Etablierung einer Matrix mit physiologischer Elastizität zur permanenten Kultur von Herzmuskelzellen aus induziert-pluripotenten Stammzellen:
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GLOSSARY VII
CHAPTER 1 -INTRODUCTION 1
1.1. INDUCED PLURIPOTENT STEM CELLS 2
1.2. TUNCUPAC IPS CELLS 4
1.3. DIFFERENTIATION OF INDUCED PLURIPOTENT STEM CELLS 5
1.4. SUBSTRATE STIFFNESS 6
1.5. HEART ELASTIC MODULUS AND SUBSTRATE STIFFNESS 8
1.6. POLYACRYLAMIDE HYDROGEL 9
1.7. POLYACRYLAMIDE HYDROGEL AS CELL CULTURE SUBSTRATE 10
1.8. SUBSTRATE THICKNESS AND UNDERLYING STIFFNESS 12
1.9. CROSSLINKING 13
1.9.1. HYDROXYSUCCINIMIDE-ESTERS 15
1.9.2. SULFO-SANPAH 16
1.9.3. ACRYLIC ACID N-HYDROXYSUCCINIMIDE ESTER 17
1.9.4. COMPOUND I: 2,5-DIOXOPYRROLIDIN-1-YL 6-ACRYLAMIDOHEXANOATE 19
1.10. ATOMIC FORCE MICROSCOPY 19
1.11. NUCLEAR MAGNETIC RESONANCE SPECTROSCOPY 22
AIMS 24
CHAPTER 2 -MATERIALS AND METHODS 25
2.1. REAGENTS 25
2.2. CONSUMABLES 26
2.3. CROSSL INKER SYNTHESIS 26
2.4. CELL CULTURE 29
2.4.1. DIFFERENTIATION OF IPS CELLS TO CARDIOMYOCYTES 30
2.4.2. FROM EBS TO SINGLE CELL CARDIOMYOCYTES 30
2.5. COMPOUND I SYNTHESIS 31
2.6. ACTIVATED POLYACRYLAMIDE GEL 32
2.6.1. HYDROGEL POLYMERIZATION 32
2.6.1. POLYACRYLAMIDE CASTING: THICK VS THIN HYDROGELS 35
2.7. IPS DERIVED CARDIOMYOCYTES CULTURED USING PAA HYDROGEL WITH DIVERSE
STIFFNESS
AS SUBSTRATE 37
2.8. PROTEIN STAINING 39
V
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2.9. IMMUNOCYTOCHEMISTRY 40
2.10. ATOMIC FORCE MICROSCOPY 40
2.11. NUCLEAR MAGNETIC RESONANCE SPECTROSCOPY 41
2.12. FREQUENCY ANALYSIS 42
CHAPTER 3 -RESULTS 44
3.1. THIN ACTIVATED HYDROGELS VS THICK ACTIVATED HYDROGELS AS MATRICES
FOR CELL CULTURE
44
3.2. ACRYLIC ACID N-HYDROXYSUCCINIMIDE ESTER, SULFO-SANPAH AND 2,5-
DIOXOPYRROLIDIN-1-YL 6*ACRYLAMIDOHEXANOATE COMPARISON 46
3.3. IMMUNOCYTOCHEMISTRY 53
3.4. COMPOUND I CHARACTERIZATION 58
3.4.1. ARM LENGTH 58
3.4.2. NUCLEAR MAGNETIC RESONANCE SPECTROSCOPY 60
3.5. POLYACRYLAMIDE GEL CHARACTERIZATION: ATOMIC FORCE MICROSCOPY 67
3.6. PROTEIN IMMOBILIZATION STAINING 72
3.7. FREQUENCY ANALYSIS 74
CHAPTER 4 -DISCUSSION 79
4.1. ELASTIC MODULUS AS MECHANICAL CUE 81
4.2. 4.2. NHS-ACRYLATE, SULFO-SANPAH AND 2,5-DIOXOPYRROLIDIN-1-YL 6-
ACRYLAMIDOHEXANOATE COMPARISON 86
4.3. THIN VS THICK HYDROGELS 90
4.4. FUTURE PERSPECTIVES 95
SUMMARY I I
ZUSAMMENFASSUNG II
APPENDIX III
REFERENCES VI
PRELIMINARY PUBLICATIONS XX
LEBENSLAUF XXI
VI
|
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