Epigenetische Modulation boviner Monozyten und Makrophagen:
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| Published: |
Gießen
DVG
2015
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1 EINLEITUNG UND ZIELSETZUNG 1
2 LITERATURUEBERSICHT 3
2.1 EPIGENETIK 3
2.1.1 ORGANISATION DES GENOMS 3
2.1.2 EPIGENETISCHE HISTONMODIFIKATIONEN 5
2.1.3 EPIGENETISCHE MODULATOREN 7
2.1.4 EPIGENETISCHE REGULATION IN MONOZYTEN UND MAKROPHAGEN 15
2.1.5 EPIGENETISCHE STEUERUNG DER MAKROPHAGEN-DIFFERENZIERUNG UND
-POLARISIERUNG 17
2.1.6 AKTUELLER KENNTNISSTAND BEIM RIND 19
2.1.7 PERIPARTALE VERAENDERUNGEN DES EPIGENETISCHEN MUSTERS VON
IMMUNZELLEN 21
2.1.8 EPIGENETIK UND DER BODY CONDITION SCORE 22
2.2 PHAENOTYPISCHE UND FUNKTIONELLE EIGENSCHAFTEN VON
BOVINEN MONOZYTEN UND
MAKROPHAGEN 22
2.2.1 BOVINE MONOZYTEN 22
2.2.2 BOVINE MAKROPHAGEN 23
2.3 VERAENDERUNGEN DES IMMUNSYSTEMS IM PERIPARTALEN ZEITRAUM 24
3 GERAETE, MATERIAL UND METHODEN 25
3.1 GERAETE 25
3.2 KLINIKBEDARF 26
3.3 LABORBEDARF 27
3.4 KULTURMEDIEN, PUFFER UND LOESUNGEN 28
3.5 REAGENZIEN 30
3.6 MONO- UND POLYKLONALE ANTIKOERPER 32
3.6.1 ANTIKOERPER FUER DIE MAGNETISCHE ZELLSEPARATION 32
3.6.2 ANTIKOERPER FUER DIE MEMBRANIMMUNFLUORESZENZ 33
3.6.3 ANTIKOERPER FUER DIE INTRAZELLULAERE IMMUNFLUORESZENZ 33
3.7 VERSUCHSTIERE 34
3.8 GEWINNUNG VON BLUTPROBEN 35
HTTP://D-NB.INFO/1074208854
3.9 GEWINNUNG BOVINER GESAMTLEUKOZYTEN 35
3.10 GEWINNUNG BOVINER MONONUKLEAERER ZELLEN AUS DEM BLUT 35
3.11 GEWINNUNG BOVINER MONOZYTEN 36
3.12 GENERIERUNG VON MAKROPHAGEN AUS BOVINEN MONOZYTEN 37
3.13 /N-WFRUE-STIMULATION VON MONOZYTEN 38
3.14 /N-WFRO-GENERIERUNG VON MAKROPHAGEN UNTER DEM EINFLUSS VON CCL5 38
3.15 STIMULATION VON VOLLBLUT 38
3.16 FIXIERUNG UND KONSERVIERUNG DER GEWONNENEN ZELLEN 39
3.17 DURCHFIUSSZYTOMETRIE 40
3.18 BEURTEILUNG DER ZELLVITALITAET 41
3.19 MEMBRANIMMUNFLUORESZENZ 41
3.20
INTRAZELLULAERE
IMMUNFLUORESZENZ
(ICIF) 43
3.21 PHAGOZYTOSE 44
3.22 EXTRAKTION VON HISTONPROTEINEN 45
3.23 BESTIMMUNG EPIGENETISCHER MARKER MITTELS EINES KOLORIMETRISCHEN
TESTS... 46
3.24 STATISTISCHE AUSWERTUNG 47
4 ERGEBNISSE 48
4.1 METHODISCHE VORARBEITEN..... 48
4.1.1 BINDUNGSVERHALTEN DER ANTIKOERPER BEI DER INTRAZELLULAEREN
IMMUNFLUORESZENZ 48
4.1.2 VERGLEICH DER INTRAZELLULAEREN IMMUNFLUORESZENZ VON MONOZYTEN,
LYMPHOZYTEN UND GRANULOZYTEN 50
4.1.3 VERGLEICH DER HISTONMODIFIKATIONEN VON MONOZYTEN UND MAKROPHAGEN
53
4.1.4 VERGLEICH DER INTRAZELLULAEREN IMMUNFLUORESZENZ MIT EINEM
KOLORIMETRISCHEN TEST 55
4.1.5 BEEINFLUSSUNG DER FUNKTION VON MONOZYTEN UND GRANULOZYTEN DURCH
STIMULATION MIT VERSCHIEDENEN SUBSTANZEN 57
4.2 EPIGENETISCHE MODIFIKATIONEN VON MONOZYTEN UND MAKROPHAGEN WAEHREND
DES PERIPARTALEN ZEITRAUMS 58
4.2.1 EPIGENETISCHE MODIFIKATIONEN VON MONOZYTEN UND MAKROPHAGEN
WAEHREND DES
PERIPARTALEN ZEITRAUMS
IN ABHAENGIGKEIT VOM BODY CONDITION SCORE
DER UNTERSUCHTEN TIERE 61
4.2.2 EPIGENETISCHE MODIFIKATIONEN VON MONOZYTEN UND MAKROPHAGEN
WAEHREND DES PERIPARTALEN ZEITRAUMS BEI GESUNDEN TIEREN UND TIEREN MIT
EINER
POSTPARTALEN INFEKTIONSERKRANKUNG 64
4.2.3 EPIGENETISCHE MODIFIKATIONEN VON MONOZYTEN UND MAKROPHAGEN
WAEHREND DES PERIPARTALEN ZEITRAUMS IN ABHAENGIGKEIT VOM ALTER DER
UNTERSUCHTEN
TIERE 67
4.2.4 EPIGENETISCHE MODIFIKATIONEN VON MONOZYTEN UND MAKROPHAGEN
WAEHREND DES PERIPARTALEN ZEITRAUMS IN ABHAENGIGKEIT VOM EINFLUSS DES
ZEITPUNKTES EINER IMPFUNG GEGEN BVD 69
4.3 EPIGENETISCHE MODIFIKATIONEN BEI MAKROPHAGEN 72
4.4 DER EINFLUSS VERSCHIEDENER STIMULANZIEN AUF TRIMETHYLIERUNGEN UND
ACETYLIERUNG AN BESTIMMTEN LYSINRESTEN DES HISTONS 3 VON MONOZYTEN UND
MAKROPHAGEN 72
4.4.1 DER EINFLUSS VERSCHIEDENER HISTONMODULATOREN AUF DIE ACETYLIERUNG
AM
H3K9 UND
DIE TRIMETHYLIERUNGEN AM H3K4 UND H3K27
VON MONOZYTEN 73
4.4.2 DER EINFLUSS VERSCHIEDENER STIMULANZIEN AUF DIE ACETYLIERUNG AM
H3K9
UND DIE TRIMETHYLIERUNGEN AM H3K4 UND H3K27 BEI MONOZYTEN UND
MAKROPHAGEN 75
4.4.3 DER EINFLUSS PERIPARTALER MODULATOREN AUF
DIE ACETYLIERUNG AM H3K9 UND
DIE TRIMETHYLIERUNGEN AM H3K4 UND H3K27 BEI MONOZYTEN 80
4.5 DER EINFLUSS VERSCHIEDENER STIMULANZIEN AUF DIE ENTWICKLUNG VON
MONOZYTENSUBPOPULATIONEN 82
4.5.1 DER EINFLUSS DER LPS-STIMULATION AUF DIE ANTEILE DER
MONOZYTENSUBPOPULATIONEN 83
4.5.2 DER EINFLUSS DER PERIPARTALEN MODULATOREN AUF DIE ANTEILE DER
MONOZYTENSUBPOPULATIONEN 84
4.5.3 DER EINFLUSS VON HISTONMODULATOREN AUF DIE ANTEILE DER
MONOZYTENSUBPOPULATIONEN 88
ABBILDUNG 32: EINFLUSS VERSCHIEDENER STIMULANZIEN AUF DIE EXPRESSION VON
CD 14
UND CD16 VON MONOZYTEN 89
5 DISKUSSION 91
5.1 VERGLEICH DER INTRAZELLULAEREN IMMUNFLUORESZENZ MIT EINEM
KOLORIMETRISCHEN
TEST 91
5.2 VERGLEICH DES EPIGENETISCHEN PROFILS VON MONOZYTEN, LYMPHOZYTEN UND
GRANULOZYTEN 92
5.3 EPIGENETISCHE MODIFIKATIONEN BEI POLARISIERTEN MAKROPHAGEN UND DER
VERGLEICH DES EPIGENETISCHEN PROFILS VON MONOZYTEN UND MAKROPHAGEN 94
5.4 BEEINFLUSSUNG DER FUNKTION VON MONOZYTEN UND GRANULOZYTEN DURCH
STIMULATION MIT VERSCHIEDENEN EPIGENETISCHEN MODULATOREN 97
5.5 EPIGENETISCHE MODIFIKATIONEN VON MONOZYTEN UND MAKROPHAGEN WAEHREND
DES PERIPARTALEN ZEITRAUMS 99
5.6 OER EINFLUSS VERSCHIEDENER STIMULANZIEN AUF TRIMETHYLIERUNGEN UND
ACETYLIERUNG AN BESTIMMTEN LYSINRESTEN DES HISTONS 3 BEI MONOZYTEN BZW.
MAKROPHAGEN 103
5.7 EINFLUSS VERSCHIEDENER STIMULANZIEN AUF DIE ENTWICKLUNG VON
MONOZYTENSUBPOPULATIONEN 109
6 ZUSAMMENFASSUNG 113
7 SUMMARY 116
8 LITERATURVERZEICHNIS 118
9 ANHANG 157
9.1 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 157
9.2 TABELLENVERZEICHNIS 160
9.3 VERZEICHNIS DER VERWENDETEN ABKUERZUNGEN 161
9.4 ERGEBNISSE DER EX-VIVO UNTERSUCHUNGEN ZU LYMPHOZYTEN UND
GRANULOZYTEN.
167
9.4.1 EPIGENETISCHE MODIFIKATIONEN VON LYMPHOZYTEN UND GRANULOZYTEN
WAEHREND DES PERIPARTALEN ZEITRAUMS 167
9.4.2 EPIGENETISCHE MODIFIKATIONEN VON LYMPHOZYTEN UND GRANULOZYTEN
WAEHREND DES
PERIPARTALEN ZEITRAUMS IN ABHAENGIGKEIT VOM BODY CONDITION SCORE
DER UNTERSUCHTEN TIERE 168
9.4.3 EPIGENETISCHE MODIFIKATIONEN VON LYMPHOZYTEN UND GRANULOZYTEN
WAEHREND DES PERIPARTALEN ZEITRAUMS BEI GESUNDEN TIEREN UND TIEREN MIT
EINER
POSTPARTALEN INFEKTIONSERKRANKUNG 170
9.4.4 EPIGENETISCHE MODIFIKATIONEN VON LYMPHOZYTEN UND GRANULOZYTEN
WAEHREND DES PERIPARTALEN ZEITRAUMS IN ABHAENGIGKEIT VOM ALTER DER
UNTERSUCHTEN
TIERE 172
9.4.5 EPIGENETISCHE MODIFIKATIONEN VON LYMPHOZYTEN UND GRANULOZYTEN
WAEHREND DES PERIPARTALEN ZEITRAUMS IN ABHAENGIGKEIT VOM EINFLUSS DES
ZEITPUNKTES EINER IMPFUNG GEGEN BVD 173
9.5 DER EINFLUSS VERSCHIEDENER STIMULANZIEN AUF TRIMETHYLIERUNGEN UND
ACETYLIERUNG AN BESTIMMTEN LYSINRESTEN DES HISTONS 3 BEI LYMPHOZYTEN
BZW.
GRANULOZYTEN 175
9.5.1 LPS 175
9.5.2 DEXAMETHASON UND HYDROCORTISON 176
9.5.3 IFNY, IL-4/IL-13, TSA, C646, GSK UND 2-PCPA 178
DANKSAGUNG 180
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