Reprogrammierung von Rezeptor-Signalwegen des angeborenen Immunsystems durch Virus-assoziierte Konditionierung: eine phänotypische Analyse
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|---|---|
| adam_text | AUS DER ABTEILUNG FUER KLINISCHE PHARMAKOLOGIE
LEITER: PROF. DR. MED. S. ENDRES
MEDIZINISCHE KLINIK UND POLIKLINIK IV
KLINIKUM DER UNIVERSITAET
LUDWIG-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET MUENCHEN
DIREKTOR: PROF. DR. MED. M. REINCKE
REPROGRAMMIERUNG VON REZEPTOR-SIGNALWEGEN DES
ANGEBORENEN IMMUNSYSTEMS
DURCH VIRUS-ASSOZIIERTE
KONDITIONIERUNG:
EINE PHAENOTYPISCHE ANALYSE
DISSERTATION
ZUM ERWERB DES DOKTORGRADES DER MEDIZIN
AN DER MEDIZINISCHEN FAKULTAET DER
LUDWIG-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET MUENCHEN
VORGELEGT VON
THOMAS HUBER
AUS MUENCHEN
2015
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INHALTSVERZEICHNIS
1.EINLEITUN
G 1
1.1. MUSTERERKENNUNGSREZEPTOREN 1
1.1.1. TOLL-AEFTE-REZEPTOREN 2
1.1.1.1. TOLL-F/TE-REZEPTOREN DER
ZELLOBERFLAECHE 2
1.1.1.2. TOLL-FFTE-REZEPTOREN DER
INTRAZELLULAEREN KOMPARTLMENTE 3
1.1.1.3. SIGNALWEGE DER TOLL-FFTE-REZEPTOREN 4
1.1.2. RIG-L-FRKE-REZEPTOREN 5
1.1.2.1. RIG-1 6
1.1.2.2. MDA-5 7
1.1.2.3. LGP-2 7
1.1.2.4. LIGANDEN
UND SIGNALWEGE
DER RIG-L-F/TE-REZEPTOREN 8
1.1.3. WEITERE
MUSTEREIKENNUNGSREZEPTOREN 10
1.2. TOLERANZMECHANISMEN AN MUSTERERKENNUNGSREZEPTOREN 11
1.2.1. ENDOTOXINTOLERANZ 11
1.2.2. HOMOTOLERANZ
UND HETERO-/CROSS-TOLERANZ 12
1.2.3. REZEPTORTOLERANZ FUER R848 13
1.2.4. KLINISCHE
IMPLIKATION 13
1.3. FRAGESTELLUNG 15
2. MATERIAL UND
METHODEN 17
2.1. MATERIALIEN 17
2.1.1. TECHNISCHE AUSSTATTUNG 17
2.1.2. CHEMIKALIEN,
REAGENZIEN UND
PUFFER 17
2.1.3. MATERIALIEN 18
2.1.4. MEDIEN 19
2.1.5. ANTIKOERPER 19
2.1.6. OLIGONUKLEOTIDE,
TLR-LIGANDEN UND
ZYTOKINE 19
2.1.7. VIREN 20
2.1.8. KITS 20
2.1.9. SOFTWARE 20
2.2. TIEREXPERIMENTELLE METHODEN 21
2.2.1. VERWENDETE TIERE 21
2.2.2. INTRAPERITONEALE
INJEKTION 21
2.2.3. ISOLATION VON
KNOCHENMARK 21
2.3. ZELLKULTUR 22
2.3.1. ALLGEMEINE BEDINGUNGEN 22
2.3.2. KULTIVIERUNG DER
CT26 TUMORZELLLINIE 22
2.3.3. KULTIVIERUNG
DER J774
ZELLLINIE 22
2.3.4. GENERIERUNG VON
PLASMAZYTOIDEN DENDRITISCHEN ZELLEN 23
VII
INHALTSVERZEICHNIS
2.3.5. TRANSFEKTION
DER ZELLEN
MIT RNA 23
2.3.6. VIRUSINFEKTION DER VERWENDETEN
ZELLEN 23
2.3.7. UV-LNAKTIVIERUNG VON VIREN 24
2A IMMUNOLOGISCHE METHODEN 24
2.4.1. DURCHFLUSSZYTOMETRIE
- ANNEXIN V /
PI METHODE 24
2.4.2. ENZYME-LINKED-IMMUNOSORBENT-ASSAY (ELISA) 26
2.4.2.1. ELISA-DETEKTION
VON LNTERLEUKIN-6 26
2.4.2.2. ELISA-DETEKTION VON
INTERFERON-A 26
2.5. MOLEKULARBIOLOGLSCHE
METHODEN 26
2.5.1. OLIGONUKLEOTIDE
UND HERSTELLUNG
DER5 -TRIPHOSPHAT-RNA 26
2.5.2. DETEKTION
VON CASPASE-9 27
2.6. STATISTISCHE ANALYSE 28
2.7. ALLGEMEINES VERSUCHSDESIGN 29
3. ERGEBNISSE 30
3.1. POLY(L:C)-VENIILTTELTE REZEPTOR-REPROGRAMMLERUNGEN IN VITRO 30
3.1.1. KONDITIONIERUNG
VERMINDERT DIE INTERFERON-A-SEKRETION
DURCH PPPRNA 30
3.1.2. KONDITIONIERUNG
STEIGERT DIE
TLR7-VERMITTELTE INTERFERON-A-SEKRETION
IN PLASMAZYTOIDEN
DENDRITISCHEN ZELLEN 31
3.1.3. OH-RNA-INDUZIERTE
INTERFERON-ANTWORT VIA TLR7
IN PLASMAZYTOIDEN
DENDRITISCHEN ZELLEN 33
3.1.4. DER
LNTERFERON-A/-SS-REZEPTOR VERMITTELT REZEPTOR-REPROGRAMMIERUNGEN 34
3.1.4.1. ABGESCHWAECHTE SENSITIVIERUNG
DER TLR-ANTWORT IM IFNAR-DEFIZIENTEN PHAENOTYP 34
3.1.4.2. RESTITUTION
DER REZEPTORANTWORT DURCH
NEUTRALISATION VON
IFNAR 36
3.2. POLY(L:C)-VENI!ITTELTE REZEPTOR-REPROGRAMMLERUNGEN IN VIVO 37
3.2.1. IN VM -KONDITIONIERUNG
BLOCKIERT DIE INTERFERON-A-SEKRETION
DURCH SENDAI-VIRUS 37
3.2.2. MDA-5 VERMITTELT
DIE POLY(L:C)-KONDITIONIERUNG IN VIVO 39
3.3. RNA-VIRUS-VERMLTTELTE REZEPTOR-REPROGRAMMLERUNGEN 40
3.3.1. REPROGRAMMIEMNG
VON MUSTERERKENNUNGSREZEPTOREN
IN DER MAKROPHAGENZELLLINIE J774 41
3.3.2. KONDITIONIERUNG
MIT UV-INAKTIVIERTEN RNA-VIREN
VERMINDERT DIE RLR-ANTWORT 45
3.3.3. KONDITIONIERUNG
MIT VIRUS-INFIZIERTEN ZELLEN STEIGERT
DIE TLR-ANTWORT 48
3.4. ELNFLUSS
EINER KONDITIONIERUNG AUF DIE APOPTOSE VON
J774 MAKROPHAGEN 52
4. DISKUSSION 56
4.1. BLOCKADE DER RIG-L-FFKE-REZEPTOR-ANTWORT 57
4.2. SENSITIVIERUNG DER TOLL-// RE-REZEPTOR-ANTWORT 59
4.3. DIE
ROLLE VON TYP-1-LNTERFERONEN 63
VIII
INHALTSVERZEICHNIS
4.4. BEDEUTUNG DER ARBELT UND AUSBLICK 66
5. ZUSAMMENFASSUNG 69
6. LITERATURVERZEICHNIS 70
7. VERZEICHNIS
DER VERWENDETEN ABKUERZUNGEN UND AKRONYME 81
8. DANKSAGUNG 84
9. VEROEFFENTLICHUNGEN 85
9.1. ORIGINALARBELT 85
9.2. POSTER 85
IX
|
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