Immunoassay-Entwicklung für die optische Bestimmung von humaner Pankreas-Lipase und dem Arzneistoff Amitriptylin:
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Berlin
Rhombos-Verl.
2014
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|---|---|
| adam_text | INHALT
1 MOTIVATION UND ZIELSETZUNG 1
2 THEORIE 5
2.1 PHYSIKALISCHE UND PHYSIKOCHEMISCHE GRUNDLAGEN 5
2.1.1 BRECHUNGSINDEX 5
2.1.2 LICHTBRECHUNG UND -REFLEXION 6
2.1.3 REFLEKTIVITAET UND TRANSMISSION 7
2.1.4 TOTALREFLEXION UND EVANESZENTES FELD 7
2.1.5 INTERFERENZ AN DUENNEN SCHICHTEN 9
2.1.6 LUMINESZENZ 10
2.2 MESSMETHODEN 13
2.2.1 REFLEKTOMETRISCHE INTERFERENZSPEKTROSKOPIE 13
2.2.2 TOTALE INTERNE REFLEXION-FLUORESZENZ 14
2.2.3 OBERFLAECHENCHARAKTERISIERUNG 15
2.3 BIOCHEMISCHE UND BIOANALYTISCHE GRUNDLAGEN 20
2.3.1 PROTEINE 20
2.3.2 ANTIKOERPER 22
2.3.3 ANTIGENE 25
2.3.4 ANTIKOERPER-ANTIGEN-WECHSELWIRKUNGEN 26
2.3.5 UNTERSUCHTE ANALYTE 26
2.3.6 IMMUNOASSAY TESTFORMATE 28
2.4 THERAPEUTISCHES DRUG MONITORING (TDM) 34
2.4.1 ALLGEMEINES 34
2.4.2 TRIZYKLISCHE ANTIDEPRESSIVA 36
3 MATERIAL UND METHODEN 37
3.1 VERBRAUCHSMATERIALIEN 37
3.1.1 CHEMIKALIEN 37
3.1.2 PROTEINE 38
3.1.3 PUFFERAUSTAUSCH BEI PROTEINLOESUNGEN 40
3.1.4 FLUORESZENZMARKIERUNG VON PROTEINEN 41
3.1.5 LOESUNGEN 42
3.1.6 TRANSDUCER 43
3.2 GERAETE 45
3.2.1 RLFS 45
3.2.2 TIRF 46
3.2.3 WEITERE GERAETE 48
3.3 DATENAUSWERTUNG 50
3.3.1 AUSWERTUNG RLFS 50
3.3.2 AUSWERTUNG TIRF 54
VII
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4 OBERFLAECHENMODIFIZIERUNG 57
4.1 VORBEREITENDE FUNKTIONALISIERUNGSSCHRITTE 57
4.1.1 REINIGUNG UND AKTIVIERUNG DER GLASOBERFLAECHE 57
4.1.2 SILANISIERUNG 58
4.1.3 BESCHICHTUNG MIT EINEM BIOPOLYMER 59
4.1.4 UMFUNKTIONALISIERUNG MIT GLUTARSAEUREANHYDRID 62
4.2 CARBODIIMID-VERMITTELTE IMMOBILISIERUNG 63
4.2.1 KOVALENTE IMMOBILISIERUNG KLEINER ORGANISCHER MOLEKUELE 63
4.2.2 KOVALENTE IMMOBILISIERUNG VON PROTEINEN 64
4.3 PROTEIN-IMMOBILISIERUNG MITTELS DMP-LINKER 68
4.4 IMMOBILISIERUNG MIT KUPFERFREIER CLICK-CHEMIE 69
4.4.1 FUNKTIONALISIERUNG DER PANKREAS-LIPASE 69
4.4.2 CYCLOOCTIN-FUNKTIONALISIERTE OBERFLAECHE 70
4.4.3 AZID-FUNKTIONALISIERTE OBERFLAECHE 71
4.5 CHARAKTERISIERUNG DER MODIFIZIERTEN OBERFLAECHEN 72
4.5.1 OBERFLAECHENTOPOGRAPHIE 72
4.5.2 SCHWINGUNGSSPEKTREN DER ORGANISCHEN SCHICHTEN 75
4.5.3 BENETZUNGSFAEHIGKEIT 77
5 ASSAY-ENTWICKLUNG 81
5.1 QUANTITATIVER IMMUNOASSAY FUER DIE PANKREAS-LIPASE 82
5.1.1 EXPERIMENTE ZUM SANDWICH-ASSAY 82
5.1.2 ONLINE-SANDWICH-ASSAY 87
5.1.3 BINDUNGSHEMMTEST 97
5.1.4 VERGLEICH VERSCHIEDENER POLY- UND MONOKLONALER ANTIKOERPER 100
5.1.5 ALTERNATIVE ANBINDUNG DER LIPASE MITTELS CLICK-CHEMIE 104
5.1.6 KONZENTRATIONSABHAENGIGKEIT DES BINDUNGSSIGNALS 106
5.1.7 KALIBRIERUNG DES BINDUNGSHEMMTEST IN PUFFER 108
5.1.8 MARKIEREN VON A-HPL ANTIKOERPERN MIT DY-652 111
5.1.9 MESSUNGEN AUF EINEM MINIATURISIERTEN TIRF-AUFBAU 113
5.2 QUANTITATIVER IMMUNOASSAY FUER AMITRIPTYLIN 117
5.2.1 BINDUNGSHEMMTEST 117
5.2.2 OPTIMIERUNG DES BINDUNGSSIGNALS 119
5.2.3 KALIBRIERUNG IN PUFFER 122
5.2.4 KREUZREAKTIVITAETEN MIT ANDEREN TCAS 125
5.2.5 INTER-T
RANSDUCER-REPRODUZIERBARKEIT 127
5.2.6 LANGZEITSTABILITAET DER SENSORBESCHICHTUNG 129
6 ZUSAMMENFASSUNG UND AUSBLICK 133
6.1 EIN IMMUNOASSAY FUER DIE HUMANE PANKREAS-LIPASE 133
6.2 EIN IMMUNOASSAY FUER AMITRIPTYLIN 135
VIII
6.3 ALLGEMEINER AUSBLICK 137
7 LITERATUR 138
8 ANHANG 149
8.1 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 149
8.2 FIT-PARAMETER 151
8.2.1 HPL-ASSAY: FIT-PARAMETER FUER DIE KALIBRIERFUNKTIONEN 151
8.2.2 AMT-ASSAY: FIT-PARAMETER FUER DIE KALIBRIERFUNKTIONEN 152
8.3 GERAETEEINSTELLUNGEN 153
8.3.1 RASTERKRAFTMIKROSKOP (AFM) 153
8.3.2 RAMANSPEKTROMETER 153
8.4 FOERDERHINWEIS 155
8.5 AKADEMISCHE LEHRER 156
8.6 LEBENSLAUF 157
IX
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