Die Charakterisierung der Funktion des Lipidtransporters ABCA3 in der Milchdrüse (am Mausmodell):
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| adam_text | AUS DER KINDERKLINIK UND KINDERPOLIKLINIK IM DR. VON HAUNERSCHEN
KINDERSPITAL DER
LUDWIG-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET MUENCHEN
DIREKTOR: PROF. DR. MED. DR. SEI. NAT. CHRISTOPH KLEIN
DIE CHARAKTERISIERUNG DER FUNKTION DES LIPIDTRANSPORTERS ABCA3 IN DER
MILCHDRUESE
(AM MAUSMODELL)
DISSERTATION
ZUM ERWERB DES DOKTORGRADES DER MEDIZIN
AN DER MEDIZINISCHEN FAKULTAET DER
LUDWIG-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET ZU MUENCHEN
VORGELEGT VON
MARESA SCHICKER
AUS MUENCHEN
2014
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 6
1.1. DIE MILCHDRUESE 6
1.1.1. ENTWICKLUNG UND AUFBAU DER MILCHDRUESE 8
1.1.2. MECHANISMEN DER MILCHSEKRETION 10
1.1.3. LIPIDSYNTHESE UND
-SEKRETION
12
1.1.4. MILK FAT GLOBULES UND PHOSPHOLIPIDE 12
1.2. ABC-TRANSPORTER 16
1.2.1. STRUKTUR UND FUNKTION 17
1.2.2. ASSOZIIERTE KRANKHEITEN 19
1.2.3. DIE ABCA-SUBFAMILIE 20
1.3. ABCA3 21
1.3.1. DIE ROLLE VON ABCA3 IN DER LUNGE 21
1.3.2. DIE ROLLE VON ABCA3 IN DER MILCHDRUESE 23
1.4. MAUSMODELL 24
1.4.1. DAS CRE-LOXP-SYSTEM 24
1.4.2. MILCHDRUESENSPEZIFISCHE PROMOTER 27
2. ZIELSETZUNG 29
3. METHODEN UND MATERIAL 30
3.1. TIEREXPERIMENTELLE METHODEN 30
3.1.1. MAUSZUCHT 30
3.1.2. TRANSGENE LINIEN 31
3.1.3. MELKEN 33
3.1.3.1. AUFBAU DER MELKVORRICHTUNG 34
3.1.3.2. DER MELKVORGANG 35
3.1.4. GEWEBEENTNAHME 37
3.2. MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 37
3.2.1. DNA-EXTRAKTION 37
3
3.2.2. RN A-EXTRAKTION UND REVERSE T RANSKRIPTION 39
3.2.3. POLYMERASE-KETTENREAKTION 40
3.2.4. GELELKTROPHORESE 45
3.2.5. MASSENSPEKTROSKOPIE 46
3.3. STATISTISCHE METHODEN 46
4. ERGEBNISSE 47
4.1. KONDITIONALE GENDELETION VON ABC A3 IN DER MILCHDRUESE 47
4.1.1. KREUZUNG DER MAUSLINIEN UND GENOTYPISIERUNG 47
4.1.2. FLOX-NACHWEIS MITTELS GENOMISCHER DNA 50
4.1.3. QUANTITATIVE BESTIMMUNG DES EXPRESSIONSLEVELS FUER ABCA3 52
4.1.4. QUANTITATIVE BESTIMMUNG DER EXPRESSIONSLEVEL WEITERER GENE 53
4.2. OPTIMIERUNG DES MELKVORGANGS 54
4.3. MAMMA UND LAKTATION 55
4.3.1. MILCHMENGE 56
4.3.2. GEWICHT DER PUPS 59
4.4. LIPIDANALYSE DER MILCH 61
4.4.1. CHOLESTERIN 61
4.4.2. PHOSPHOLIPIDZUSAMMENSETZUNG DER MAUSMILCH 62
4.4.2.1. VERGLEICH DER PHOSPHOLIPIDE 63
4.4.2.2. VERGLEICH DER PHOSPHATIDYLCHOLIN-SUBSPEZIES 65
5. DISKUSSION 68
5.1. MILCHGEWINNUNG DURCH MELKEN 68
5.2. KONDITIONALER KNOCKOUT VON ABCA3 IM MAMMAGEWEBE 69
5.3. DAS CRE-LOXP-SYSTEM UNTER DEM OBLG-PROMOTER 70
5.4. MILCHMENGE UND WURFGEWICHT 71
5.5. CHOLESTERIN 72
5.6. PHOSPHOLIPIDE 72
5.7. GENREGULATION 73
5.8. WEITERE ABC-TRANSPORTER 75
4
6. ZUSAMMENFASSUNG 76
7. ANHANG 78
7.1. MELKPROTOKOLL 78
7.2. DATENTABELLE DER GESAMT-PHOSPHOLIPIDAUSWERTUNG 82
7.3. DATENTABELLEN DER PHOSPHATIDYCHOLINAUSWERTUNG 84
7.4. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 93
1.5. T ABELLENVERZEICHNIS 95
7.6. ABBILDUNGSVERZEICHNIS 95
8. LITERATURVERZEICHNIS 97
9. VEROEFFENTLICHUNG 109
10. DANKSAGUNG 110
5
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