Der Einfluss von Gremlin-1 auf die Schaumzellbildung:
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Tübingen
Eberhard Karls Univ.
2013
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1. ABKUERZUNGEN
2. EINLEITUNG
2.1. PATHOGENESE DER ATHEROSKLEROSE
2.1.1. ROLLE DER MONOZYTEN UND MAKROPHAGEN IM HINBLICK AUF
SCHAUMZELLBILDUNG
2.1.2. CXCL1/GROA
2.1.3. WEITERE PRO-ATHEROSKLEROTISCHE FAKTOREN
2.1.3.1. MIF
2.1.3.2. CRP
2.1.3.3. INTERIEUKINE
2.1.3.4. ZYTOKINE
2.1.3.4.1. SERUM AMYLOID A
2.1.3.4.2. LEPTIN
2.1.3.4.3. ADIPONEKTIN
2.1.3.4.4. RESISTIN
2.2. GREM1/DRM/IHG-2
2.2.1. GEN
2.2.2. PROTEIN
2.2.3. BMPS
2.2.4. MONOZYTENMIGRATION
2.2.5. ANGIOGENESE
2.2.6. FUNKTIONEN IN ADULTEN GEWEBEN
2.2.7. FUNKTIONEN IN DER EMBRYOLOGIE
2.2.8. DIABETISCHE NEPHROPATHIE
2.3. SCHAUM- UND ENDOTHELZELLENTSTEHUNG IN VITRO
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2.4. VORVERSUCHE DER ARBEITSGRUPPE 22
2.4.1. EXPRESSION VON GREML IN VERSCHIEDENEN ADULTEN GEWEBEN: AORTA. 22
2.4.2. EXPRESSION VON GREML IN ATHEROSKLEROTISCH VERAENDERTEN GEFAESSEN..
23
2.5. FRAGESTELLUNG 24
3. MATERIAL UND METHODIK 24
3.1. MATERIAL 24
3.1.1. GERAETE 24
3.1.2. MATERIALIEN 25
3.1.3. KITS 25
3.1.4. ANTIKOERPER 26
3.1.5. SUBSTANZEN 26
3.1.6. SUBSTANZEN AUS EIGENHERSTELLUNG 28
3.1.6.1. EDTA 0,05% 28
3.1.6.2. SCHAUMZELLMEDIUM 28
3.1.6.3. ACD-PUFFER 28
3.1.6.4. TYRODES 10X 28
3.1.6.5. TYRODES PH 7,4 + 0,1% BSA/ GLUCOSE 29
3.1.6.6. TYRODES PH 6,5 + 0,1% BSA/ GLUCOSE 29
3.1.6.7. LYSEPUFFER 29
3.1.6.8. 70%IGES ETHANOL 29
3.1.6.9. 50XTAE-PUFFER 29
3.1.6.10. IXTAE-PUFFER 30
3.1.6.11.1 %IGES AGAROSEGEL 30
3.1.6.12. PFA1 % 30
3.1.6.13. PFA 0,5% 30
3.1.6.14. 2% GLYCIN IN PBS 30
3.1.6.15.0,2% TRITON IN PBS 30
3.1.6.16. 3% BSA IN PBS 31
3.2. METHODIK 31
3.2.1. ISOLATION VON CD34+-ZELLEN AUS DEM HUMANEN NABELSCHNURBLUT.... 31
3.2.2. ISOLATION VON MONOZYTEN AUS DEM HUMANEN VOLLBLUT 34
3.2.3. ISOLATION VON THROMBOZYTEN AUS DEM HUMANEN VOLLBLUT 36
3.2.4. ANSETZEN EINER KOKULTUR 36
3.2.5. FACS-FAERBUNG 37
3.2.5.1. SCAVENGERREZEPTOREN 37
3.2.5.2. CXCL1 40
3.2.5.2.1. EXTRAZELLULAERE FACS-FARBUNG 40
3.2.5.2.2. INTRAZELLULAERE FACS-FAERBUNG 41
3.2.6. ZYTOKINARRAY 42
3.2.7. ELISA CXCL1/GROA 43
3.2.8. IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNG 45
3.2.9. RNA-ISOLATION AUS ZELLLYSATEN 48
3.2.10. RT-PCR 49
3.2.11. TUNEL-ASSAY 51
3.2.12. PROLIFERATION 52
4. ERGEBNISSE 54
4.1. SCHAUMZELLBILDUNG UNTER DEM EINFLUSS VON GREML 54
4.1.1. DIFFERENZIERUNG VON CD34+-ZELLEN ZU MONOZYTEN, MAKROPHAGEN UND
SCHAUMZELLEN 54
4.1.1.1. SCHEMATISCHE DARSTELLUNG DER DIFFERENZIERUNG 54
4.1.1.2. ABBILDUNG DER DIFFERENZIERUNG 55
4.1.2. VERSUCHSAUFBAU UND ERGEBNIS 55
4.2. DER EINFLUSS VON GREML AUF DIE EXPRESSION VON SCAVENGERREZEPTOREN.
57
4.2.1. SCHEMA: CHOLESTERINSTOFFWECHSEL 58
4.2.2. VERSUCHSAUFBAU UND ERGEBNIS 58
4.2.2.1. CD36-EXPRESSION UNTER DEM EINFLUSS VON GREML 59
4.2.2.2. SCHEMA: DIFFERENZIERUNG VON MONOZYTEN ZU MAKROPHAGEN 60
4.2.2.3. ERGEBNIS FUER CD68, LOX-1 UND MSR-A1 60
4.3. DER EINFLUSS VON GREML AUF DIE SEKRETION VON ZYTOKINEN AUS
MONOZYTEN,
MAKROPHAGEN UND SCHAUMZEILEN (ZYTOKINARRAY) 64
* 4.3.1. ERGEBNIS DES ZYTOKINARRAY 64
4.4. UEBERPRUEFUNG DER ERGEBNISSE DES ZYTOKINARRAYS IM ELISA 65
4.4.1. ERGEBNIS DES ELISA 66
4.5. DER EINFLUSS VON GREML AUF CXCL1 67
4.5.1. AUF PROTEINEBENE 67
4.5.1.1. FACS-MESSUNG ZU CXCL1 67
4.5.1.1.1. ERGEBNIS DER FACS-MESSUNG ZU CXCL1 67
4.5.1.2. IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNG 68
4.5.1.2.1. ERGEBNIS DER IMMUNHISTOCHEMISCHEN FAERBUNG 68
4.5.2. AUF RNA-EBENE 69
4.5.2.1. ERGEBNIS 70
4.6. DER EINFLUSS VON GREML AUF DEN PROGRAMMIERTEN ZELLTOD (APOPTOSE/
TUNEL-ASSAY) 71
4.6.1. ERGEBNIS DES TUNEL-ASSAY 72
4.7. DER EINFLUSS VON GREML AUF DIE ZELL-PROLIFERATION 73
4.7.1. HAECS 73
4.7.2. HUVECS 74
4.8. ZUSAMMENFASSUNG DER ERGEBNISSE 76
5. DISKUSSION 79
5.1. SCHAUMZELLBILDUNG UNTER DEM EINFLUSS VON GREML IN VITRO 79
5.2. REDUKTION VON SCAVENGERREZEPTOREN 79
5.3. REGULATION DER EXPRESSION VON ZYTOKINEN 80
5.4. INTRA- UND EXTRAZELLULAERE REGULATION VON CXCL1 81
5.5. REGULATION DER EXPRESSION VON CXCL1 AUF MRNA-EBENE 81
5.6. PROGRAMMIERTER ZELLTOD (APOPTOSE/ TUNEL-ASSAY) 82
5.7. PROLIFERATION 82
6. SCHLUSSFOLGERUNG 83
7. AUSBLICK . . 83
8. ZUSAMMENFASSUNG 84
9. LITERATURVERZEICHNIS 85
10. ERKLAERUNGEN ZUM EIGENANTEIL 88
11. LEBENSLAUF 89
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