Die Rolle von Biomarkern beim kolorektalen Karzinom und seinen Lebermetastasen:
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| adam_text | AUS DER KLINIK FUER ALLGEMEIN-, VISZERAL-, TRANSPLANTATIONS-, GEFAESS- UND
THORAXCHIRURGIE DER LUDWIG-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET MUENCHEN
DIREKTOR: PROF. DR. DR. MED. K.-W. JAUCH
DIE ROLLE VON BIOMARKERN BEIM
KOLOREKTALEN KARZINOM UND
SEINEN LEBERMETASTASEN
DISSERTATION ZUM ERWERB DES DOKTORGRADES DER MEDIZIN
AN DER MEDIZINISCHEN FAKULTAET DER
LUDWIG-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET ZU MUENCHEN
VORGELEGT VON
ANDREAS GEORG BOGNER
AUS MUENCHEN
2014
I
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INHALTSVERZEICHNIS
DANKSAGUNG III
WIDMUNG IV
ERGEBNISPRAESENTATION: V
INHALTSVERZEICHNIS VII
DAS KOLOREKTALE KARZINOM 1
1.1 THERAPIE DES KOLOREKTALEN
KARZINOMS 1
1.1.1 ALLGEMEINES 1
1.1.2 KOLONKARZINOM 1
1.1.3 REKTUMKARZINOM 2
1.2 ADJUVANTE THERAPIE 3
1.2.1 CHEMOTHERAPIE : 3
1.2.1.1 5-FLUOROURACIL 3
1.2.1.2 OXALIPLATIN 4
1.2.1.3 IRINOTECAN 4
1.3 LEBERMETASTASEN 5
1.3.1 ALLGEMEINES 5
1.3.2 CHEMOTHERAPIE 6
1.3.2.1 BEVACIZUMAB 6
1.3.2.2 CETUXIMAB/PANITUMUMAB 6
1.3.2.2.1EGF-R (EPIDERMAL GROWTH FACTOR RECEPTOR) 7
1.3.2.2.2RAS 7
1.3.2.2.3RAF 8
1.3.2.3 ZWEIT-/DRITTLINIENTHERAPIE 9
2 DIE ROLLE VON GENEN UND WACHSTUMSFAKTOREN IN DER
KARZINOGENESE DES KOLOREKTALEN KARZINOMS: DIE ADENOM/DYSPLASIE-
KARZINOM-SEQUENZ
10
2.1 TUMORBIOLOGISCHE MARKER MIT MOEGLICHER THERAPIERELEVANZ 11
2.1.1 HER2/NEU (HUMAN EPIDERMAL GROWTH FACTOR RECEPTOR 2) 11
2.1.2 IGF1-R (INSULIN-LIKE GROWTH FACTORL RECEPTOR) 12
2.1.3 C-MET (HGFR HEPATOCYTE GROWTH FACTOR RECEPTOR) 12
2.1.4 CD44V6 13
2.1.5 KI67 - PROLIFERATIONSINDEX 14
VII
2.1.6 CD45-AKTIVIERUNGSSTATUS (PTPRC PROTEIN TYROSINE PHOSPHATASE,
RECEPTOR
TYPE C) 14
2.1.7 MHC KLASSE II PROTEIN HLA-DR 14
2.2 ZIELSETZUNGEN 15
3 MATERIAL UND METHODEN 17
3.1 MATERIAL 17
3.1.1 GERAETE 17
3.1.2 CHEMIKALIEN UND MATERIAL 18
3.1.2.1 ALLGEMEIN 18
3.1.2.2 MOLEKULARBIOLOGIE 20
3.1.3 SOFTWARE 23
3.1.4 ZELLLINIEN 24
3.1.5 PATIENTENPROBEN 24
3.2 METHODEN 26
3.2.1 ANFERTIGUNG VON GEFRIERSCHNITTEN 26
3.2.2 HAEMALAUN - EOSIN - FAERBUNG 27
3.2.3 NILBLAU-FAERBUNG 28
3.2.4 MIKRODISSEKTION 29
3.2.5 DNS-ISOLATION AUS ZELLPELLETS 31
3.2.6 PHOTOMETRISCHE DNS-ANALYSE 32
3.2.7 DNS-ISOLATION AUS MIKRODISSEZIERTEM GEWEBE 32
3.2.8 HERSTELLUNG VON LOESUNGEN 34
3.2.8.1 TAE-PUFFER 34
3.2.8.2 HEPES-PUFFER 34
3.2.8.3 PRIMERLOESUNGEN 34
3.2.8.4 ORANGE G LADEPUFFER 35
3.2.8.5 2%-IGE EOSIN LOESUNG 35.
3.2.9 POLYMERASE KETTENREAKTION (PCR) 36
3.2.10 GELELEKTROPHORESE 38
3.2.11 PYROSEQUENZIERUNG 41
3.2.11.1 FUNKTIONSWEISE 41
3.2.11.2 DURCHFUEHRUNG 42
3.2.12 DNS-SEQUENZIERUNG MIT DER METHODE NACH SANGER 43
3.2.13 ERSTELLUNG EINER DATENBANK 44
3.2.14 STATISTISCHE AUSWERTUNG 44
3.2.14.1 DATENBANK IN SPSS 44
3.2.14.2 SKALIERUNG UND PRUEFUNG AUF NORMALVERTEILUNG 44
3.2.14.3 UNIVARIATE ANALYSE 46
3.2.14.4 KAPLAN-MEIER-SCHAETZER 46
3.2.14.5 COX-REGRESSIONSANALYSE 46
4 ERGEBNISSE 48
4.1 ZELLLINIEN 48
4.1.1 QUANTITATIVE DNS-ANALYSE 48
4.1.2 MOLEKULARE ANALYSE 49
4.2 PATIENTENKOLLEKTIVBESCHREIBUNG 51
4.2.1 UEBERSICHT PRIMARIA 51
4.2.2 UEBERSICHT LEBERMETASTASEN
55
4.2.3 KLINISCH-PATHOLOGISCHE DATEN
59
4.2.3.1 PRIMAERTUMOREN 59
4.2.3.2 LEBERMETASTASEN 62
4.2.4 PATIENTENAUSWERTUNG 64
4.2.4.1 BRAF 64
4.2.4.2 KRAS 65
4.2.4.3 GRAPHISCHE DARSTELLUNG KRAS
MUTATIONSANALYSE 67
4.2.4.4 GRAPHISCHE DARSTELLUNG PYROSEQUENZIERUNG BRAF MUTATIONSANALYSE
70
4.3 STATISTISCHE AUSWERTUNG 71
4.3.1 UNIVARIATE ANALYSE 71
4.3.1.1 SKALIERUNG, VERTEILUNG UND VERBUNDENHEIT 71
4.3.1.2 UEBERSICHT 71
4.3.1.3 PRIMAERTUMOREN 72
4.3.1.4 LEBERMETASTASEN 75
4.3.2 UEBERLEBEN 77
4.3.2.1 KAPLAN-MEIER-KURVEN PRIMAERTUMOREN 77
4.3.2.2 KAPLAN-MEIER-KURVEN LEBERMETASTASEN 82
4.3.2.3 COX-REGRESSIONSMODELL 85
4.3.2.3.1 PRIMAERTUMOREN 85
4.3.2.3.2 LEBERMETASTASEN 86
5 DISKUSSION 88
5.1 KLINISCH-PATHOLOGISCHE FAKTOREN 88
5.1.1 PRIMAERTUMOREN 88
5.1.1.1 ALTER, GESCHLECHT, BMI, ASA 88
5.1.1.2 TNM 89
5.1.1.3 GRADING 90
5.1.1.4 HISTOLOGIE 90
5.1.1.5 TUMORMARKER 90
5.1.1.6 TUMORLOKALISATION 91
5.1.2 LEBERMETASTASEN
92
5.1.2.1 ALTER, GESCHLECHT, BMI, ASA 92
5.1.2.2 LOKALISATION, UICC-PRIMAERTUMOR 93
5.1.2.3 HISTOLOGIE 93
5.1.2.4 TUMORMARKER 93
5.1.2.5 FONG SCORE 94
5.2 MOLEKULARE MARKER 94
5.2.1 KRAS 94
5.2.2 BRAF. 96
5.2.3 ZELLLINIEN
97
5.2.4 BEVACIZUMAB UND VEGF 98
5.3 METASTASIERUNG 98
5.4 . KONVENTIONELLE CHEMOTHERAPIE 100
5.5 SIGNALTRANSDUKTION 100
5.6 INDIVIDUELLE THERAPIESTRATEGIE UND AUSBLICK 102
6 ZUSAMMENFASSUNG 104
7 ANHANG 107
7.1 TABELLEN ZU KLINISCH-PATHOLOGISCHEN
PARAMETERN 107
7.1.1 ASA-KLASSIFIKATION 107
7.1.2 TNM-KLASSIFIKTATION 107
7.1.3 UICC-STADIUM 108
7.1.4 GRADING 108
7.2 STATISTIK 109
7.2.1 TABELLE SKALIERUNG, VERTEILUNG UND VERBUNDENHEIT 109
7.2.2 STATISTISCHE ALGORITHMEN 111
7.2.3 TABELLE UNIVARIATE ANALYSE NICHT SIGNIFIKANTE ERGEBNISSE 113
7.2.4 KREUZTABELLEN FUER CHI
2
-TESTS DER UNIVARIATANALYSE 129
7.2.5 TABELLE UEBERLEBEN NICHTSIGNIFIKANTE ERGEBNISSE PRIMARIA 136
7.2.6 TABELLE UEBERLEBEN NICHTSIGNIFIKANTE ERGEBNISSE LEBERMETASTASEN 137
7.3 IMMUNHISTOCHEMIE 139
7.3.1 MATERIAL 139
7.3.2 METHODIK 139
7.3.2.1 ANTIKOERPER 140
7.3.2.2 AUSWERTUNG 143
7.3.3 FESTLEGUNG DER SCHWELLENWERTE 144
7.3.4 ERGEBNISSE DER IMMUNHISTOCHEMIE 144
7.4 EIDESSTATTLICHE ERKLAERUNG 147
7.5 TABELLENVERZEICHNIS 148
7.6 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 150
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 158
LITERATURVERZEICHNIS 163
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