA-SYNTHESE 92
4.4.3 DURCHFUEHRUNG DER QUANTITATIVEN REAL-TIME PCR 93
5. AUSWERTUNG UND STATISTIK 94
5.1 PHYSIOLOGISCHE DATEN 94
5.2 BIOCHEMISCHE PARAMETER 94
5.2.1 BIOASSAY UND ELISA 94
5.2.2 IMMUNHISTOCHEMIE UND IMMUNZYTOCHEMIE 95
5.2.3 QUANTITATIVE REAL-TIME PCR 95
III. ERGEBNISSE 97
1. ALTERSABHAENGIGE UNTERSCHIEDE IN DER LPS-BEDINGTEN ENTZUENDUNGSREAKTION
97
1.1 EINFLUSS DES ALTERNS AUF PHYSIOLOGISCHE PARAMETER DES *SICKNESS
BEHAVIOURS". 98
1.2 EINFLUSS DES ALTEMS AUF ZIRKULIERENDE ZYTOKINE 104
1.3 ALTERSBEDINGTE VERAENDERUNGEN DER MRNA-EXPRESSION INFLAMMATORISCHER
MARKER 106
1.4 ALTERSBEDINGTE VERAENDERUNGEN DER IMMUNREAKTIVITAET INFLAMMATORISCHER
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN 111
1.5 ALTERSABHAENGIGE UNTERSCHIEDE VON ZIRKULIERENDEN ZYTOKINEN UND
INFLAMMATORISCHEN
MARKEM ZUM ZEITPUNKT 4 H NACH LPS-INJEKTION 116
1.5.1 KONZENTRATION PRO- UND ANTIINFLAMMATORISCHER ZYTOKINE IM
BLUTPLASMA 116
1.5.2 EXPRESSIONSMUSTER INFLAMMATORISCHER MARKER AUF MRNA-EBENE 117
1.5.3 EXPRESSIONSMUSTER INFLAMMATORISCHER MARKER AUF PROTEINEBENE
MITTELS
IMMUNHISTOCHEMIE 118
2. DER EINFLUSS ERHOEHTER LEPTIN-WERTE UND ALTERSASSOZIIERTER ADIPOSITAS
AUF DIE LPS-
BEDINGTE ENTZUENDUNGSREAKTION 121
2.1 DIE AUSWIRKUNG VON LEPTIN ANTISERUM AUF PHYSIOLOGISCHE PARAMETER DES
*SICKNESS
BEHAVIOURS" 122
2.2 EINFLUSS VON LEPTIN ANTISERUM AUF ZIRKULIERENDE ZYTOKINE 130
2.3 EFFEKTE VON LEPTIN ANTISERUM AUF DIE MRNA-EXPRESSION
INFLAMMATORISCHER MARKER
132
8
INHALTSVERZEICHNIS
2.4 AUSWIRKUNG VON LEPTIN ANTISERUM AUF DIE IMMUNREAKTIVITAET
INFLAMMATORISCHER
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN 135
2.5 ALTERSBEDINGTE VERAENDERUNGEN DER ZYTOKINFREISETZUNG DURCH DAS
FETTGEWEBE 137
3. ALTERSABHAENGIGE EINFLUESSE DES PPARY-AGONISTEN ROSIGLITAZON AUF DIE
LPS-BEDINGTE
ENTZUENDUNGSREAKTION 140
3.1 AUSWIRKUNG VON ROSIGLITAZON AUF PHYSIOLOGISCHE PARAMETER DES
*SICKNESS
BEHAVIOURS" 141
3.2 EINFLUSS VON ROSIGLITAZON AUF ZIRKULIERENDE ZYTOKINE 148
3.3 EFFEKTE VON ROSIGLITAZON AUF DIE MRNA-EXPRESSION INFLAMMATORISCHER
MARKER. 150
3.4 AUSWIRKUNG VON ROSIGLITAZON AUF DIE PROTEINEXPRESSION VON MARKERA
FUER OXIDATIVEN
STRESS (IN KOOPERATION MIT DR. WENZ) 156
4. CHARAKTERISIERUNG ALTERSBEDINGTER VERAENDERUNGEN IN DER AKTIVIERUNG
DER HPA-ACHSE
DURCH LPS UND *NOVEL ENVIRONMENT" STRESS 157
4.1 ALTERSABHAENGIGE UNTERSCHIEDE IN DER ZYTOKINFREISETZUNG IN DER
LPS-STIMULIERTEN
PRIMAEREN HVL-ZELLKULTUR 157
4.1.1 KONZENTRATION PROINFLAMMATORISCHER ZYTOKINE IM UEBERSTAND DER
HVL-ZELLKULTUR
157
4.1.2 EXPRESSIONSMUSTER VON NF-IL6, TNFA UND ACTH AUF PROTEINEBENE
MITTELS
IMMUNHISTOCHEMIE IN DER HVL-ZELLKULTUR 159
4.2 ALTERSBEDINGTE UNTERSCHIEDE IN DER MRNA-EXPRESSION UND
IMMUNREAKTIVITAET
INFLAMMATORISCHER TRANSKRIPTIONSFAKTOREN NACH LPS-STIMULUS IN DER
HYPOPHYSE 162
4.2.1 ALTERSBEDINGTE UNTERSCHIEDE IN DER MRNA-EXPRESSION 162
4.2.3 ALTERSBEDINGTE UNTERSCHIEDE IN DER IMMUNREAKTIVITAET 163
4.3 ALTERSBEDINGTE VERAENDERUNGEN PHYSIOLOGISCHER REAKTIONEN AUF EINE
NEUE UMGEBUNG
167
IV. DISKUSSION 170
1. ALTERSABHAENGIGE VERAENDERUNGEN IN DER ENTZUENDUNGSREAKTION NACH
LPS-STIMULUS AUF
VETSCHIEDENEN EBENEN 170
1.1 VERAENDERUNGEN DER *SICKNESS RESPONSE" IM ALTERN 170
1.2 ALTERSBEDINGTE VERAENDERUNGEN PERIPHERER UND ZENTRALER
INFLAMMATORISCHER PARAMETER
BASAL UND NACH IMMUNSTIMULUS 171
1.3 VERAENDERUNGEN OXIDATIVER STRESSMARKER IM ALTERN UND NACH
LPS-STIMULUS 176
1.4 POTENTIELLE BEDEUTUNG VON MIR-146A IN DER ALTERSABHAENGIGEN
VERAENDERUNGEN DER
LPS-INDUZIERTEN INFLAMMATION 178
2. DER EINFLUSS VON LEPTIN AUF DIE ALTERSBEDINGTEN VERAENDERUNGEN IN DER
SYSTEMISCHEN
ENTZUENDUNGSREAKTION 180
9
INHALTSVERZEICHNIS
2.1 ALTERSABHAENGIGE AUSWIRKUNGEN DER LAS-BEHANDLUNG AUF DIE *SICKNESS
RESPONSE"
UND PERIPHERE SOWIE ZENTRALE INFLAMMATORISCHE PARAMETER 180
2.2 BEURTEILUNG DER ERGEBNISSE DER LAS-BEHANDLUNG IM HINBLICK AUF DEN
EXPERIMENTELLEN VERSUCHSAUFBAU UND DIE ALTERSASSOZIIERTE
LEPTIN-RESISTENZ 182
3. VERAENDERUNGEN IN DER ZYTOKINFREISETZUNG DURCH DAS FETTGEWEBE IM ALTER
184
4. ALTERSABHAENGIGE AUSWIRKUNGEN DES PPARY-AGONISTEN ROSIGLITAZON AUF DIE
LPS-
INDUZIERTE ENTZUENDUNGSREAKTION 186
4.1 EINFLUSS EINER ROSIGLITAZON-BEHANDLUNG IM KONTEXT VON
INFLAMMATORISCHEN UND
NEURODEGENERATIVEN KRANKHEITSBILDEM 186
4.2 BEURTEILUNG DER EFFEKTE VON ROSIGLITAZON AUF DIE LPS-INDUZIERTE
ENTZUENDUNGSREAKTION BEI JUNGEN UND ALTEN RATTEN 187
4.3 AUSBLICK FUER DIE ROSIGLITAZON-FORSCHUNG 189
4.4 CREMOPHOR EL ALS LOESUNGSVERMITTLER 190
5. ALTERSBEDINGTE VERAENDERUNGEN IN DER AKTIVIERUNG DER HPA-ACHSE 192
5.1 UNTERSCHIEDE IN DER ZYTOKINFREISETZUNG DES HYPOPHYSENVORDERLAPPENS
(HVL) JUNGER
UND ALTER RATTEN 192
5.2 UNTERSCHIEDE IN DER EXPRESSION INFLAMMATORISCHER
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN IN DER
HYPOPHYSE JUNGER UND ALTER RATTEN 194
5.3 ALTERSBEDINGTE VERAENDERUNGEN IN DER TEMPERATURERHOEHUNG AUF EINEN
PSYCHOLOGISCHEN STRESSOR 196
6. GESAMTBETRACHTUNG DER HIER UNTERSUCHTEN UNTERSCHIEDE VON JUNGEN UND
ALTEN RATTEN NACH
INFLAMMATORISCHEM UND PSYCHISCHEM STRESS 197
V. ZUSAMMENFASSUNG 201
VI. SUMMARY 204
VII. LITERATUR 207
VIII. ANHANG 235
1. PUBLIKATIONEN 235
1.1 ORIGINALARBEITEN IN FACHZEITSCHRIFTEN 235
1.1 ZITIERBARE KURZMITTEILUNGEN 235
2. DANKSAGUNG 236
3. ERKLAERUNG 237
10 |
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