In-vitro-Stimulation humaner peripherer mononukleärer Blutzellen mittels PANC-1-Plasmamembranfragmenten: ein Modell zur Generierung humaner PANC-1-bindender spezifischer Antikörper
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INHALTSVERZEICHNIS
1.EINLEITUNG 3
1.1 DAS PANKREASKARZINOM:
EPIDEMIOLOGIE, KLINIK, THERAPIE
UND PROGNOSE 3
1.2 ANTIKOERPER-THERAPIE SOLIDER TUMOREN 7
1.2.1 WIRKWEISE MONOKLONALER ANTIKOERPER
ZUR THERAPIE SOLIDER TUMOREN 7
1.2.2 PROBLEMSTELLUNGEN BEI DER ANTIKOERPER-THERAPIE 9
1.2.3 ANTIKOERPER-THERAPIE GASTROINTESTINALER TUMOREN 11
1.3 HUMANE
B-ZELL STIMULATION, CD40,
IL2, IL4,
IL21 16
1.4 ZIELSETZUNG DER ARBEIT 17
2. MATERIAL UND
METHODEN 18
2.1 METHODEN 18
2.1.1 ISOLIERUNG VON PBMCS
MITTELS FICOLL-DICHTEGRADIENTEN-ZENTRIFUGATION 18
2.1.2 PLASMAZELLMEMBRAN-ISOLATION MITTELS ZWEI-PHASENSYSTEM
AUS
POLYETHYLENGLYKOL UND DEXTRAN 18
2.1.3 ELISA 19
2.1.3.1 NACHWEIS EINER SPEZIFISCHEN
IGM- BZW. IGG-BINDUNG AN PANC-1-
PLASMAMEMBRANFRAGMENTE MITTELS
ELISA 19
2.1.3.2 NACHWEIS EINER SPEZIFISCHEN
IGM- BZW. IGG-BINDUNG AN PANC-1-,
MIAPACA-2- UND
HEK-293-ZELLOBERFLAECHEN MITTELS ELISA 20
2.1.4 NACHWEIS PANC-1-ZELLOBERFLAECHEN BINDENDER
IGG-AK DURCH IMMUNFLUORESZENZ 20
2.1.5 PROTEINMENGENBESTIMMUNG MIT EINEM
BICINCHONINSAEURE(BCA)-ASSAY 22
2.1.6 5 -NUCLEOTIDASE NACHWEIS MIT
ADENOSIN-5 -MONOPHOSPHAT UND EINEM
MALACHITE GREEN PHOSPHATE
ASSAY KIT 23
2.1.7 SDS GELELEKTROPHORESE 23
2.1.8 COOMASSIEFAERBUNG 24
2.2 IN VITRO STIMULATION HUMANER PBMCS 24
2.3 MATERIALIEN 28
2.3.1 CHEMIKALIEN 28
2.3.2 GEBRAUCHSARTIKEL UND
GERAETE 29
2.3.3 ANTIKOERPER 30
2.3.4 ZELLLINIEN 30
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2
3. ERGEBNISSE
31
3.1 PRAEPARATION
DES ANTIGENS 31
3.2 IN VITRO
STIMULATION VON PBMCS MIT
A-CD-40-AK, IL2
UND IL4 33
3.2.1 NACHWEIS EINER SPEZIFISCHEN
IGM-BINDUNG AN PANC-1
-PLASMAMEMBRANFRAGMENTE
BZW. PANC-1-, MIAPACA-2-, HEK293-ZELLOBERFLAECHEN MITTELS ELISA 33
3.2.2 NACHWEIS EINER SPEZIFISCHEN
IGG-BINDUNG AN PANC-1-PLASMAMEMBRANFRAGMENTE
BZW. PANC-1-, MIAPACA-2-, HEK-293-ZELLOBERFLAECHEN
MITTELS ELISA 38
3.3 IN VITRO STIMULATION VON PBMCS
MIT A-CD-40-AK, IL4 UND IL21 41
3.3.1 NACHWEIS EINER SPEZIFISCHEN
IGG-BINDUNG AN PANC-1-PLASMAMEMBRANFRAGMENTE
BZW. PANC-1-, MIAPACA-2-, HEK-293-ZELLOBERFLAECHEN MITTELS
ELISA 41
3.3.2 NACHWEIS EINER SPEZIFISCHEN
IGG-BINDUNG AN PANC-1
-ZELLOBERFLAECHEN MITTELS
IMMUNFLUORESZENZ 46
4. DISKUSSION
48
4.1 PANC-1-PLASMAMEMBRANFRAGMENTE
ALS B^ZELL STIMULIERENDES ANTIGEN 48
4.2 IN VITRO STIMULATION
MIT R10, ANTIGEN,
A-CD40-AK, IL2 UND
IL4 52
4.3 IN VITRO STIMULATION MIT
R10, ANTIGEN, A-CD40-AK, IL4
UND IL21 54
5. ZUSAMMENFASSUNG
59
6. LITERATURVERZEICHNIS
60
7. ANHANG
7.1 DANKSAGUNGEN
7.2 LEBENSLAUF
80
80
81
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