Die Rolle von Metallothionein in einem Mausmodell der ischämischen Kardiomyopathie:
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 9
1. EINLEITUNG 12
1.1 KORONARE HERZERKRANKUNG 12
1.2 ISCHAEMIE UND REPERFUSION (L/R) 13
1.3 KURZZEITIGE UND/ODER REPETITIVE MYOKARDISCHAEMIE 14
1.3.1 PRAEKONDITIONIERUNG 14
1.3.2 MYOKARDIALES *STUNNING 15
1.3.3 HIBERNIERENDES MYOKARD 16
1.4 HISTOPATHOLOGISCHE VERAENDERUNGEN NACH L/R 18
1.5 INFLAMMATORISCHE PROZESSE NACH L/R 19
1.5.1 ZYTOKINE (TNF
-C
UND IL-10) 20
1.5.2 CHEMOKINE (CCL2, CCL3 UND CCL4) 22
1.6 SAUERSTOFFRADIKALABHAENGIGE FAKTOREN NACH L/R 24
1.6.1 HAEMOXYGENASE UND GLUTATHIONPEROXIDASE 25
1.7 GEWEBEUMBAU NACH L/R (OSTEOPONTIN UND TENASCIN) 26
1.8 METALLOTHIONEIN (MT) IM RAHMEN DER L/R 28
1.8.1 FUNKTIONEN DES METALLOTHIONEINS 29
1.9 MAUSMODELL DER MYOKARDIALEN L/R 31
1.10 HYPOTHESE 32
2. METHODEN 34
2.1 EINFUEHRUNG DER MAUSSTAEMME 34
2.1.1 C57/BL6- UND SV129 WT-MAEUSE 34
2.1.2 METALLOTHIONEIN 1/2 DEFIZIENTE SV129 MAEUSE 34
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6
2.2 TIEROPERATIVE TECHNIKEN 34
2.2.1 IMPLANTATION DER LIGATUR 34
2.2.2 PROTOKOLL DER MYOKARDIALEN L/R 35
2.2.3 ENTNAHME DER HERZEN 37
2.3 HISTOLOGISCHE TECHNIKEN 38
2.3.1 FIXIERUNGSMETHODEN 38
2.3.2 AUSWAHL DER PRAEPARATE 38
2.3.3 VORBEREITENDE UND ABSCHLIESSENDE SCHRITTE BEI HISTOLOGISCHEN
FAERBUNGEN 39
2.3.4 HAEMATOXYLIN-EOSIN FAERBUNG 39
2.3.5 SIRIUS-ROT FAERBUNG 40
2.4 IMMUNHISTOCHEMISCHE TECHNIKEN 40
2.4.1 PRINZIP DER AVIDIN-BIOTIN-PEROXIDASE-KOMPLEX METHODE 40
2.4.2 MAC-2 FAERBUNG 41
2.4.3 MCA771G FAERBUNG 42
2.5 HISTOLOGISCHE AUSWERTUNG 42
2.5.1 PLANIMETRISCHE AUSWERTUNG DES KOLLAGENGEHALTES 43
2.5.2 AUSWERTUNG DER MAKROPHAGEN UND NEUTROPHILEN GRANULOZYTEN 43
2.6 ECHOKARDIOGRAPHIE ZUR BESTIMMUNG DER VENTRIKULAEREN FUNKTION 44
2.7 MOLEKULARBIOLOGISCHE TECHNIKEN 45
2.7.1 ISOLATION DER MRNA 45
2.7.2 CDNA- SYNTHESE 46
2.7.3 PRINZIP DER KONVENTIONELLEN PCR 46
2.7.4 REAL-TIME QUANTITATIVE POLYMERASEKETTENREAKTION (RT-QPCR) 47
2.7.5 SPEZIFISCHE UND NICHT-SPEZIFISCHE DETEKTIONSSYSTEME 47
2.7.6 DOUBLE DYE SONDEN/TAQMAN-SONDEN 48
7
2.7.7 TAQMAN RT-PCR 49
2.8 STATISTIK 51
3. ERGEBNISSE 52
3.1 VERSUCHSTIERE - EINTEILUNG UND STERBLICHKEIT 52
3.2 ERGEBNISSE DER HISTOLOGIE 53
3.2.1 HISTOLOGISCHE CHARAKTERISTIKA DER NATIV- UND KONTROLLMAEUSE 53
3.3 MT-1 UND 2 MRNA EXPRESSION NACH L/R IN WT-MAEUSEN 54
3.4 FIBROSE DES MYOKARDS NACH L/R 56
3.4.1 ZEICHEN DER FIBROSE ANHAND DER HE-GEFAERBTEN PRAEPARATE 56
3.4.2 ZEICHEN DER FIBROSE ANHAND DER SR-GEFAERBTEN PRAEPARATE 57
3.5 LINKSVENTRIKULAERE DYSFUNKTION IM RAHMEN DER L/R 61
3.6 ZELLULAERE UNTERSCHIEDE IM RAHMEN DER L/R 62
3.6.1 MAKROPHAGEN (MAC-2) 62
3.6.2 NEUTROPHILE GRANULOZYTEN (MCA) 67
3.7 INFLAMMATIONSKASKADE NACH L/R 72
3.7.1 HAEMOXYGENASE-1 72
3.7.2 GLUTATHION PEROXIDASE-1 73
3.7.3 TUMOR NEKROSE FAKTOR-A 74
3.7.4 LNTERLEUKIN-10 75
3.7.5 C-C CHEMOKIN LIGAND 2 76
3.7.6 C-C CHEMOKIN REZEPTOR 2 77
3.7.7 C-C CHEMOKIN LIGAND 3 78
3.7.8 C-C CHEMOKIN LIGAND 4 79
3.7.9 OSTEOPONTIN-1 80
3.7.10 TENASCIN C 81
8
4. DISKUSSION
83
4.1
EINFUEHRUNG 83
4.2
MAUSMODELL DER L/R
84
4.3
METALLOTHIONEIN 85
4.4
VENTRIKULAERE DYSFUNKTION 86
4.5
ZELLULARE UNTERSCHIEDE 87
4.6
MARKER DES OXIDATIVEN STRESSES 89
4.7
INFLAMMATORISCHE SIGNALKASKADE 92
4.8
MEDIATOREN DES GEWEBEUMBAUS 95
5.
ZUSAMMENFASSUNG
97
6.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS 99
7.
LITERATURVERZEICHNIS 101
8.
DANKSAGUNG
123
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