Charakterisierung mesenchymaler Stammzellen und Applikation in der Experimentellen Autoimmunen Enzephalomyelitis:
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| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Göttingen
Cuvillier
2014
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| Ausgabe: | 1. Aufl. |
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INHALT
INHALT
SYMBOLVERZEICHNIS IXV
ZUSAMMENFASSUNG 1
1. EINLEITUNG 3
1.1. STAMMZELLEN 3
1.1.1. MESENCHYMALE STAMMZELLEN 4
1.1.2. WEITERE STAMMZELLKLASSEN 8
1.1.3. MIGRATION UND HOMING VON MSC 13
1.1.4. MARKIERANGSMETHODEN FUER ZELLEN UND BILDGEBUNGSVERFAHREN 16
1.1.5. KLINISCHE ANWENDUNG 18
1.1.6. IMMUNREGULATORISCHE EIGENSCHAFTEN MESENCHYMALER STAMMZELLEN.
19
1.1.7. MSC UND THERAPIE VON AUTOIMMUNERKRANKUNGEN 23
1.2. MULTIPLE SKLEROSE 27
1.2.1. PATHOLOGIE UND PATHOPHYSIOLOGIE 28
1.2.2. EXPERIMENTELLE AUTOIMMUNE ENZEPHALOMYELITIS (EAE) 31
1.3. VORGEHENSWEISE UND ZIELE DER ARBEIT 34
2. MATERIAL UND METHODEN 37
2.1. CHEMIKALIEN, ENZYME UND SEREN 37
2.2. KITS 39
2.3. GEBRAUCHSWAREN 40
2.4. MEDIEN FIIR DIE ZELLKULTUR 41
2.5. SONSTIGE LOESUNGEN 42
2.6. GERAETE 43
V
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INHALT
2.7. MSC CHARAKTERISIERUNG 44
2.7.1. MSC ISOLATION UND KLONIERUNG 44
2.7.2. KRYOKONSERVIERUNG UND AUFTAUEN VON ZELLEN 45
2.7.3. DIFFERENZIERUNG DER MSC IN VITRO 45
2.7.4. IMMUNPHAENOTYPISIERUNG MITTELS DURCHFLUSSZYTOMETRIE (FACS) 48
2.7.5. COLONY-FORMING UNIT ASSAY (CFU) FUER HUMANE MSC 52
2.7.6. BESTIMMUNG DER MIGRATIONSRATE 53
2.7.7. DIFFERENZIERUNGSPOTENZIAL EISEN-MARKIERTER MSC VON OA RATTEN 53
2.7.8. EISEN-MARKIERUNG VON RATTEN MSC MIT RESOVIST
MITHILFE VON JETPEI* 56
2.8. MARKIERUNG VON MSC UND HOMING 58
2.8.1. QUANTIFIZIERUNG DER TOTALEN EISENBELADUNG DER RATTEN MSC DURCH
PHOTOMETRIE 58
2.8.2. SPIO-MARKIERUNG HUMANER MSC 58
2.8.3. PKH26 FAERBUNG VON DA RATTEN MSC 59
2.8.4. INJEKTION DER SPIO IN DA RATTEN 60
2.9. BILDGEBUNG DER SPLO-MAIKIERTEN MSC DURCH MAGNET-RESONANZ-IMAGING 60
2.9.1. GRUNDLAGEN 60
2.9.2. 7 UND 3 TESLA-MRT VON DA RATTEN 65
2.10. BESTIMMUNG VON BLUTGRUPPENANTIGENEN AUF HUMANEN MSC 66
2.11. INDUKTION DER EXPERIMENTELLEN AUTOIMMUNEN ENZEPHALOMYELITIS 69
2.12. IMMUNOLOGISCHE METHODEN 70
2.12.1. ISOLIERUNG UND KULTIVIERUNG MONONUKLEAERER ZELLEN AUS DER MILZ 70
2.12.2. ASSAY DER ANTIGEN-INDUZIERTEN PROLIFERATION 70
2.12.3. ENZYME-IINKED IMMUNOSPOT (ELISPOT) FILR IFN- Y 71
2.12.4. ENZYME-IINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA) 72
2.13. HISTOLOGIE 72
2.13.1. GEWEBEEINBETTUNG UND HISTOLOGISCHE SCHNITTE 72
2.13.2. EISENFAERBUNG NACH DEM PRUSSIAN BLUE PROTOKOLL 74
2.13.3. KLUEVER-BARRERA-FAERBUNG 75
3. ERGEBNISSE 77
3.1. DIFFERENZIERUNG VON RATTEN MSC IN ADIPOZYTEN, OSTEOBLASTEN UND
CHONDROZYTEN 77
VI
INHALT
3.2. IMMUNPHAENOTYPISIERUNG DER RATTEN MSC 81
3.3. REAL-TIME PCR: EINFLUSS DER EISENMARKIERUNG AUF DAS
DIFTERENZIERUNGSPOTENZIAL 85
3.4. KLINISCHER VERLAUF DER EAE 86
3.4.1. IMMUNOLOGISCHE ERGEBNISSE DES 1. EAE EXPERIMENTES 88
3.4.2. FACS ANALYSE DER LYMPHKNOTEN 90
3.5. KLINISCHER VERLAUF DES 2. EAE EXPERIMENTES 92
3.5.1. IMMUNOLOGISCHE ERGEBNISSE DES 2. EAE VERSUCHS 98
3.6. EFFEKT VON RESOVIST AUF DIE EAE 101
3.7. HOMING JPR-MARKIERTER UND UNMARKIERTER MSC WAEHREND DER EAE 103
3.8. VERHAELTNIS DER MRI
SIGNALINTENSITAETEN AM TAG 2 UND 8 108
3.9. EINFLUSS DER ZELLMARKIERUNGEN AUF DIE DIFTERENZIERUNGSFAEHIGKEIT:
TRILINEAGE DIFFERENZIERUNG HUMANER MSC 112
3.10. EXPRESSION DES H-ANTIGENS AUF HUMANEN GD2
+
MSC 115
4. DISKUSSION 121
4.1. PATHOLOGISCHE PROZESSE DER EAE 121
4.2. MIGRATION UND WIRKUNG VON MSC IN DER EAE 125
4.2.1. MIGRATION VON MSC 125
4.2.2. REPARATURMECHANISMEN UNMAIKIERTER MSC 126
4.2.3. KEIN POSITIVER EFFEKT PROPHYLAKTISCH APPLIZIERTER MSC: MOEGLICHE
GRUENDE 134
4.2.4. AUSWIRKUNGEN DER TRANSPLANTATION 93 P.I. AUF T-ZELLEN 135
4.2.5. EFFEKTE SPIO-MARKIERTER MSC AUF DIE EAE 136
4.3. SPIO-MARKIERUNG, TRANSFEKTIONSAGENZIEN UND AUSWIRKUNGEN AUF MSC 142
4.4. EXPRESSION VON BLUTGRUPPENGENEN UND ANTIGENEN AUF HMSC 144
4.5. BEWERTUNG DER VERSUCHE UND AUSBLICK 148
5. LITERATUR 151
6. LISTE DER VEROEFFENTLICHUNGEN 173
7. DANKSAGUNG 175
VII |
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