Eine vergleichende Genexpressionsanalyse auf Einzelzellebene bei transgenen Mausmodellen für Morbus Huntington und spinocerebelläre Ataxie Typ 7:
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2012
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
1.1 CHARAKTERISIERUNG DER KLINISCHEN ERSCHEINUNGSBILDER 1
1.1.1 MORBUS HUNTINGTON 1
1.1.2 SPINOCEREBELLAERE ATAXIE TYP 7 2
1.2 MOLEKULARGENETIK 3
1.3 NEUROPATHOLOGIE 4
1.3.1 MORBUS HUNTINGTON 4
1.3.1.1 ZELLVERLUST IM STRIATUM UND IM CORTEX DES GROSSHIRNS 5
1.3.1.2 NEURONENUNTERGANG IM CEREBELLUM 5
1.3.1.3 EINSCHLUSSKOERPER UND DENDRITENMORPHOLOGIE 6
1.3.2 SPINOCEREBELLAERE ATAXIE TYP 7 7
1.3.2.1 SELEKTIVER ZELLVERLUST UND VERAENDERUNGEN DER
PURKINJEZELLDENDRITEN 7
1.3.2.2 INTRANUKLEAERE EINSCHLUSSKOERPER 7
1.4 HYPOTHESEN ZUR PATHOGENESE VON POLYGLUTAMINERKRANKUNGEN 8
1.5 DIE PURKINJEZELLEN DES KLEINHIRNS 9
1.6 TIERMODELLE 11
1.6.1 DAS MAUSMODELL R6/2 11
1.6.2 DAS MAUSMODELL P7E 11
1.7 FRAGESTELLUNG 12
2 MATERIAL UND METHODEN 13
2.1 MATERIAL 13
2.1.1 TIERMODELLE 13
2.1.1.1 SCA7 13
2.1.1.2 MORBUS HUNTINGTON 13
2.1.2 GERAETE UND SOFTWARE 13
2.1.3 VERBRAUCHSGEGENSTAENDE 13
2.1.4 KITS 14
2.1.5 CHEMIKALIEN UND PUFFER 14
2.1.6 ENZYME 15
2.1.7 PRIMER 15
2.2 METHODEN 16
2.2.1 GEWINNUNG UND AUFBEREITUNG DES PROBENMATERIALS 16
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2.2.1.1 GEHIRNENTNAHME 16
2.2.1.2 WEITERE PROZESSIERUNG ZUR HOMOGENAT-GEWINNUNG 16
2.2.1.2.1 HERSTELLUNG DES CEREBELLAEREN HOMOGENATES 16
2.2.1.2.2 RNA-ISOLIERUNG 16
2.2.1.2.3 RNA-PRAEZIPITATION 16
2.2.1.2.4 REVERSE TRANSKRIPTION 17
2.2.1.2.5 CDNA-PRAEZIPITATION 17
2.2.1.3 WEITERE PROZESSIERUNG ZUR PURKINJEZELL-GEWINNUNG 17
2.2.1.3.1 ANFERTIGUNG DER GEHIMSCHNITTE UND METHYLENBLAUFAERBUNG FUER LCM
17
2.2.1.3.2 LASER CAPTURE MICRODISSECTION 18
2.2.1.3.3 RNA-ISOLATION 19
2.2.1.3.4 RNA-PRAEZIPITATION 19
2.2.1.3.5 REVERSE TRANSKRIPTION 19
2.2.1.3.6 CDNA-PRAEZIPITATION 20
2.2.2 MICROARRAY 21
2.2.3 QUANTITATIVE ECHTZEIT-POLYMERASEKETTENREAKTION 21
2.2.3.1 METHODENBESCHREIBUNG 21
2.2.3.2 DURCHFUEHRUNG 22
2.2.3.2.1 PRIMERDESIGN 22
2.2.3.2.2 ANALYSE-QPCR 24
2.2.4 IMMUNHISTOCHEMIE 24
2.2.5 STATISTIK 25
3 ERGEBNISSE 26
3.1 VORUNTERSUCHUNGEN 26
3.1.1 GENEXPRESSIONSVERAENDERUNGEN IM CEREBELLAEREN HOMOGENAT 26
3.1.2 ANREICHERUNG VON NEURONALEM GEWEBE DER PURKINJEZELLSCHICHT 27
3.2 GENEXPRESSIONSVERGLEICH ZWISCHEN DEN TIERMODELLEN 28
3.2.1 SCREENING MITTELS GENCHIP 28
3.2.2 VALIDIERUNG AUSGEWAEHLTER MRNAS DURCH QPCR 29
3.3 GENEXPRESSION DES SCA7-MODELLS IM ALTERSVERGLEICH 33
3.4 QUANTIFIZIERUNG CALBINDIN- UND PCP2-POSITIVER PERIKARYA 34
4 DISKUSSION 35
4.1 KONSISTENZ UND AUSSAGEKRAFT DER ERGEBNISSE 35
4.1.1 UEBEREINSTIMMUNG DER LCM-ERGEBNISSE MIT HOMOGENATDATEN FUER
PURKINJEZELLSPEZIFISCHE MRNAS 35
4.1.2 REPRAESENTATIVE AUSWAHL VON PZ IN ANBETRACHT EINES MOEGLICHEN
ZELLVERLUSTES 36
4.1.3 INTERPRETATION DER DETEKTIERTEN SIGNALVERAENDERUNGEN 37
4.2 MOEGLICHE URSACHEN DER EXPRESSIONSVERAENDERUNGEN 37
4.2.1 PCP2-PROMOTER-SPEZIFISCHE REPRESSION 38
4.2.2 HERUNTERREGULATION RORA-ABHAENGIGER GENE 40
4.2.3 GENLOCUSUNABHAENGIGE GEMEINSAME DYSREGULATIONSMECHANISMEN 41
4.3 POTENTIELLE AUSWIRKUNGEN DER EXPRESSIONSVERAENDERUNGEN 41
4.3.1 BEEINTRAECHTIGUNG DER DENDRITISCHEN SIGNALINTEGRATION 42
4.3.2 ERHOEHTE VULNERABILITAET GEGENUEBER EXZITOTOXISCHEN MECHANISMEN 43
4.4 AUSBLICK 46
5 ZUSAMMENFASSUNG 49
6 LITERATURVERZEICHNIS 50
7 ANHANG 72
7.1 ABBILDUNGS-UND TABELLENVERZEICHNIS 72
7.2 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 73
7.3 LEBENSLAUF 75
7.4 WISSENSCHAFTLICHE BEITRAEGE IM RAHMEN DER DOKTORARBEIT 77
7.5 DANKSAGUNG 78
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