Phänotypische, funktionelle und genomische Charakterisierung humaner NK-Zell-Subpopulationen in verschiedenen lymphoiden Organen:
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CHARAKTERISIERUNG HUMANER
NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN IN VERSCHIEDENEN
LYMPHOIDEN ORGANEN
DER NATURWISSENSCHAFTLICHEN FAKULTAET
DER FRIEDRICH-ALEXANDER-UNIVERSITAET ERLANGEN-NUERNBERG
ZUR
ERLANGUNG DES DOKTORGRADES DR. RER. NAT.
VORGELEGT VON
STEPHANIE NICOLE GERSTNER
AUS SCHWAEBISCH GMUEND
HTTP://D-NB.INFO/1072040891
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS .
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS IV
ABBILDUNGSVERZEICHNIS VIII
TABELLENVERZEICHNIS X
1 EINLEITUNG 1
1.1 DAS IMMUNSYSTEM 1
1.2 NATUERLICHE KILLER-ZELLEN (NK-ZELLEN) 2
1.2.1 NK-ZELL-FUNKTIONEN 3
1.2.2 NK-ZELL-REZEPTOREN 4
1.2.3 NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN 7
1.2.4 MEMORY-LIKE-N K-ZELLEN 10
1.2.5 NK-ZELLEN IN VERSCHIEDENEN ORGANEN 11
1.2.6 INNATE LYMPHOID CELLS (ILCS) 12
1.2.7 NK-ZELL-ENTWICKLUNG 13
1.2.8 DIE PATHOPHYSIOLOGISCHE ROLLE VON NK-ZELLEN 16
1.2.9 NK-ZELL-THERAPIE 18
2 ZIELSETZUNG 20
3 MATERIAL 21
3.1 VERBRAUCHSMATERIAUEN UND CHEMIKALIEN 21
3.2 PUFFER UND LOESUNGEN 21
3.3 PROTEINE, ZYTOKINE UND FARBSTOFFE 22
3.4 ZELLKULTUR 24
3.5 KOMMERZIELL ERHAELTLICHE KITS 25
3.6 SOFTWARE 25
4 METHODEN 26
4.1 HERSTELLUNG VON EINZELZELLSUSPENSIONEN 26
4.1.1 PERIPHERES BLUT 26
4.1.2 THYMUSGEWEBE 26
4.1.3 KNOCHENMARK 27
4.2 ZELL-ISOLIERUNG 27
4.2.1 AUFREINIGUNG DER LEUKOZYTENFRAKTION 27
4.2.2 ANREICHERUNG VON NK-ZELLEN 28
4.2.2.1 PERIPHERES BLUT 28
4.2.2.2 THYMUSGEWEBE 28
4.2.3 ISOLIERUNG VON NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN 28
4.3 ZELLZAHLBESTIMMUNG 29
4.4 EINFRIEREN VON ZEILEN 29
4.5 AUFTAUEN VON ZELLEN 29
4.6 DURCHFLUSSZYTOMETRIE 30
4.6.1 FAERBUNG VON OBERFLAECHENMOTEKUELEN 30
4.6.2 MARKIERUNG VON INTRAZELLULAEREN MOLEKUELEN 33
4.6.3 ZYTOKINNACHWEIS DURCH CYTOKINE BEAD ARRAY (CBA) 33
4.7 ZELLKULTUR 33
4.7.1 AUFTAUEN VON K562-TUMORZELLEN 33
I
INHALTSVERZEICHNIS
4.7.2 KULTIVIERUNG UND PASSAGIEREN VON K562-TUMORZELLEN 34
4.7.3 BERECHNUNG DER TUMORZELLZAHL 34
4.7.4 KRYOKONSERVIERUNG VON K562-TUMORZELLEN 34
4.8 FUNKTIONELLE CHARAKTERISIERUNG VON NK-ZELLEN 34
4.8.1 STIMULIERUNG VON NK-ZELLEN 34
4.8.2 UNTERSUCHUNG DER OEGRANULATIONSFAEHIGKEIT 34
4.8.3 UNTERSUCHUNG DES AKTIVIERUNGSPROFILS 35
4.8.4 UNTERSUCHUNG DER MATURIERUNGSFAEHIGKEIT 35
4.8.5 NACHWEIS VON LOESLICHEN FAKTOREN 36
4.8.5.1 NACHWEIS NACH ZYTOKINSTIMULATION 36
4.8.5.2 NACHWEIS NACH TUMORSTIMULATION 36
4.8.6 ZYTOTOXIZITAETSMESSUNG 36
4.8.6.1 INHIBIERUNG DER ZYTOTOXIZITAET 37
4.9 GENOMISCHE CHARAKTERISIERUNG VON NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN 37
4.9.1 EXTRAKTION DER GESAMT-RNA 37
4.9.2 GENEXPRESSIONSANALYSE 38
4.10 PATIENTENDATEN 38
5 ERGEBNISSE 43
5.1 CHARAKTERISIERUNG VON NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN ISOLIERT AUS HUMANEM
THYMUSGEWEBE 43
5.1.1 ANALYSE DER LYMPHOZYTENPOPULATIONEN 43
5.1.2 IDENTIFIZIERUNG DER NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN 46
5.1.2.1 ALTERSABHAENGIGKEIT DER VERTEILUNG DER NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN 47
5.1.3 IDENTIFIZIERUNG VON NK-ZELL-VORLAEUFERSTADIEN 48
5.1.4 PHAENOTYPISCHE CHARAKTERISIERUNG DER NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN 50
5.1.4.1 ALTERSABHAENGIGE EXPRESSION VON OBERFLAECHENMOLEKULEN 52
5.1.5 AUFREINIGUNG SPEZIFISCHER NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN 55
5.1.6 AKTIVIERUNG DER NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN 58
5.1.6.1 DEGRANULATIONSFAEHIGKEIT DER NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN 58
5.1.6.2 AKTIVIERUNGSPROFIL VON NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN 60
5.1.7 SEKRETION IMMUNMODULATORISCHER FAKTOREN VON
NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN 63
5.1.8 ZYTOTOXIZITAET DER NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN 68
5.1.8.1 LYSEKAPAZITAET DER NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN 68
5.1.8.2 INHIBITION DER LYSEKAPAZITAET DER NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN 72
5.1.9 PHAENOTYPISCHE VERAENDERUNGEN DER NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN DURCH
/N-WTRO-ZYTOKINSTIMULATIONEN ...75
5.2 CHARAKTERISIERUNG VON NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN AUS HUMANEM
KNOCHENMARK 80
5.2.1 IDENTIFIZIERUNG DER NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN 80
5.2.2 PHAENOTYPISCHE CHARAKTERISIERUNG DER NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN 81
5.3 GENEXPRESSIONSPROFIL DER NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN 83
5.3.1 GENEXPRESSIONSPROFIL DER NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN AUS PERIPHEREM
BLUT 83
5.3.2 GENEXPRESSIONSPROFIL VON NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN AUS THYMUSGEWEBE
88
5.3.3 GENEXPRESSIONSPROFIL VON NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN AUS KNOCHENMARK
92
5.3.4 VERGLEICH DER GENEXPRESSIONSPROFILE VON NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN
AUS PERIPHEREM BLUT,
THYMUSGEWEBE UND KNOCHENMARK 96
6 DISKUSSION 99
6.1 NK-ZELLEN UND NK-ZELL-SUBPOPULATIONEN AUS THYMUSGEWEBE 99
6.2 PHAENOTYPISCHE CHARAKTERISIERUNG VON NK-ZELLEN AUS THYMUSGEWEBE 102
II
INHALTSVERZEICHNIS
6.3 AUSWIRKUNG VON ZYTOKINSTIMULATIONEN AUF DIE VIABILITAET UND DEN
PHAENOTYP VON NK-ZELLEN AUS
THYMUSGEWEBE 106
6.4 ALTERSABHAENGIGE PHAENOTYPISCHE VERAENDERUNG DER NK-ZELLEN AUS
THYMUSGEWEBE 109
6.5 FUNKTIONELLE CHARAKTERISIERUNG DER NK-ZELLEN AUS THYMUSGEWEBE 110
6.6 GENEXPRESSION VON TRANSKRIPTIONSFAKTOREN IN NK-ZELLEN AUS
THYMUSGEWEBE 115
6.7 NK-ZELL-ENTWICKLUNG IM THYMUSGEWEBE 116
6.8 FUNKTION DER NK-ZELLEN IM THYMUSGEWEBE 119
6.9 NK-ZELLEN AUS KNOCHENMARK 120
6.10 AUSBLICK 122
7 DANKSAGUNG 124
8 PUBLIKATIONEN 126
9 LEBENSLAUF 127
10 QUELLENVERZEICHNIS 128
10.1 LITERATURVERZEICHNIS 128
10.2 VERZEICHNIS DER INTERNETQUELLEN 151
III
|
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