MMP-2 und MMP-9 in der Pathogenese der vaskulären Verkalkung bei chronischer Niereninsuffizienz:
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
DANKSAGUNG VI
INHALTSVERZEICHNIS VIII
VORWORT XI
1. EINLEITUNG 1
1.1. KARDIOVASKULAERE ERKRANKUNGEN BEI KINDERN MIT CKD 1
1.1.1. CKD BEI KINDERN UND MEDIKAMENTOESE THERAPIE 2
1.1.1.1. GESTOERTER MINERALSTOFFWECHSEL UND PHOSPHATBINDER 5
1.1.1.2. GESTOERTES KNOCHENWACHSTUM UND CALCITRIOL-SUBSTITUTION 7
1.1.1.3. DEFIZITE DER MEDIKAMENTOESEN THERAPIE IM KINDESALTER 8
1.1.2. ARTERIELLE VERKALKUNGEN BEI KINDERN MIT CKD 8
1.1.2.1. PATHOLOGIE DER URAEMIEBEDINGTEN MEDIA-KALZIFIKATION 9
1.1.2.2. INHIBITOREN DER ARTERIELLEN KALZIFIKATION 13
1.1.2.3. THERAPEUTISCHE INHIBITION DER ARTERIELLEN KALZIFIKATION 13
1.2. MMP-2 UND MMP-9 IM RAHMEN DER ARTERIELLEN KALZIFIKATION 13
1.2.1. CHARAKTERISIERUNG VON MMP-2 UND MMP-9 15
1.2.2. HYPOTHESE UND ZIELSETZUNG DER ARBEIT 17
2. MATERIAL UND METHODEN 18
2.1. CHEMIKALIEN UND VERBRAUCHSMATERIALIEN 18
2.1.1. LOESUNGEN UND PUFFER 18
2.1.2. PRIMER UND ANTIKOERPER 21
2.2. ZELLKULTUREN, AORTENKULTUREN UND VERSUCHSTIERE 23
2.3. GERAETE, SOFTWARES UND DATENBANKEN 25
2.4. METHODEN DER IN VITRO VERSUCHE 26
2.4.1. GEWINNUNG UND KULTIVIERUNG DER ZELL- UND AORTENKULTUREN 26
2.4.1.1. ISOLIERUNG DER VSMCS 26
2.4.1.2. VORBEREITUNG DER AORTENKULTUREN 27
2.4.2. IN VITRO STIMULATION UND PROBENNAHME 28
2.4.2.1. KALZIFIKATIONSFOERDERNDE FAKTOREN IN DER ZELLKULTUR 28
2.4.2.2. EX VIVO KALZIFIKATION VON AORTENKULTUREN 30
2.5. METHODEN DER IN VIVO VERSUCHE 30
2.5.1. IN VIVO MODELL ZUR URAEMIEBEDINGTEN ARTERIELLEN KALZIFIKATION 30
2.5.1.1. URAEMIE DURCH 5/6-NEPHREKTOMIE 31
2.5.1.2. KALZIFIKATION DURCH ORALE CALCITRIOL- UND PHOSPHAT-BEHANDLUNG
32
VIII
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INHALTSVERZEICHNIS
2.5.1.3. BEURTEILUNG DES KRANKHEITSVERLAUFS 33
2.5.1.4. TOETUNG UND ORGANENTNAHME 34
2.5.2. VERSUCHSDESIGN UND BEHANDLUNGSGRUPPEN 34
2.5.2.1. UNTERSUCHUNG DER MMP-LNHIBITION MITTELS DOXYCYCLIN 34
2.5.2.2. ETABLIERUNG EINES IN VIVO MODELLS FUER B6-MAEUSE 35
2.6. ANALYSE DER ARTERIELLEN KALZIFIKATION 36
2.6.1. HISTOLOGISCHE FAERBUNGEN VON AORTENQUERSCHNITTEN 36
2.6.1.1. UEBERSICHTSFARBUNGEN 36
2.6.1.2. SPEZIELLE KALKFAERBUNGEN 37
2.6.1.3. HISTOLOGISCHE QUANTIFIZIERUNG DES ARTERIELLEN KALKS 37
2.6.2. PHOTOMETRISCHE CALCIUM- UND PHOSPHATBESTIMMUNG 37
2.6.3. UNTERSUCHUNG VON VERKALKUNGSMARKERN AUF MRN A-EBENE 38
2.6.3.1. DESIGN UND ETABLIERUNG DER VERWENDETEN PRIMER 38
2.6.3.2. QUANTIFIZIERUNG MITTELS REAL-TIME PCR 39
2.7. ANALYSE VON MMP-2 UND MMP-9 40
2.7.1. GELATINASEAKTIVITAET IN MEDIENUEBERSTAENDEN 40
2.7.1.1. DQ*GELATIN ZUR BESTIMMUNG DES GESAMTGEHALTS 40
2.7.1.2. ZYMOGRAPHIE ZUR BESTIMMUNG DER EINZELNEN SUBTYPEN 40
2.7.2. IMMUNHISTOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN VON AORTENQUERSCHNITTEN 41
2.8. STATISTISCHE AUSWERTUNG 41
3. ERGEBNISSE 42
3.1. MMP-2 UND MMP-9 IN DER ZELLKULTUR 42
3.1.1. KONSTITUTIV SEZERNIERTE GELATINASEN 42
3.1.2. NICHT-KONFLUENTES VS. KONFLUENTES STIMULATIONSMODELL 43
3.1.3. STIMULATION VON VSMCS MIT KALZIFIKATIONSFORDEMDEN FAKTOREN 45
3.1.4. STIMULATION VON PERIZYTEN MIT KALZIFIKATIONSFORDEMDEN FAKTOREN 48
3.1.4.1. MRNA-EXPRESSION VON VERKALKUNGSMARKERN IN PERIZYTEN 49
3.2. MMP-2 UND MMP-9 IN VERKALKTEN RATTENAORTEN 51
3.3. MMP-LNHIBITION IN DER URAEMIEBEDINGTEN ARTERIELLEN KALZIFIKATION 53
3.3.1. MODELL ZUR URAEMIEBEDINGTEN ARTERIELLEN KALZIFIKATION IN DER RATTE
53
3.3.1.1. URAEMIE DER RATTE DURCH 5/6-NEPHREKTOMIE 53
3.3.1.2. ORALE CALCITRIOL- UND PHOSPHAT-BEHANDLUNG 55
3.3.1.3. ARTERIELLE KALZIFIKATION DURCH CALCITRIOL UND PHOSPHAT 56
3.3.2. MMP-LNHIBITION MITTELS DOXYCYCLIN 58
3.4. STIMULATION UND INHIBITION DER AORTENKALZIFIKATION 63
IX
INHALTSVERZEICHNIS
3.4.1. EX VIVO MODELL ZUR KALZIFIKATION VON B6-MAUSAORTEN 63
3.4.2. MMP-INHIBITION MITTELS DOXYCYCLIN 65
3.4.3. BEHANDLUNG MIT REKOMBINANTEM MMP-2 UND MMP-9 66
3.5. MODELL ZUR URAEMIEBEDINGTEN ARTERIELLEN KALZIFIKATION IN B6-MAEUSEN
68
3.5.1. URAEMIE DER MAUS DURCH 5/6-NEPHREKTOMIE 69
3.5.2. ARTERIELLE KALZIFIKATION DURCH CALCITRIOL UND PHOSPHAT 70
3.6. ZUSAMMENFASSUNG DER ERGEBNISSE 73
4. DISKUSSION 75
4.1. MMP-2 UND MMP-9 IN DER ZELLKULTUR 76
4.1.1. KONSTITUTIVES PRO MMP-2 IN VSMCS UND PERIZYTEN 76
4.1.2. BEVORZUGUNG DES KONFLUENTEN STIMULATIONSMODELLS 76
4.1.3. AKTIVES MMP-2 DURCH STIMULATION VON VSMCS 77
4.1.4. ERGEBNISSE DER VERSUCHE ZUR STIMULATION VON PERIZYTEN 79
4.2. VERMEHRT MMP-2 UND MMP-9 IN KALZIFIZIERTEN RATTENAORTEN 80
4.3. CALCITRIOL-INDUZIERTE ARTERIELLE KALZIFIKATION IN DER RATTE 81
4.3..1. DOXYCYCLIN ALS UNSPEZIFISCHER MMP-INHIBITOR 82
4.3.2. VERMINDERTE ARTERIELLE KALZIFIKATION AUFGRUND VON DOXYCYCLIN 83
4.4. EX VIVO KALZIFIKATION VON B6-MAUSAORTEN 84
4.4.1. CALCIUM- UND PHOSPHAT-INDUZIERTE AORTENKALZIFIKATION 85
4.4.2. VERMINDERTE VERKALKUNG DURCH DOXYCYCLIN 87
4.4.3. VERSTAERKTE VERKALKUNG DURCH REKOMBINANTES MMP-2 UND MMP-9 87
4.5. ETABLIERUNG EINES IN VIVO MODELLS FUER B6-MAEUSE 88
4.5.1. URAEMIE DER MAUS DURCH 5/6-NEPHREKTOMIE 89
4.5.2. ARTERIELLE KALZIFIKATION DURCH CALCITRIOL UND PHOSPHAT 90
4.6. GESAMTBEWERTUNG UND EXPERIMENTELLER AUSBLICK 91
4.7. PHARMAZEUTISCHE BEURTEILUNG UND BEDEUTUNG DER ARBEIT 95
ZUSAMMENFASSUNG 97
SUMMARY 101
LITERATUR 105
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS XII
ABBILDUNGSVERZEICHNIS XVI
LEBENSLAUF XVIII
X
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