In-vitro-Untersuchungen zur Wirkungsweise eines antifibrotisch wirksamen Antikörpers gegen Connective Tissue-Growth-Factor in Kombination mit Transforming-Growth-Factor-beta oder ionisierender Strahlung:
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Berlin
Mensch und Buch Verl.
2014 [erschienen] 2015
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABBILDUNGSVERZEICHNIS IV
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS VI
1 EINLEITUNG 1
1.1 DER AUFBAU DER LUNGE 1
1.2 DEFINITION DER LUNGENFIBROSE 2
1.3 PATHOGENESE DER LUNGENFIBROSE 3
1 3 1 HYPOTHESE LUNGENFIBROSE ALS RESULTAT EINER CHRONISCHEN ENTZUENDUNG
... .. .4
1.3 2 HYPOTHESE: EIN AUSSER KONTROLLE GERATENER HEILUNGSPROZESS FUHRT ZUR
LUNGENFIBROSE 6
1.4 ZELLULAERE UND MOLEKULARE MECHANISMEN DER LUNGENFIBROSE 7
1 4.1 STRUKTURELLE VERAENDERUNGEN BEI EINER LUNGENFIBROSE .... .... 7
1.4 2 EPITHELIAL-TO-MESENCHYMAL TRANSITION (EMT). .9
1.4.3 FIBROBLASTEN . .. 10
1 4 4 MYOFIBROBLASTEN 11
1.4.5 TRANSFORMING GROWTH FACTOR-SS ... .... ... 13
1.4.6 CONNECTIVE TISSUE GROWTH FACTOR 15
1 4.7 CTGF-ANTIKOERPER FG-3019 17
1.5 BESTRAHLUNG DER LUNGE 19
1 5 1 STRAHLUNGSINDUZIERTE LUNGENFIBROSE . 20
1 5 2 PATHOGENESE DER STRAHLENBEDINGTEN LUNGENFIBROSE 22
2 FRAGESTELLUNG UND MOTIVATION 24
3 MATERIALIEN UND METHODEN 26
3.1 ZELLLINIEN 26
3.1 1 HUMAN PULMONARY FIBROBLAST (HPF) ... 26
3.1 2 NORMAL HUMAN DERMAL FIBROBLASTS (NHDF) 26
3.1 3 HUMAN DERMAL MICROVASCULAR ENDOTHELIAL CELLS (HDMEC) .... 26
3 1.4 HUMAN UMBILICAL VEIN ENDOTHELIAL CELLS (HUVEC) 26
3.1.5 TUMORZELLEN 27
3.2 VERARBEITUNG VON ZELLEN 27
3.2.1 AUFTAUEN UND KULTIVIERUNG DER ZELLEN ....27
3.2.2 SUBKULTIVIERUNG VON ZELLEN 28
3.2.3 ZELLZAHLUNG MIT DER NEUBAUER-ZAEHLKAMMER 29
3.3 ZUSAETZE 29
3.3 1 FG-3019 29
3.3.2 TGF-SS 29
3.4 BESTRAHLUNG 30
3.5 ZELLVERSUCHE 30
3 5.1 KLONOGENES ASSAY .... . .. 30
3 5.2 PROLIFERATIONS-ASSAY .. ... .. ... 31
3.5.3 BESTIMMUNG DER VITALITAT. .. . 31
3 5 4 ADHAESIONS-ASSAY . . . . . . . ..32
3 5 5 MIGRATIONS-ASSAY . . . 32
3.5.5.1 VORBEREITUNG DER ZELLEN 33
3 5.5.2 MIGRATIONSEXPERIMENT . . 33
3 5.5 3 FAERBUNG . ... 34
3 5.5.4 AUSWERTUNG . .... .... 34
3.6 STATISTISCHE ANALYSE 35
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3.7 PROTEINBIOCHEMISCHE METHODEN UND MORPHOLOGISCHE VERAENDERUNGEN 35
3 7 1 BEHANDLUNG DER ZELLEN 35
3 7.2 MORPHOLOGISCHE VERAENDERUNG.. .... 35
3.7.3 PROTEINISOHERUNG ... .. 36
3 7 4 WESTERN BLOT 36
3.7.5 ANTIKOERPER ... .. ... ....38
4 ERGEBNISSE 39
4.1 AUSWIRKUNG VON FG-3019 AUF DAS WACHSTUMSVERHALTEN DER ZELLEN 39
4.1.1 AUSWIRKUNG VON FG-3019 IM KLONOGENEN ASSAY 39
4 111
FG-3019
HEMMT
DAS
KLONOGENE
UBERLEBEN
VON
HPF 39
4 112
FG-3019
HAT
KEINEN
EINFLUSS
AUF
DAS
KLONOGENE
UEBERLEBEN
VON
NHDF
. . 42
4.1 1 3 FG-3019 HAT KEINEN EINFLUSS AUF DAS KLONOGENE UEBERLEBEN VON
HDMEC UND HUVEC 43
4 114
FG-3019
HAT
KEINEN
EINFLUSS
AUF
DAS
KLONOGENE
UEBERLEBEN
VON
A549 ..47
4 1.2 AUSWIRKUNG VON FG-3019 IM PROLIFERATIONS ASSAY 49
4 12 1 FG-3019 HEMMT DIE PROLIFERATION VON HPF 49
4 12 2 FG-3019 HAT KEINEN EINFLUSS AUF DIE PROLIFERATION VON NHDF 50
4 1.2.3 FG-3019 HEMMT DIE PROLIFERATION VON HUVEC 51
4.1.2.4 FG-3019 ZEIGT KEINE SIGNIFIKANTE BEEINFLUSSUNG DER PROLIFERATION
VON A549 52
4.2 AUSWIRKUNG VON FG-3019 AUF DIE VITALITAET VON ZELLEN 53
4 2 1 FG-3019 HEMMT DIE VITALITAET VON HPF 53
4 2 2 FG-3019 HAT KEINEN EINFLUSS AUF DIE VITALITAET VON NHDF .... 54
4 2 3 FG-3019 HAT KEINEN EINFLUSS AUF DIE VITALITAT VON HUVEC 55
4.2.4 FG-3019 HAT KEINEN EINFLUSS AUF DIE VITALITAT VON A549 ... 56
4.3 AUSWIRKUNG VON FG-3019 AUF DIE ADHAESION VON ZELLEN 57
4.3 1 FG-3019 REDUZIERT LEICHT DIE ADHAESION VON HPF . 57
4.3.2 FG-3019 ZEIGT KEINEN EFFEKT AUF DAS ADHAESIONSVERHALTEN VON NHDF. .
.. .... .58
4.3.3 FG-3019 HAT KEINEN EINFLUSS AUF DAS ADHASIONSVERHALTEN VON HUVEC
59
4 3.4 FG-3019 BEEINFLUSST DAS ADHAESIONSVERHALTEN VON A549 NICHT . . ..60
4.4 AUSWIRKUNG DER MIGRATIONSZEIT AUF DIE MIGRATION UND DIE
ZEILMORPHOLOGIE VON HPF UND
NHDF 61
4 4.1 DIE ZEIT BEEINFLUSST DAS MIGRATIONSVERHALTEN UND DIE
ZELLMORPHOLOGIE VON HPF .. 62
4.4.2 NHDF ZEIGEN KEINE MIGRATION IM MIGRATIONS-ASSAY 62
4.5 AUSWIRKUNG VON FG-3019 AUF DIE MIGRATION 63
4 5 1 FG-3019 REDUZIERT DIE IN-VIVO MIGRATION VON HPF ... .... 63
4 5 2 FG-3019 ZEIGT KEINEN EINFLUSS AUF DIE MIGRATION VON HDMEC . . ..65
4.5.3 FG-3019 ZEIGT KEINEN EINFLUSS AUF DIE MIGRATION VON HUVEC 67
4 5 4 FG-3019 HAT KEINEN EINFLUSS AUF DAS MIGRATIONSVERHALTEN VON A549
68
4.6 AUSWIRKUNG VON BESTRAHLUNG KOMBINIERT MIT FG-3019 AUF DAS KLONOGENE
UEBERLEBEN 70
4 6 1 FG-3019 BEEINFLUSST DAS KLONOGENE UBERLEBEN VON HPF UNTER
BESTRAHLUNG NICHT ... 70
4.6.2 FG-3019 BEEINFLUSST DAS KLONOGENE UBERLEBEN VON NHDF UNTER
BESTRAHLUNG NICHT 71
4 6 3 FG-3019 BEEINFLUSST DAS KLONOGENE UEBERLEBEN VON HUVEC UNTER
BESTRAHLUNG NICHT 72
4.6.4 FG-3019 BEEINFLUSST DAS KLONOGENE UBERLEBEN VON A549 UNTER
BESTRAHLUNG NICHT ... 74
4.7 REAKTION VON MIT TGF-SS BEHANDELTEN ZELLEN AUF FG-3019 75
4 7 1 TGF-SS HEMMT DAS KLONOGENE UBERLEBEN VON HPF UND FG-3019 ATTENUIERT
DIESEN EFFEKT 75
4 7 2 TGF-SS UND DIE ZUSATZLICHE BEHANDLUNG MIT FG-3019 HABEN KEINE
AUSWIRKUNG AUF DIE ADHAESION VON HPF.... 76
4 7 3 FG-3019 REDUZIERT DIE DURCH TGF-SS STIMULIERTE MIGRATION VON HPF .
77
4 7 3.1 ERGEBNISSE FUER 5 H MIGRATIONSZEIT.. . . 78
4 7 3 2 ERGEBNISSE FUER 12 H MIGRATIONSZEIT 80
4.7.3.3 ERGEBNISSE FUER 14 H MIGRATIONSZEIT 81
4.8 MIKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNG DES WACHSTUMS UND DER MORPHOLOGISCHEN
ENTWICKLUNG
VON HPF UND A549 83
4.8.1 A549 83
4 8.2 HPF 85
III
4.9 DIE AUSWIRKUNG VON TGF-SS AUF DIE EXPRESSION VERSCHIEDENER PROTEINE
89
4.9.1 A549 89
4 9 11 KOLLAGEN IV 89
4.9.1.2 A-SMA . ... .90
4.9.1.3 CTGF 91
4.9.2 HPF ...91
4.9.2.1 KOLLAGEN IV .. 92
4 9.2.2 A-SMA 92
5 DISKUSSION 94
5.1 EINFLUSS VON FG-3019 AUF HUMANE ZELLEN IN VITRO 95
5.1.1 BEEINFLUSSUNG DER *EPITHELIAL-TO-MESENCHYMAL TRANSITION * DURCH
TGF-SS ... 98
5.2 TGF-SS IM KONTEXT VON FIBROSE UND STRAHLENTHERAPIE 100
5.3 KLINIK, VERLAUF UND THERAPIEANSAETZE DER STRAHLUNGSBEDINGTEN
LUNGENFIBROSE 101
5 3 1 EINFLUSS IONISIERENDER STRAHLUNG AUF ZELLEN DER LUNGE . .. 104
5.3 2 EINFLUSS VON TGF-SS UND CTGF AUF DIE ENTSTEHUNG EINER LUNGENFIBROSE
... ..... . 105
6 SCHLUSSFOLGERUNG 108
7 ZUSAMMENFASSUNG 109
8 SUMMARY 111
9 LITERATURVERZEICHNIS 113
10 DANKSAGUNG 129
11 SELBSTSTAENDIGKEITSERKLAERUNG 130
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| spelling | Pföhler, Johanna Verfasser (DE-588)1072191083 aut In-vitro-Untersuchungen zur Wirkungsweise eines antifibrotisch wirksamen Antikörpers gegen Connective Tissue-Growth-Factor in Kombination mit Transforming-Growth-Factor-beta oder ionisierender Strahlung vorgelegt von Johanna Pföhler In vitro study of the mechanism of an antifibrotic antibody against Connective Tissue Growth Factor in combination with Transforming Growth Factor-beta or ionising radiation Berlin Mensch und Buch Verl. 2014 [erschienen] 2015 VII, 130 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Nebentitel: In vitro study of the mechanism of an antifibrotic antibody against Connective Tissue Growth Factor in combination with Transforming Growth Factor-beta or ionising radiation Berlin, Freie Univ., Diss., 2015 Transforming growth factor cabt antibody testing cabt migration cabt fibrosis cabt radiotherapy cabt fibroblasts cabt carcinoma cabt epithelial-mesenchymal transition cabt transforming growth factor beta cabt pulmonary fibrosis cabt Immunglobuline (DE-588)4026626-6 gnd rswk-swf Lungenfibrose (DE-588)4168315-8 gnd rswk-swf Ionisierende Strahlung (DE-588)4027633-8 gnd rswk-swf Connective Tissue Growth Factor (DE-588)1052978916 gnd rswk-swf Transforming Growth Factor beta (DE-588)4370120-6 gnd rswk-swf Monoklonaler Antikörper (DE-588)4040094-3 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Lungenfibrose (DE-588)4168315-8 s Monoklonaler Antikörper (DE-588)4040094-3 s Immunglobuline (DE-588)4026626-6 s Connective Tissue Growth Factor (DE-588)1052978916 s Transforming Growth Factor beta (DE-588)4370120-6 s Ionisierende Strahlung (DE-588)4027633-8 s DE-604 Erscheint auch als Online-Ausgabe urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000099355-0 http://www.diss.fu-berlin.de/diss/receive/FUDISS_thesis_000000099355 Resolving-System kostenfrei Volltext DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=028041644&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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