Molekulare Untersuchungen zum Nachweis von M. tuberculosis-Komplex und deren Subtypen an Paraffin eingebetteten humanen und tierischen Gewebeproben:
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adam_text | AUS DEM INSTITUT FUER PATHOLOGIE
KLINIKUM MUENCHEN-BOGENHAUSEN
LEITER: PROF. DR. MED. A. NERIICH
MOLEKULARE UNTERSUCHUNGEN ZUM NACHWEIS VON
M. TUBERCULOSIS-KOMPLEX UND DEREN SUBTYPEN AN
PARAFFIN EINGEBETTETEN HUMANEN UND TIERISCHEN
GEWEBEPROBEN
DISSERTATION
ZUM ERWERB DES DOKTORGRADES DER MEDIZIN
AN DER MEDIZINISCHEN FAKULTAET DER
LUDWIG-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET ZU MUENCHEN
VORGELEGT VON
ISABELLE PETIT
AUS
MUENCHEN
2014
-1 -
HTTP://D-NB.INFO/1051693586
INHALTSVERZEICHNIS
STAMMDIFFERENZIERUNG DER MITGLIEDER DES MYKOBAKTERIUM
TUBERCULOSIS-KOMPLEXES UND
MOTTS AN FORMALIN-FIXIERTEN PARAFFIN EINGEBETTETEN HISTOLOGISCHEN
SCHNITTEN VON
PORCINEN PROBEN AUS DER VETERINAERMEDIZIN UND HUMANMEDIZINISCHEN PROBEN
MITTELS
PCR UND SPOLIGOTYPING 1
INHALTSVERZEICHNIS 3
1 EINLEITUNG 7
1.1 UEBERBLICK MYKOBAKTERIEN 7
1.2 MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS UND WEITERE MITGLIEDER DES MYCOBACTERIUM
TUBERCULOSIS * KOMPLEXES 8
1.2.1 GESCHICHTLICHER HINTERGRUND ZUR TUBERKULOSE 9
1.2.2 PATHOLOGIE DER TUBERKULOSE 10
1.2.3 DIAGNOSTIK DER TUBERKULOSE 12
1.2.4 AKTUELLES ZUR TUBERKULOSE 14
1.2.5 MYCOBACTERIUM BOVIS 15
1.3 MOTTS - MYCOBACTERIUM OTHER THAN TUBERCULOSIS 16
1.3.1 MYCOBACTERIUM AVIUM-KOMPLEX 16
1.3.2 MYCOBACTERIUM AVIUM - GEFLUEGELTUBERKULOSE 17
1.3.3 M. AVIUM SUBSP. PARATUBERCULOSIS - PARATUBERKULOSE 17
1.3.4 DIAGNOSTISCHER MOEGLICHKEITEN IM BEREICH DER VETERINAERMEDIZIN 18
1.4 FRAGESTELLUNG. 19
2 MATERIAL 20
2.1 PROBENMATERIAL 20
2.1.1 GEWEBEPROBEN VON PATIENTEN 20
2.1.2 GEWEBEPROBEN VON TIEREN 20
2.2 VERWENDETE GERAETE 21
2.3 EINWEGMATERIALIEN UND HILFSMITTEL 22
-3-
2.4 CHEMIKALIEN 23
2.5 REAGENZIEN UND ENZYME 25
2.6 STANDARD-LOESUNGEN UND PUFFER 26
3 METHODEN 28
3.1 PARAFFIN-SCHNITTE 28
3.2 FAERBUNGEN 29
3.2.1 HE-FAERBUNG - HAEMALAUN-EOSIN-FAERBUNG 29
3.2.2 ZIEHL-NEELSEN-FAERBUNG 30
3.3 HISTOLOGISCHE BEURTEILUNG 31
3.4 POLYMERASE-KETTEN-REAKTION 31
3.4.1 ALLGEMEINES 31
3.4.2 PCR AUS FORMALIN-FIXIERTEN UND IN PARRAFIN EINGEBETTETEN PROBEN 32
3.4.3 MASSNAHMEN ZUR VERMEIDUNG VON KONTAMINATION 33
3.5 DNA-AMPLIFIKATION 33
3.5.1 AMPLIFIKATION VON SS-AKTIN 33
3.5.2 AMPLIFIKATION VON MYKOBAKTERIELLER DNA 35
3.5.3 ZUSAETZLICHE AMPLIFIKATION BEI DEN PORCINEN PROBEN 36
3.6 AGAROSEGELELEKTROPHORESE 39
3.7 RESTRIKTIONSENYZMVERDAU 40
3.8 SPOLIGOTYPING 41
3.8.1 ALLGEMEINES 41
3.8.2 SPOLIGOTYPING DER PCR-PRODUKTE 42
4 ERGEBNISSE 45
4.1 DIAGNOSTISCHE ERGEBNISSE DER PORCINEN PROBEN 45
4.1.1 HISTOLOGISCHE ERGEBNISSE 45
4.1.2 MOLEKULARGENETISCHE ERGEBNISSE 47
4.2 DIAGNOSTISCHE ERGEBNISSE DER HUMANMEDIZINISCHEN PROBEN 50
4.2.1 HISTOLOGISCHE ERGEBNISSE 51
-4-
4.2.2 MOLEKULARGENETISCHE ERGEBNISSE MITTELS PCR 53
4.2.3 WEITERGEHENDE BESTIMMUNG DER MYKOBAKTERIELLEN DNA MITHILFE VON
SPOLIGOTYPING 54
5 DISKUSSION 57
5.1 EINSCHRAENKUNGEN DER ANALYSE 57
5.1.1 MASSNAHMEN ZUR VERMEIDUNG VON KONTAMINATION 57
5.1.2 POLYMERASEKETTENREAKTION AUS FORMALIN-FIXIERTEN PARAFFINSCHNITTEN
58
5.1.3 SPOLIGOTYPING - GRENZEN 59
5.2 DIAGNOSTISCHE ERGEBNISSE BEI PORCINEN PROBEN 59
5.2.1 HISTOLOGISCHE UNTERSUCHUNG 60
5.2.2 GENETISCHE UNTERSUCHUNGEN MITTELS PCR 61
5.2.3 ZOONOTISCHER ASPEKT 65
5.3 DIAGNOSTISCHE METHODEN BEI HUMANEN PROBEN 66
5.3.1 MOLEKULARGENETISCHE ERGEBNISSE MITTELS PCR 67
5.3.2 EPIDEMIOLOGISCHE/ PHYLOGEOGRAPHISCHE UNTERSUCHUNGEN 68
5.3.3 SPOLIGOTYPING UND ANDERE MOLEKULARGENETISCHE TECHNIKEN 68
5.3.4 WEITERGEHENDE BESTIMMUNG DER MYKOBAKTERIELLEN DNA UNSERER HUMANEN
PROBEN MITHILFE VON SPOLIGOTYPING 71
5.4 MOEGLICHKEITEN UND GRENZEN DER MOLEKULAREN STAMMDIFFERENZIERUNG 75
5.4.1 KORRELATION STAEMME DES MTBC UND BEVOELKERUNGSSCHICHTEN 76
5.4.2 WEITERE PHAENOTYPISCHE UNTERSCHIEDE 77
5.4.3 DER NUTZEN PHYLOGEOGRAPHISCHER UNTERSUCHUNGEN 77
5.4.4 EINSCHRAENKUNGEN 77
6 ZUSAMMENFASSUNG 79
LITERATURVERZEICHNIS 82
ABKUERZUNGEN 95
ABBILDUNGSVERZEICHNIS 96
-5-
TABELLENVERZEICHNIS
ANHANG
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