Syk-Inhibition mit Fostamatinib reduziert die Makrophagenakkumulation in atherosklerotischen Plaques:
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2013
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 1
1.1 DIE ATHEROSKLEROSE 1
1.1.1 DIE ATHEROSKLEROSE ALS HAUPTURSACHE KARDIOVASKULAERER MORTALITAET 1
1.1.2 DIE GESCHICHTE DER ATHEROSKLEROSEFORSCHUNG 2
1.1.3 PATHOPHYSIOLOGIE DER ATHEROGENESE 3
1.2 PROTEINKINASEN 12
* I
1.2.1 DIE SPLEEN TYROSIN KINASE (SYK) 13
1.2.2 DER SYK-INHIBITOR R406 UND SEIN PROPHARMAKON FOSTAMATINIB/ R788 18
1.3 EINSATZ ANTIINFAMMATORISCHER KONZEPTE IN DER THERAPIE DER
M
ATHEROSKLEROSE . 19
1.4 FRAGESTELLUNG DER ARBEIT 20
2. MATERIAL UND METHODEN 21
2.1 IN VIVO STUDIE 21
2.1.1 STUDIENDESIGN 21
2.1.2 RETROORBITALE BLUTENTNAHME 21
2.1.3 GEWEBEPRAEPARATION 22
2.1.4 HISTOLOGISCHE FAERBUNGEN 22
2.1.5 ABFOTOGRAFIEREN DER SCHNITTE 25
2.1.6 AUSWERTUNG 25
2.2 ZELLEN :25
2.2.1 MURINE ENDOTHELZELLEN 25
2.2.2 MURINE AUS KNOCHENMARKSZELLEN DIFFERENZIERTE MAKROPHAGEN 27
2.2.3 264.7 RAW CELLS 29
2.2.4 ZELLSTIMULATION 30
2.2.5 ZELLLYSE 30
2.3 PROTEINBESTIMMUNG 30
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INHALTSVERZEICHNIS
2.3.1 ENZYME LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA) 30
2.3.2 BICINCHONINIC ACID (BCA)-METHODE 31
2.4 FLUORESCENCE ACTIVATED CELL SORTING (FACS) 32
2.4.1 HINTERGRUND 32
2.4.2 ZELLFARBUNG 33
2.4.3 AUSWERTUNG 34
2.5 MIGRATIONSVERSUCHE 34
2.5.1 INTRAVITALMIKROSKOPIE 34
2.5.2 SCRATCH-ASSAY 35
2.6. PROLIFERATIONS- UND APOPTOSE-/ CYTOTOXIZITAETSASSAY 36
2.6.1 BROMDESOXYURIDIN (BRDU)-ASSAY 36
2.6.2 LAKTATDEHYDROGENASE (LDH)-FREISETZUNGS-ASSAY 36
2.6.3 CASPASE-3/7-ASSAY 37
2.7 QUANTITATIVE REAL-TIME POLYMERASEKETTENREAKTION (QRT-PCR). 38
2.7.1 HINTERGRUND 38
2.7.2 DURCHFUEHRUNG 39
2.8 STATISTISCHE AUSWERTUNG 40
3. ERGEBNISSE 41
3.1 SYK-INHIBITION REDUZIERT DEN MAKROPHAGENGEHALT IN
ATHEROSKLEROTISCHEN PLAQUES 41
3.2 SYK-INHIBITION HEMMT DAS MIGRATIONSVERHALTEN VON
LEUKOZYTEN UND MAKROPHAGEN IN VIVO UND IN VITRO 43
3.2.1 FOSTAMATINIB HEMMT DAS ROLLEN UND DIE ADHAESION VON LEUKOZYTEN AN
DER
GEFASSWAND IN VIVO , 43
3.2.2 FOSTAMATINIB REDUZIERT DIE EXPRESSION VON ICAM-1 UND VCAM-1 AUF
ENDOTHELZELLEN 44
3.2.3 R406 HEMMT DIE MIGRATION VON MAKROPHAGEN IN VITRO 45
3.2.4 R406 BEINFLUSST NICHT DIE SEKRETION VON MCP-1 IN ENDOTHELZELLEN IN
VITRO 47
II
INHALTSVERZEICHNIS
3.2.5 SYK-INHIBITION HEMMT DIE SEKRETION VON MCP-1 VON MAKROPHAGEN IN
VITRO 47
3.2.6 FOSTAMATINIB BEEINFLUSST NICHT DIE EXPRESSION DER CHEMOKINE MCP-1,
KC UND
RANTES IN VIVO 48
3.3 SYK-INHIBITION HEMMT DIE DIFFERENZIERUNG VON MURINEN
KNOCHENMARKSMONOZYTEN ZU MAKROPHAGEN IN VITRO 49
3.4 SYK-INHIBITION BEEIFLUSST DAS UEBERLEBEN VON MAKROPHAGEN 51
3.4.1 R406 ZEIGT KEINEN CYTOTOXISCHEN EFFEKT AUF MAKROPHAGEN UND AUF DIE
PROLIFERATION
VON 264.7 RAW-CELLS 51
3.4.2 R406 BEWIRKT EINEN ANSTIEG DER APOPTOSERATE VON MAKROPHAGEN UNTER
M-CSF-
STIMULATION 52
3.4.3 FOSTAMATINIB * BEWIRKT EINEN TENDENZIELLEN ANSTIEG DER
APOPTOSERATE IN
, ATHEROSKLEROTISCHEN PLAQUES IN VIVO 53
4. DISKUSSION 55
4.1 SYK-INHIBITION REDUZIERT DEN MAKROPHAGENGEHALT IN
ATHEROSKLEROTISCHEN PLAQUES 55
4.2 FOSTAMATINIB/ R406 BEEINFLUSST DAS MIGRATIONS-VERHALTEN VON
LEUKOZYTEN IN VIVO UND IN VITRO 56
4.2.1 SYK INHIBITION HEMMT DAS ROLLEN UND DIE ADHAESION VON LEUKOZYTEN IM
CREMASTERMODEL 57
4.2.2 SYK-INHIBITION BEEINFLUSST DIE MIGRATION IN VIVO NICHT UEBER
VERAENDERTE
CHEMOKINSEKRETION 59
4.2.3 SYK-INHIBITION HEMMT IN VITRO DAS MIGRATIONSVERHALTEN VON
MAKROPHAGEN 59
4.3 SYK-INHIBITION BEEINFLUSST DEN LEBENSZYKLUS VON MAKROPHAGEN
/....61
4.3.1 SYK-INHIBITION HEMMT DIE MAKROPHAGENDIFFERENZIERUNG 61
4.3.2 SYK-INHIBITION BEEINFLUSST DAS UEBERLEBEN VON MAKROPHAGEN 63
4.3.3 BEDEUTUNG DER M-CSF-ABHAENGIGEN DATEN IN VIVO UND AUSBLICK 65
4.4 KLINISCHE RELEVANZ UND AUSBLICK 65
5. ZUSAMMENFASSUNG 67
III
INHALTSVERZEICHNIS
6. LITERATURVERZEICHNIS 68
7. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 79
LEBENSLAUF 84
DANK 85
IV
|
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| author | Remer, Imke Ilina 1986- |
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