Nicht-viraler Gentransfer mittels Magnetofektion bei primären Zellen des Equinen Sarkoids: in-vitro-Studie im Hinblick auf eine adjuvante Gentherapie des Equinen Sarkoids
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| Published: |
Berlin
Mensch und Buch Verl.
2013 [erschienen] 2014
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| Item Description: | Nebentitel: Non-viral gene transfer of primary cells from Equine Sarcoids using the magnetofection method |
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|---|---|
| adam_text | INHALT
1 EINLEITUNG 4
2 LITERATUR 5
2.1 DAS EQUINE SARKOID 5
2.1.1 DEFINITION UND VORKOMMEN 5
2.1.2 HISTOLOGIE 5
2.1.3 KLASSIFIKATION 6
2.1.4 AETIOLOGIE 6
2.1.5 PRAEDISPOSITION 7
2.1.6 BEHANDLUNGSMOEGLICHKEITEN 8
2.2 PAPILLOMAVIREN 10
2.2.1 IMMUNOLOGIE DER PAPILLOMAVIREN 11
2.2.2 PAPILLOMAVIREN UND KREBS 11
2.2.3 BOVINE PAPILLOMAVIREN 12
2.2.3.1 EINTEILUNG 12
2.2.3.2 ONKOPROTEIN E5 DER BOVINEN PAPILLOMAVIREN 12
2.2.3.3 BPV-INFEKTION BEIM RIND 12
2.2.3.4 SPEZIESFREMDE INFEKTIONEN 13
2.3 METHODEN DES GENTRANSFERS 13
2.3.1 TRANSDUKTION 13
2.3.2 TRANSFEKTION 14
2.3.3 MAGNETOFEKTION 15
2.4 DAS LUCIFERASE-ASSAV 16
2.4.1 BIOLUMINESZENZ 16
2.4.2 LUCIFERIN-LUCIFERASE-SYSTEME 16
2.4.3 FIREFLY-LUCIFERASE AUS PHOTINUS PYRALIS 17
2.4.4 ANWENDUNG DER FIREFLY-LUCIFERASE 17
2.5 IMMUNOLOGISCHE GRUNDLAGEN 18
2.5.1 MAJOR HISTOCOMPATIBILITY COMPLEX (MHC) 18
2.5.2 ZYTOKINE 18
2.5.2.1 GRANULOZYTEN-MAKROPHAGEN-KOLONIE-STIMULIERENDER FAKTOR 19
2.5.2.2 INTERFERON-Y 19
2.6 TUMORIMMUNOLOGIE 20
2.6.1 TUMORANTIGENE 20
2.6.1.1 TUMORASSOZIIERTE ANTIGENE (TAAS) 21
I
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INHALT
2.6.1.2 TUMORSPEZIFISCHE ANTIGENE (TSAS) 22
2.6.2 TUMOR ESCAPE-MECHANISMEN 23
2.7 GENTHERAPIE IN DER VETERINAERONKOLOGIE 25
2.8 ZUSAMMENFASSUNG DER LITERATURRECHERCHE 26
3 MATERIAL UND METHODEN 28
3.1 PFERDE UND TUMORMATERIAL 28
3.2 METHODEN 28
3.2.1 BEHANDLUNG DES AUSGANGSMATERIALS 28
3.2.2 ZELLKULTUR 29
3.3.2.1 GEWINNUNG VON EINZELZELLEN 29
3.2.2.2 PASSAGIEREN DER ZELLEN 30
3.2.2.3 KRYOKONSERVIERUNG 30
3.2.2.4 LEBEND-TOT-FAERBUNG 30
3.2.3 NICHT-VIRALER GENTRANSFER BEI ZELLEN DES EQUINEN SARKOIDS MIT
MAGNETOFEKTION 30
3.2.3.1 TRANSFEKTIONEN 30
3.2.3.2 MAGNETOFEKTION 31
3.2.3.3 MESSUNG DER GEBILDETEN LUCIFERASE 32
3.2.3.4 MESSUNG DES GEBILDETEN ZELLPROTEINS 32
3.2.3.5 STANDARDKURVEN 32
3.2.4 STIMULATION EQUINER SARKOIDZELLEN MIT FELINEN ZYTOKIN-GENEN 33
3.2.4.1. TRANSFEKTIONEN 33
3.2.4.2 ANTIKOERPER UND FLUORESZENZFARBSTOFFE 34
3.2.4.3 FLUORESZENZMARKIERUNGEN 34
3.2.4.4 DURCHFLUSSZYTOMETRIE 35
3.2.5 ELISA (ENYZME-LINKED-IMMUNOSORBANT-ASSAY) 36
3.3 HYPOTHESEN 37
3.3.1 ARBEITSHYPOTHESE DER VORLIEGENDEN ARBEIT 37
3.3.2 NULLHYPOTHESE DER VORLIEGENDEN ARBEIT 37
3.4 STATISTISCHE ANALYSE UND DARSTELLUNG DER ERGEBNISSE 37
4 ERGEBNISSE 38
4.1 PFERDE UND TUMORMATERIAL 38
4.2 TUMORMATERIAL UND PATHOLOGISCH-HISTOLOGISCHE UNTERSUCHUNG 39
II
INHALT
4.2.1 UNTERSUCHUNG AUF BOVINE PAPILLOMAVIREN 39
4.3 ERGEBNISSE DES NICHT-VIRALEN GENTRANSFERS MITTELS MAGNETOFEKTION 40
4.3.1 VERGLEICH VIER VERSCHIEDENER TRANSFEKTIONSREAGENZIEN 40
4.3.2 EINFLUSS DES MAGNETFELDES AUF DEN TRANSFEKTIONSERFOLG 41
4.3.2.1 KULTURMEDIUM DMEM+FKS 41
4.3.2.2 KULTURMEDIUM DMEM + AUTOLOGES PFERDESERUM 45
4.4 STIMULATION VON ZELLLINIEN EQUINER SARKOIDE MIT FELINEN
ZYTOKIN-GENEN 49
4.4.1 STIMULATION EQUINER SARKOIDZELLEN MIT PBFELFN-Y 49
4.4.2 STIMULATION EQUINER SARKOIDZELLEN MIT PBFEGM-CSF 50
4.4.3 STIMULATION EQUINER SARKOIDZELLEN MIT PBFELFN-Y UND PBFEGM-CSF 51
4.4.4 ERGEBNISSE DER ELISAS 52
4.4.4.1 TRANSFEKTION MIT PBFELFN-Y 52
4.4.4.2 TRANSFEKTION MIT PBFEGM-CSF 53
4.4.4.3 TRANSFEKTION MIT PBFELFN-Y UND PBFEGM-CSF 54
4.4.5 KORRELATION ZWISCHEN MHC-I-EXPRESSION UND ZYTOKINEN IM UEBERSTAND
55
5 DISKUSSION 56
5.1 DISKUSSION DER METHODE 56
5.1.1 KULTUR NEOPLASTISCHER FIBROBLASTEN 56
5.1.2 TRANSFEKTION PRIMAERER ZELLEN 56
5.1.3 EINSATZ HETEROLOGER ZYTOKINE 57
5.1.4 NICHT-VIRALER GENTRANSFER EQUINER ZELLEN 59
5.1.5 STATISTISCHE AUSWERTUNG 59
5.2 DISKUSSION DER ERGEBNISSE 60
5.2.1 POSITIVER EINFLUSS DER MAGNETOFEKTION AUF DEN TRANSFEKTIONSERFOLG
60
5.2.2 EINFLUSS DES TRANSFEKTIONSREAGENTEN AUF DEN TRANSFEKTIONSERFOLG 61
5.2.3 EINFLUSS DES GEWAEHLTEN KULTURMEDIUMS AUF DEN TRANSFEKTIONSERFOLG
62
5.2.4 EINFLUSS DER TRANSFEKTION HETEROLOGER ZYTOKINGENE 63
5.3 BEANTWORTUNG DER FRAGEN AUS DER EINLEITUNG 65
5.4 SCHLUSSFOLGERUNGEN 66
5.5 WEITERFUEHRENDE UNTERSUCHUNGEN 66
6 ZUSAMMENFASSUNG 67
7 SUMMARY 69
III
INHALT
8 LITERATURVERZEICHNIS 71
9 ANHANG 95
9.1 MATERIALNACHWEIS 95
9.1.5 ZELLKULTURMEDIEN UND ZUSAETZE 95
9.2 ABBILDUNGS- UND TABELLENVERZEICHNIS 98
9.2.1 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 98
9.2.2 TABELLENVERZEICHNIS 100
9.3 ZELLLINIEN AUS EQUINEN SARKOIDEN 101
9.4 MULTIPLE TESTPROBLEMATIK 102
IV
|
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