Einfluss der von Exophiala dermatitidis synthetisierten Pigmente auf das Phagozytoseverhalten humaner neutrophiler Granulozyten: eine explorative Studie am Durchflusszytometer
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Gießen
VVB Laufersweiler
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INHALTSVERZEICHNIS
I INHALTSVERZEICHNIS
II ABBILDUNGSVERZEICHNIS
III TABELLENVERZEICHNIS
IV ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG UND LITERATURUEBERSICHT 1
1.1 PILZE 1
1.1.1 SCHWAERZEPILZE 1
1.1.2 EXOPHIALA DERMATITIDIS 1
1.1.2.1 VORKOMMEN 2
1.1.2.2 HUMANMEDIZINISCHE BEDEUTUNG 2
1.1.2.3 VETERINAERMEDIZINISCHE BEDEUTUNG 5
1.2 INFEKTABWEHR 7
1.2.1 MECHANISMEN DER UNSPEZIFISCHEN INFEKTABWEHR 7
1.2.1.1 MECHANISCHE FAKTOREN 7
1.2.1.2 HUMORALE FAKTOREN 7
1.2.1.3 ZELLULAERE FAKTOREN 8
1.2.2 MECHANISMEN DER SPEZIFISCHEN INFEKTABWEHR 10
1.2.2.1 SPEZIFISCHE HUMORALE ABWEHR 11
1.2.2.2 SPEZIFISCHE ZELLULAERE ABWEHR 12
1.2.3 ABLAUF DER PHAGOZYTOSE 13
1.3 PIGMENTE 15
1.3.1 DEFINITION UND FUNKTION 15
1.3.2 PIGMENTE BEI PILZEN 16
1.3.2.1 MELANINE 16
1.3.2.2 INDOLALKALOIDE 17
2 HINTERGRUND UND FRAGESTELLUNG 21
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INHALTSVERZEICHNIS
3 MATERIAL UND METHODEN 23
3.1 HERSTELLUNG VON ROHEXTRAKT UND ISOLATION DER PIGMENTE 23
3.1.1 ZUGRUNDELIEGENDE REFERENZSTAEMME VON EXOPHIALA DERMATITIDIS 23
3.1.2 STAMMHALTUNG UND KULTUR DER HEFEN 25
3.1.3 ROHEXTRAKTGEWINNUNG 26
3.1.4 SAEULENCHROMATOGRAPHIE 27
3.1.5 DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE 29
3.1.6 HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC) 32
3.1.6.1 PRAEPARATIVE HPLC 32
3.1.6.2 ANALYTISCHE HPLC 33
3.2 PHAGOZYTOSE 34
3.2.1 VERWENDETE EXOPHIALA- ISOLATE 34
3.2.2 ANZUCHT UND KULTUR 34
3.2.3 PRAEPARATION DER PIGMENTE 35
3.2.4 PRAEPARATION DER ZELLEN FUER DEN MESSVORGANG 36
3.2.4.1 MARKIERUNG DER NEUTROPHILEN GRANULOZYTEN 36
3.2.4.2 MARKIERUNG DER HEFEZELLEN 36
3.2.5 VERSUCHSAUFBAU 37
3.3 DURCHFLUSSZYTOMETRIE 39
3.3.1 ALLGEMEINES PRINZIP 39
3.3.2 VERWENDETES MESSGERAET 40 *
3.3.2.1 FLUESSIGKEITSSYSTEM 40
3.3.2.2 KOMPONENTEN UND FUNKTIONEN DES OPTISCHEN SYSTEMS 41
3.3.2.3 ELEKTRONIK 45
3.3.3 MESSUNG AM DURCHFLUSSZYTOMETER 46
3.3.4 AUSWERTUNG 46
3.3.5 STATISTISCHE AUSWERTUNG 48
4 ERGEBNISSE 49
4.1 VON DEN REFERENZSTAEMMEN ZUR PIGMENTGEWINNUNG 49
4.2 PHAGOZYTOSEVERSUCHE 52
4.2.1 MARKIERUNG DER ZELLEN 52
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
4.2.2 AUSWERTUNGSMODALITAETEN AM DURCHFLUSSZYTOMETER 55
4.2.3 EINFLUSS DER DMSO-GELOESTEN ROHEXTRAKTE VON EXOPHIALA DERMATITIDIS
WILDTYP UND MEL-3 59
4.2.4 METHANOL ALS LOESUNGSMITTEL DER PIGMENTE 63
4.2.5 EINFLUSS DER (SEPHADEX-) FRAKTIONEN 66
4.2.5.1 EXOPHIALA DERMATITIDIS WILDTYP (ATCC NO.34100) 66
4.2.5.2 EXOPHIALA DERMATITIDIS MEL-3 (ATCC NO. 44504) 67
4.2.6 EINFLUSS DER DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHISCHEN BANDEN 73
4.2.7 EINFLUSS VON PITYRIAZOL AUS MALASSEZIA FURFUR 77
4.2.8 VERSUCHE ZUR DARSTELLUNG DES HEMMSTOFFES .ANTHRAZIT VON HEIDRICH
2010 78
5 DISKUSSION 79
6 ZUSAMMENFASSUNG 88
7 SUMMARY 90
8 LITERATURVERZEICHNIS 92
9 DANKSAGUNG 102
10 ERKLAERUNG 103
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