Die Rolle des ETS-Transkriptionsfaktors ER81 bei Herzinsuffizienz:
Gespeichert in:
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Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
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2014
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adam_text | AUS DEM INSTITUT FUER EXPERIMENTELLE UND KLINISCHE PHARMAKOLOGIE UND
TOXIKOLOGIE
DER ALBERT-LUDWIGS-UNIVERSITAET FREIBURG I. BR.
DIE ROLLE
DES ETS-TRANSKRIPTIONSFAKTORS
ER81
BEI HERZINSUFFIZIENZ
INAUGURAL-DISSERTATION
ERLANGUNG DES MEDIZINISCHEN DOKTORGRADES
DER MEDIZINISCHEN FAKULTAET
DER ALBERT-LUDWIGS-UNIVERSITAET
FREIBURG I. BR.
VORGELEGT 2014
VON STEPHAN ROESNER
GEBOREN IN LAHR/SCHWARZWALD
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INHALTSVERZEICHNIS
I ZUSAMMENFASSUNG 1
II EINLEITUNG 2
1 HERZINSUFFIZIENZ 2
1.1 DEFINITION UND EINTEILUNG 2
1.2 EPIDEMIOLOGIE 2
1.3 AETIOLOGIE 3
1.4 KLINIK
UND KLASSIFIKATION 3
1.5 THERAPIE UND PROGNOSE 4
2 PATHOPHYSIOLOGIE DER HERZINSUFFIZIENZ 7
2.1 KARDIALES REMODELING 7
2.1.1 HYPERTROPHIE-REGULIERENDES NETZWERK 7
2.2 REVERSES REMODELING 9
2.3 ROLLE DES SYMPATHIKUS 10
2.3.1 DER SS-ADRENERGE SIGNALWEG UNTER PHYSIOLOGISCHEN BEDINGUNGEN 10
2.3.2 DER SS-ADRENERGE SIGNALWEG IN DER HERZINSUFFIZIENZ 12
2.3.3 PKA-UNABHAENGIGE SIGNALWEGE DER ADRENERGEN SIGNALTRANSDUKTION 14
2.3.4 SS-BLOCKER-THERAPIE 14
3 DER ETS-TRANSKRIPTIONSFAKTOR ER81/ETV1 15
3.1 DIE FAMILIE DER ETS-TRANSKRIPTIONSFAKTOREN 15
3.2 DER ETS-TRANSKRIPTIONSFAKTOR ETV1/ER81 16
3.3 AKTIVIERUNG VON ER81/ETV1 17
3.4 FUNKTION VON ER81/ETV1 18
3.4.1 ZIELGENE VON ER81/ETV1 19
4 ZIEL DER ARBEIT 19
III MATERIAL 20
1 REAGENZIEN UND CHEMIKALIEN 20
2 KITS 21
3 ANTIKOERPER 21
4 PRIMER 22
5 GERAETE 22
6 SOFTWARE 23
IV METHODEN 24
1 MAUSMODELLE 24
1.1 KARDIOMYOZYTEN-SPEZIFISCHE UEBEREXPRESSION VON ER81 (ER81
AMHC
) 24
1.1.1 GENERIERUNG DES ERSL *
0
- MAUSMODELLS 24
1.1.2 KREUZUNG 25
1.1.3 * GENOTYPISIERUNG 25
1.2 KARDIOMYOZYTEN-SPEZIFISCHE DELETION VON ER81 (ER81
MLCCRE
) 27
1.2.1 GENERIERUNG DES ER81
MLCCRE
-MAUSMODELLS 27
1.2.2 KREUZUNG 28
1.2.3 GENOTYPISIERUNG 28
1.3 HALTUNG UND ZUCHT 29
2 EXPERIMENTELLE HYPERTROPHIEMODELLE 29
2.1 TRANSVERSE AORTENKONSTRIKTION (TAC) 30
2.2 MIKROOSMOTISCHE PUMPEN 30
3 KARDIALE FUNKTIONSDIAGNOSTIK 31
3.1 ECHOKARDIOGRAPHIE 31
3.2 HERZKATHETERUNTERSUCHUNG 31
4 HISTOLOGIE AN PARAFFINSCHNITTEN 32
4.1 ANFERTIGUNG VON HERZSCHNITTEN 32
4.2 HAEMATOXYLIN-EOSIN-FAERBUNG (HE) 32
4.3 SIRIUS-ROT-FAERBUNG (SR) 33
4.4 WEIZENKEIM-AGGLUTININ-FAERBUNG 34
5 IN-VITRO VERSUCHE 34
5.1 ISOLATION ADULTER KARDIOMYOZYTEN UND NICHT-MYOZYTEN 34
6 RNA-ANALYSE 36
6.1 RNA-ISOLATION UND -QUANTIFIZIERUNG 36
6.2 SYNTHESE VON CDNA 36
6.3 QUANTITATIVE REAL-TIME PCR (QPCR) 37
6.3.1 DURCHFUEHRUNG 37
6.3.2 SCHMELZKURVEN 38
6.3.3 AUSWERTUNG 38
6.4 MICROARRAY-ANALYSE 38
6.4.1 DURCHFUEHRUNG 38
6.4.2 AUSWERTUNG 39
7 PROTEINANALYSE 39
7.1 PROTEINISOLATION UND -QUANTIFIZIERUNG 39
7.2 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) 40
7.3 PROTEINTRANSFER 41
7.4 DETEKTION UND AUSWERTUNG 43
8 CAMP-MESSUNG 43
8.1 DURCHFUEHRUNG 43
8.2 MESSUNG UND AUSWERTUNG 44
9 STATISTISCHE AUSWERTUNG UND DARSTELLUNG 44
V ERGEBNISSE 45
1 EXPRESSION VON ETV1/ER81 45
1.1 ETVL/ER81-EXPRESSION BEI HERZINSUFFIZIENZ 45
1.2 ZELLTYP-SPEZIFISCHE EXPRESSION VON ER81 46
2 KARDIOMYOZYTEN-SPEZIFISCHE UEBEREXPRESSION VON ER81 47
2.1 CHARAKTERISIERUNG VON ER81
AMHC
-MAEUSEN 47
2.2 UEBERLEBENSANALYSE 48
2.3 KARDIALE FUNKTION VON ERSL^^-TRANSGENEN MAEUSEN 49
2.3.1 ECHOKARDIOGRAPHIE 49
2.3.2 HERZKATHETERUNTERSUCHUNG 50
2.3.3 HERZKATHETERUNTERSUCHUNG UNTER AKUTER DOBUTAMINSTIMULATION 51
2.4 CAMP-MESSUNG UND PHOSPHORYLIERUNG 52
2.4.1 VENTRIKULAERE CAMP-SPIEGEL 52
2.4.2 PHOSPHORYLIERUNG VON PROTEINEN DES ADRENERGEN SIGNALWEGS 53
2.5 KARDIALE MORPHOLOGIE UNTER BASALBEDINGUNGEN 54
2.5.1 VENTRIKELGEWICHT UND KARDIOMYOZYTENQUERSCHNITT 54
2.5.2 DETEKTION DER KARDIALEN FIBROSE 55
2.5.3 GENEXPRESSION 56
2.6 KARDIALE MORPHOLOGIE NACH ISOPRENALIN-BEHANDLUNG 57
2.7 AKTIVIERUNG HYPERTROPHIE-ASSOZIIERTER SIGNALWEGE 59
3 KARDIOMYOZYTEN-SPEZIFISCHE DELETION VON ER81 60
3.1 CHARAKTERISIERUNG VON ER81
MLCCRE
-MAEUSEN 60
3.2 KARDIALE FUNKTION VON ER81
MLCCRE
-MAEUSEN 62
3.2.1 ECHOKARDIOGRAPHIE 62
3.2.2 HERZKATHETERUNTERSUCHUNG 63
3.2.3 HERZKATHETERUNTERSUCHUNG UNTER AKUTER DOBUTAMINSTIMULATION 64
3.2.4 HERZKATHETERUNTERSUCHUNG NACH 2-WOECHIGER
ISOPRENALINBEHANDLUNG 65
3.3 KARDIALE MORPHOLOGIE VON ER81
MLCCRE
-MAEUSEN 66
3.3.1 KARDIALE HYPERTROPHIE 66
3.3.2 KARDIALE FIBROSE 68
3.4 AKTIVIERUNG HYPERTROPHIE-ASSOZIIERTER SIGNALWEGE 70
4 MOLEKULARE MECHANISMEN 71
4.1 MICROARRAY-ANALYSE DES ER81
AMHC
-MODELLS 71
4.1.1 GENEXPRESSIONSPROFIL IM HERZ VON ER81
AMHC
-TRANSGENEN MAEUSEN 71
4.1.2 EXPRESSIONSVERAENDERUNGEN DER ADRENERGEN UND CA
2+
-ABHAENGIGEN
SIGNALKASKADEN IM ER81
AMHC
-MODELL 75
4.1.3 VALIDIERUNG DES EXPRESSION DER PKA 77
VI DISKUSSION 78
1 KERNBEFUNDE DER VORLIEGENDEN ARBEIT 78
2 ER81-AKTIVIERUNG UND -EXPRESSION 78
3 ER81-VERMITTELTE DESENSITISIERUNG DES SS-ADRENERGEN SIGNALWEGS 79
3.1 ER81
AMHC
-MAEUSE 80
3.1.1 KARDIALE FUNKTION 80
3.1.2 CAMP- UND PKA-SIGNALE 81
3.1.3 KARDIALES REMODELING 82
3.2 ER81
MLCCRE
-MAEUSE 83
3.2.1 KARDIALE FUNKTION 83
3.2.2 KARDIALES REMODELING 83
3.3 ER81-TARGETGENE 84
3.3.1 DIE REGULATORISCHEN UNTEREINHEITEN DER PROTEINKINASE A 84
4 DIE ROLLE VON ER81 BEI HERZINSUFFIZIENZ 87
4.1 SS-ADRENERGE SIGNALUEBERTRAGUNG 88
4.1.1 EXPRESSION UND AKTIVITAET DER SS-ADRENERGEN SIGNALUEBERTRAGUNG 88
4.1.2 KOMPARTIMENTIERUNG DER SS-ADRENERGEN SIGNALUEBERTRAGUNG 88
4.2 CALCIUM-ABHAENGIGE SIGNALWEGE 90
4.2.1 CALCIUM-TRANSPORT 90
4.2.2 CA
2+
/CALMODULIN-ABHAENGIGE SIGNALTRANSDUKTION 92
4.3 ER81 ALS PKA-/MAPK-AKTIVIERTER TRANSKRIPTIONSFAKTOR 93
5 FAZIT 94
VII VERZEICHNISSE 96
1 LITERATURVERZEICHNIS 96
2 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 116
VIII VEROEFFENTLICHUNGEN 122
1 PUBLIKATIONEN 122
2 KONGRESSBEITRAEGE 122
3 PREISE UND AUSZEICHNUNGEN 123
IX LEBENSLAUF. 124
X DANKSAGUNG 125
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