Immunmodulatorische Eigenschaften von adulten humanen mesenchymalen Stammzellen unter GMP-konformen Isolations- und Expansionsbedingungen:
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2013
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 1
1.1 DAS MENSCHLICHE IMMUNSYSTEM 1
1.1.1 ANGEBORENES IMMUNSYSTEM 1
1.1.1.1 DIE ZELLULAERE KOMPONENTE DES ANGEBORENEN IMMUNSYSTEMS.. 2
1.1.1.2 DIE HUMORALE KOMPONENTE DES ANGEBORENEN IMMUNSYSTEMS.
3
1.1.2 DAS ERWORBENE IMMUNSYSTEM 3
1.2 MESENCHYMALE STAMMZELLEN (MSCS) 6
1.2.1 ALLGEMEINE DEFINITION VON STAMMZELLEN 6
1.2.2 ENTDECKUNG UND DEFINITION DER MSCS 7
1.2.3 MULTIPOTENTES DIFFERENZIERUNGSPOTENTIAL DER MSCS 10
1.2.4 PARAKRINE AKTIVITAET DER MSCS 11
1.2.5 IMMUNOLOGISCHE PRIVILEGIERUNG VON MSCS 12
1.2.6 BEEINFLUSSUNG VON ZELLEN DES IMMUNSYSTEMS DURCH MSCS 13
1.2.6.1 T-LYMPHOZYTEN 13
1.2.6.2 NATUERLICHE KILLERZELLEN 14
1.2.6.3 B-LYMPHOZYTEN 15
1.2.6.4 INTERFERON-GAMMA BEEINFLUSST DIE WIRKUNG DER MSCS 15
1.2.6.5 WIRKUNGSMECHANISMUS 16
1.2.7 KLINISCHE ANWENDUNG DER MSCS 17
1.3 KLINISCHE ANWENDUNG VON MSCS IM BEREICH DER IMMUNMODULATION.... 19
1.4 GMP-KONFORME ISOLATIONS- UND EXPANSIONSBEDINGUNGEN 21
1.5 FRAGESTELLUNG UND ZIELSETZUNG DER ARBEIT 22
2. MATERIAL 24
2.1 SUBSTANZEN, MEDIEN, REAGENZIEN UND KITS 24
2.2 ZUSAMMENSETZUNG DER ZELLKULTURMEDIEN 25
2.3 GERAETE 26
2.4 SOFTWARE 27
2.5 LABORZUBEHOER UND VERBRAUCHSMATERIAL 27
3. METHODEN 29
3.1 ZELLKULTUR 29
3.1.1 ISOLATION DER MSCS AUS DEM
KNOCHENMARK 29
3.1.2 AUSSAAT DER MSCS UND MEDIENWECHSEL 30
3.1.3 DOKUMENTATION 31
3.1.4 PASSAGIEREN 32
I
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3.1.4.1 ABLOESEN DER MSCS 32
3.1.4.2 ZELLZAHLBESTIMMUNG 33
3.1.4.3 AUSSAAT DER MSCS 33
3.1.5 KRYOKONSERVIERUNG 33
3.1.6 AUFTAUEN DER MSCS 34
3.2 BRDU-ELISA 35
3.2.1 GRUNDLAGEN UND TESTPRINZIP 35
3.2.2 VORTEILE DES KOLORIMETRISCHEN IMMUNASSAYS 36
3.2.3 ZUSAMMENSETZUNG DES BRDU-ELISA-KITS UND HERSTELLUNG DER
ARBEITSLOESUNGEN 36
3.2.4 VORGEHENSWEISE 37
3.2.4.1 AUSSAAT DER MSCS AUF 96-WELL PLATTEN 39
3.2.4.2 GEWINNUNG DER PBMCS MIT HILFE EINES DICHTEGRADIENTEN 39
3.2.4.3 AUSSAAT DER PBMCS UND STIMULATION MIT PHA 40
3.2.5 AUSWERTUNG UND STATISTIK 43
3.3 WACHSTUMSKINETIK DER MSCS 43
4. ERGEBNISSE 45
4.1 LICHTMIKROSKOPISCHER VERGLEICH DER VERSCHIEDENEN ZELLPOPULATIONEN..
45
4.2 KOLONIEBILDUNGSRATE DER MSCS (CFU-F) 47
4.3 ADIPOGENE, OSTEOGENE UND CHONDROGENE DIFFERENZIERUNG 48
4.4 WACHSTUMSKINETIK 49
4.4.1 AUSWIRKUNG DER NAEHRMEDIEN AUF DIE POPULATIONSVERDOPPELUNGSZEIT50
4.5 IMMUNMODULATORISCHE EIGENSCHAFTEN DER MSCS:
NACHWEIS MITTELS
ELISA 51
4.5.1 AUSWIRKUNG DER NAEHRMEDIEN AUF DIE IMMUNMODULATORISCHEN
EIGENSCHAFTEN DER MSCS 52
4.5.2 DOSISEFFEKT DER IMMUNMODULATORISCHEN AKTIVITAET DER MSCS 53
5. DISKUSSION 55
5.1 IMMUNMODULATORISCHE EIGENSCHAFTEN DER MSCS 57
5.2 PROLIFERATIONSGESCHWINDIGKEIT DER MSCS 59
6. ZUSAMMENFASSUNG 65
7. LITERATURVERZEICHNIS 67
8. ANHANG 84
9. DANKSAGUNG 85
10. LEBENSLAUF 86
II
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