Einfluss n3/n6-mehrfach ungesättigter Fettsäuren auf die plazentare Immunantwort:
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| adam_text | AUS DER KINDERKLINIK UND KINDERPOLIKLINIK
IM DR. VON HAUNERSCHEN KINDERSPITAL DER
LUDWIG-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET MUENCHEN
FORSCHUNGSZENTRUM KUBUS
DIREKTOR: PROF. DR. MED. DR. SEI. NAT. CHRISTOPH KLEIN
EINFLUSS N3/N6-MEHRFACH UNGESAETTIGTER FETTSAEUREN
AUF DIE PLAZENTARE IMMUNANTWORT
DISSERTATION
ZUM ERWERB DES DOKTORGRADES DER HUMANBIOLOGIE
AN DER MEDIZINISCHEN FAKULTAET DER
LUDWIG-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET ZU MUENCHEN
VORGELEGT VON
SANDRA ZIMMERMANN
AUS
LANDSHUT
2014
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 6
1.1. LANGKETTIGE MEHRFACH UNGESAETTIGTE FETTSAEUREN 6
1.1.1. ENTSTEHUNG UND AUFBAU 6
1.1.2. DIE ROLLE DER LC-PUFAS FUER INFLAMMATION,
ANTUENFLAMMATION UND DIE EMBRYONALENTWICKLUNG 8
1.2. INFLAMMATION IN DER PLAZENTA 11
2. ZIELSETZUNG 12
3. MATERIAL UND METHODEN 13
3.1. VERBRAUCHSMATERIAL UND TECHNISCHE AUSRUESTUNG 13
3.1.1. CHEMIKALIEN, REAGENZIEN, ZELLMATERIAL 13
3.1.2. GERAETE, OPTISCHE AUSRUESTUNG, SONSTIGE HILFSMITTEL 18
3.2. ZELLKULTUR 19
3.2.1. AUFTAUEN UND KULTIVIEREN DER ZELLEN 19
3.2.2. SPLITTEN DER ZELLEN 20
3.2.3. STIMULATION DER ZELLEN 20
3.3. HERSTELLUNG DER FETTSAEURELOESUNGEN 22
3.4. ERSTELLUNG DES STIMULATIONSPROTOKOLLS 23
3.5. RNA-EXTRAKTION 26
3.6. REVERSE TRANSKRIPTION 27
3.7. RT-PCR 28
3.8. GELELEKTROPHORESE 30
3
INHALTSVERZEICHNIS
3.9. REAL TIME RT-PCR 32
3.10. DETTA-DELTA-CT-METHODE 34
3.11. ZYTOKINBESTIMMUNG IN ZELLKULTURUEBERSTAENDEN (BIOPLEX) 35
3.12. DURCHFLUSSZYTOMETRIE 39
3.13. STATISTISCHE AUSWERTUNG 41
4. ERGEBNISSE 43
4.1. BESTIMMUNG DER BASALEN ZYTOKINPROLIFERATIONSMUSTER 43
4.1.1. ZELLKULTIVIERUNG 43
4.1.2! RT-PCR MIT GAPDH 44
4.1.3. RT-PCR MIT ZYTOKINPRIMEM 44
4.2. SELEKTION DER ZELLLINIEN UND ZYTOKINE 45
4.3. ZYTOKINBESTIMMUNG IN ZELLKULTURQBERSTAENDEN (BIOPLEX)... 46
4.4. HERSTELLUNG DER FETTSAEURELOESUNGEN 47
4.5. STIMULATION DER ZELLEN MIT FETTSAEURELOESUNGEN 49
4.6. ENTWICKLUNG EINES STIMULATIONSPROTOKOLLS ALS MODELL FUER DIE
PLAZENTARE INFLAMMATION ; 50
4.6.1. STIMULATION MIT LIPOPOLYSACCHARID 50
4.6.2. STIMULATION MIT TNF-A 50
4.6.3. STIMULATION MIT PHORBOL 12-MYRISTAT 13-ACETAT 51
4.6.4. STIMULATION MIT CHOLERATOXIN 52
4
INHALTSVERZEICHNIS
4.7. BESTIMMUNG VON OBERFLACHENPROTEINEN MIT HILFE DER
DUERCHFLUESSZYTOMETRIE 52
4.8. UNTERSUCHUNG, WIE MEHRFACH UNGESAETTIGTE FETTSAUREN DIE
INFLAMMATORISCHE ANTWORT PLAZENTARER ZELLLINIEN BEEINFLUSSEN 53
4.8.1. STIMULATION MIT TNF-A UND PALMITINSAEURE 53
4.8.2. STIMULATION MIT TNF-A UND OELSAEURE 54
4.8.3. STIMULATION MIT TNF-A UND ARACHIDONSAEURE 55
4.8.4. STIMULATION MIT TNF-A UND EICOSAPENTAENSAEURE 56
4.8.5. STIMULATION MIT TNF-A UND DOCOSAHEXAENSAEURE 58
4.8.6. STATISTISCHE AUSWERTUNG DER STIMULATIONEN 59
5. DISKUSSION 60
5.1. ZELLLINIEN ALS MODELL FUER DIE PLAZENTA 60
5.2. BASALE ZYTOKINPROLIFERATIONSMUSTER 61
5.3. STIMULATION DER ZELLEN, UM INFLAMMATION MIT VERMEHRTER
ZYTOKINEXPRESSION HERVORZURUFEN 62
5.4. WIRKUNG DER MEHRFACH UNGESAETTIGTEN FETTSAEUREN 63
5.5. AUSBLICK 67
6. ZUSAMMENFASSUNG. 69
7. LITERATURVERZEICHNIS 71
8. ANHANG 75
8.1. ABKQRZUNGSVERZEICHNIS 75
8.2. TABELLENVERZEICHNIS 76
8.3. ABBILDUNGSVERZEICHNIS 77
5
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