Effekte von Chlormadinonacetat auf die endometriale Arachidonsäurekaskade: Untersuchungen an humanen Explants-Kulturen und YHES-Zellen
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG L
1.1. ANATOMISCHE UND PHYSIOLOGISCHE GRUNDLAGEN 1
1.1.1. DER UTERUS 1
1.1.2. DAS ENDOMETRIUM 2
1.1.3. STEROIDREZEPTOREN IM ENDOMETRIUM 3
1.1.4. DIE ARACHIDONSIUREKASKADE 6
1.1.5. ZYTOKINE 7
1.1.6. GLUKOKORTIKOIDE UND IHRE ANTIINFLAMMATORISCHE WIRKUNGSWEISE 8
1.2. DYSMENORRHOE: PATHOPHYSIOLOGIE UND THERAPEUTISCHE WIRKUNG
SYNTHETISCHER STEROIDE 10
1.2.1. DYSMENORRHOE 10
1.2.2. CHLORMADINONACETAT (CMA) UND SEINE WIRKUNG BEI DYSMENORRHOE 12
1.3. EX VIVO- UND IN VITRO-TESTS AM ENDOMETRIUM 13
1.3.1. HUMANE ENDOMETRIALE FXP/O/IFS-KULTUREN 15
1.3.2. HUMANE ENDOMETRIALE ZELLKULTUREN 15
1.4. FRAGESTELLUNG DER ARBEIT 17
2. MATERIAL 18
2.1. KOMMERZIELL ERHAELTLICHE CHEMIKALIEN UND LOESUNGEN 18
2.2. ENZYME 19
2.3. SELBST HERGESTELLTE PUFFER UND LOESUNGEN 19
2.4. TESTSUBSTAENZEN 20
2.5. ZYTOKINE 20
2.6. OLIGONUKLEOTIDE 20
2.7. VERWENDETE KITS 21
2.8. ZELLLINIE 21
2.9. ARBEITSMATERIALIEN UND GERATE 21
2.10. SOFTWARE UND FOTOGRAFIE 23
3. METHODEN 24
3.1. ENDOMETRIUMGEWEBE (FXP/ONFS-KULTUREN) 24
3.1.1. GEWEBEGEWINNUNG UND PRAEPARATION 24
3.1.2. GEWEBEKULTIVIERUNG UND SUBSTANZTESTUNG MIT CHLORMADINONACETAT UND
DEXAMETHASON 27
3.2. IMMORTALISIERTE HUMANE ENDOMETRIALE STROMAZELLEN (YHES-ZELLEN) 30
3.2.1. KULTURBEDINGUNGEN 31
3.2.2. PASSAGIEREN 31
3.2.3. ZELLZAHLBESTIMMUNG 31
3.2.4. SUBSTANZTESTUNG MIT CHLORMADINONACETAT UND DEXAMETHASON 31
3.3. RNA-EXTRAKTION AUS GEWEBEPROBEN 32
3.4. RNA-EXTRAKTION AUS YHES-ZELLEN 32
3.5. BESTIMMUNG DER RNA-INTEGRITAET MITTELS AGILENT 6000 NANO ASSAY 33
3.6
. POLYMERASEKETTENREAKTION (PCR) 33
I
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INHALTSVERZEICHNIS
3.6.1. CONA SYNTHESE DURCH REVERSE TRANSKRIPTION 34
3.6.2. KONTROLL-PCR UND AGAROSEGELELEKTROPHORESE 35
3.6.3. QUANTITATIVE
REVERSE-TRANSKRIPTASE-/?EO/-77/NE-POLYMERASEKETTENREAKTION 36
3.7. PROSTAGLANDIN F
2A
-ENZYMIMMUNOASSAY 37
3.8. STATISTISCHE BERECHNUNGEN 37
4. ERGEBNISSE 38
4.1. UNTERSUCHUNGEN AM EXPLANTS-MODEIL 38
4.1.1. PROBENGEWINNUNG 38
4.1.2. PROBANDINNENKOLLEKTIV 40
4.1.3. CHARAKTERISIERUNG DER ENDOMETRIALEN EXP/ONFS-KULTUREN 43
4.1.4. EFFEKTE DER TESTSUBSTANZEN AUF DIE COX-2-MRNA-EXPRESSION 45
4.1.5. STIMULATIONSFLHIGKEIT DES INTERIEUKIN-LSS 48
4.1.6. COX-2-MRNA-LNDUKTION DURCH KULTIVIERUNG 50
4.1.7. EFFEKTE DER TESTSUBSTANZEN AUF DIE PGF
2A
-PRODUKTION 51
4.2. UNTERSUCHUNGEN AN YHES-ZELLEN 55
5. DISKUSSION....:
57
5.1. GEWEBEKULTIVIERUNG (CXP/ONFS-KULTUREN) 58
5.1.1. OPTIMIERUNG DER TESTBEDINGUNGEN 58
5.1.2. STIMULATIONSFAEHIGKEIT DES INTERIEUKIN-LSS 58
5.1.3. POTENTIELLE STOEREINFLUESSE BEI PROBENGEWINNUNG UND
GEWEBEKULTIVIERUNG 60
5.1.4. WIRKUNGEN DER TESTSUBSTANZEN 61
5.1.5. COX-2-MRNA-LNDUKTION DURCH KULTIVIERUNG 66
5.1.6. EINFLUSS BENIGNER VORERKRANKUNGEN AUF DIE ENDOMETRIALE
ARACHIDONSAEUREKASKADE 67
5.2. ZELLKULTIVIERUNG: WIRKUNG DER TESTSUBSTANZEN AUF YHES-ZELLEN 69
5.3. VERGLEICH VON EXP/ONRS-KULTUREN MIT DER YHES-ZELLLINIE 71
5.4. AUSBLICK 73
6. ZUSAMMENFASSUNG 75
7. LITERATURVERZEICHNIS 76
8. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 83
9. DANKSAGUNG 85
. 10. ANHANG 86
II
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