Der Einfluss des Applikationszeitpunktes auf die Effektivität der lokalisierten Neoangiogenese: Stimulation mittels Zell-basierter VEGF - Gentherapie
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1 ZUSAMMENFASSUNG 1
2 EINLEITUNG 3
2.1 WUNDHEILUNG 3
2.1.1 HAEMOSTASE 3
2.1.2 INFLAMMATION 4
2.1.3 PROLIFERATION 5
2.1.4 REMODELLING 6
2.2 ANGIOGENESE UND VASKULOGENESE 6
2.2.1 VASKULOGENESE 6
2.2.2 ANGIOGENESE 8
2.3 VEGF - VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR 9
2.3.1 VEGF 9
2.3.2 VEGF - REZEPTOREN 10
2.3.3 FUNKTION DES VEGF 10
2.3.4 INDUKTION VON VEGF 11
2.4 THERAPEUTISCHE ANGIOGENESE 12
2.4.1 BESCHRIEBENE THERAPIEANSAETZE 13
2.5 KLINISCHE ANWENDUNGSMOEGLICHKEITEN BEI WUNDHEILUNGSSTOERUNGEN
14
3 ZIELE DER ARBEIT 15
4 METHODIK 17
4.1 TIERVERSUCH 17
4.1.1 VERSUCHSTIERE 19
4.1.2 ANAESTHESIE 20
4.1.3 ZUNGENBIOPSIE 20
4.1.4 ISOLATION UND KULTIVIERUNG DER FIBROBLASTEN 21
4.1.5 GENTECHNOLOGISCHE ARBEITEN 22
4.1.6 TRANSFEKTION 23
4.1.7 INJEKTION UND TX - HEBUNG 24
4.2 REAL - TIME POLYMERASEKETTENREAKTION 25
4.2.1 RNA - ISOLIERUNG 26
4.2.2 QUANTIFIZIERUNG DER MRNA 27
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4.3 IN - SITU HYBRIDISIERUNG 31
4.3.1 ANFERTIGUNG DER PRAEPARATE 34
4.3.2 DNA - ISOLIERUNG UND AMPLIFIZIERUNG 35
4.3.3 KLONIERUNG 38
4.3.4 IN VITRO - TRANSKRIPTION 39
4.3.5 IN - SITU HYBRIDISIERUNG DER PRAEPARATE 41
4.4 IMMUNOBLOT 42
4.4.1 PROTEINAUFBEREITUNG 45
4.4.2 SDS - PAGE - GELELEKTROPHORESE 47
4.4.3 BLOTTING 48
4.4.4 DETEKTION 49
4.5 HISTOLOGIE 50
4.5.1 ANFERTIGUNG DER PRAEPARATE 52
4.5.2 H&E- FAERBUNG 52
4.5.3 INDIREKTE IMMUNFLUORESZENZ 53
4.5.4 MIKROSKOPISCHE AUSWERTUNG 53
4.6 STATISTISCHE AUSWERTUNG 54
5 ERGEBNISSE 55
5.1 TRANSFEKTION 55
5.2 REAL-TIME PCR 56
5.2.1 VERGLEICH DER THERAPIESTRATEGIEN 56
5.2.2 UNTERSUCHUNG AUF REGIONALE UNTERSCHIEDE 57
5.2.3 THERAPEUTISCHER EFFEKT DER FIBROBLASTEN 59
5.3 IN -
SITU HYBRIDISIERUNG 62
5.3.1 HERSTELLUNG DER SONDEN 63
5.3.2 QUALITATIVE AUSWERTUNG 63
5.4 WESTERN BLOT 65
5.4.1 VERGLEICH DER THERAPIESTRATEGIEN 65
5.4.2 UNTERSUCHUNG AUF REGIONALE UNTERSCHIEDE 67
5.4.3 THERAPEUTISCHER EFFEKT DER FIBROBLASTEN 68
5.5 HISTOLOGIE 70
5.5.1 H&E - UEBERSICHTSAUFNAHMEN 70
5.5.2 QUALITATIVE AUSWERTUNG 70
6 DISKUSSION 75
6.1 BESCHRIEBENE APPLIKATIONSSYSTEME FUER THERAPEUTISCHE ANGIOGENESE
75
6.2 ANGEWANDTES MODELL DER THERAPEUTISCHEN ANGIOGENESE 77
6.2.1 EFFEKTIVITAET DER THERAPIESTRATEGIEN 78
6.2.2 ORTSBESTAENDIGKEIT DER TRANSFIZIERTEN FIBROBLASTEN 80
6.3 STED
- PARAMETER 81
6.3.1 ERREICHEN DER ZIELZELLEN - PARAMETER S 82
6.3.2 TRANSFEKTIONSEFFIZIENZ - PARAMETER T 82
6.3.3 EXPRESSIONSSTAERKE DERTRANSDUZIERTEN ZELLEN - PARAMETER E 83
6.3.4 TANSFEKTIONSPERSISTENZ - PARAMETER D 83
7 SCHLUSSFOLGERUNG UND AUSBLICK 84
8 LITERATURVERZEICHNIS I
9 ABBILDUNGSVERZEICHNIS XI
10 ANHANG XIII
10.1
DANKSAGUNG XIII
10.2
EHRENWOERTLICHE ERKLAERUNG XIV
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