Identifizierung und Charakterisierung differentiell exprimierter Gene während der Hyphenbildung in Malassezia furfur mittels cDNA- Subtraktionsverfahren:
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| Published: |
Gießen, Lahn
VVB Laufersweiler Verlag
2014
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1.1 DIE GATTUNG MALASSEZIA 2
1.1.1 DIFFERENZIERUNG DER VERSCHIEDENEN MALASSEZIA-SPEZIES 2
1.1.2 TAXONOMIE 3
1.1.3 EPIDEMIOLOGIE 4
1.1.4 MORPHOLOGIE UND PHYSIOLOGIE 5
1.1.5 MOLEKULARBIOLOGIE 6
1.2 DIE ERKRANKUNG PITYRIASIS VERSICOLOR 6
1.2.1 KRANKHEITSBILD 6
1.2.2 DIAGNOSTIK 7
1.2.3 EPIDEMIOLOGIE DER PITYRIASIS VERSICOLOR 8
1.3 DIE PATHOGENESE DER PITYRIASIS VERSICOLOR 9
1.3.1 HYPHENBILDUNG BEI DEN VERSCHIEDENEN MALASSEZIA-HEFEN 12
1.3.2 HYPHENBILDUNG IN DER KULTUR 15
2 HINTERGRUND UND FRAGESTELLUNG 22
3 MATERIAL UND METHODEN 23
3.1 MATERIALIEN 23
3.2 GERAETE 33
3.3 METHODEN 36
3.3.1 VERWENDETE REFERENZSTAEMME 36
3.3.2 ANZUCHT UND KULTIVIERUNG VON MALASSEZIA-HEFEN 36
3.3.3 DNA- UND RNA-LSOLIERUNG 40
IV
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3.3.4 SUBTRAKTIVE SUPPRESSIONS-HYBRIDISIERUNG (CDNA-SUBTRAKTION) 47
3.3.5 KLONIERUNG IN E. COLI 54
3.3.6 REVERSER NORTHERN BLOT 56
3.3.7 DNA-PLASMID MINI-PREPARATION 59
3.3.8 SEQUENZIERUNG 61
4 ERGEBNISSE 64
4.1 WACHSTUM UND KULTIVIERUNG VON MALASSEZIA-HEFEN 64
4.1.1 FUETTERUNGSVERSUCHE UND HYPHENWACHSTUM DER MALASSEZIA-HEFEN 64
4.2. MOLEKULARGENETISCHE VERSUCHE 70
4.2.1 GESAMT RNA- ISOLIERUNG 70
4.2.2 MRNA- ISOLIERUNG 70
4.2.3 CDNA-SUBTRAKTIONSVERFAHREN 70
4.2.4 KLONIERUNG DER SUBTRAHIERTEN CDNA 72
4.2.5 SCREENING DER SEQUENZEN NACH 6 STUNDEN 73
4.2.6 SEQUENZIERUNG, BLAST-SUCHE UND SEQUENZANALYSE 74
4.2.7 FUNKTIONELLE EINTEILUNG DER SEQUENZEN 86
4.2.8 EINORDNUNG DER GEFUNDENEN GENE ZU FUNKTIONEN UND IN
HYPHENASSOZIIERTE
STOFFWECHSELWEGE 87
5 DISKUSSION 91
6 ZUSAMMENFASSUNG 107
7 SUMMARY 109
LITERATURVERZEICHNIS 111
V
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