Einfluss von MTA auf die Differenzierung und Reifung humaner Monozyten zu dendritischen Zellen in vitro:
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INHALTSVERZEICHNIS
ABBILDUNGSVERZEICHNIS IV
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS V
1 EINLEITUNG 1
1.1 DAS IMMUNSYSTEM 1
1.2 DIE ROLLE DER DENDRITISCHEN ZELLEN 2
1.2.1 DENDRITISCHE ZELLEN IN DER
MEDIZIN 4
1.3 VERAENDERUNGEN DES IMMUNSYSTEMS
DURCH TUMORE 4
1.4 5 -DEOXY-5 -METHYLTHIOADENOSIN (MTA): EIN WEITERER IMMUNE ESCAPE-
MECHANISMUS? 6
1.4.1 MOEGLICHE WIRKMECHANISMEN VON MTA 8
1.5 ZIELSETZUNG 10
2 MATERIAL 11
2.1 GERAETE 11
2.2 VERBRAUCHSMATERIAL 12
2.3 CHEMIKALIEN, KITS UND REAGENZIEN 13
2.4 ANTIKOERPER 14
2.4.1 ANTIKOERPER FUER DURCHFLUSSZYTOMETRIE 14
2.4.2 ANTIKOERPER FUER WESTERN-BLOT 14
2.5 RT-QPCR-PRIMER FUER HUMANE SEQUENZEN 15
2.6 SOFTWARE, DATENBANKEN 15
3 METHODEN 16
3.1 ZELLBIOLOGISCHE METHODEN 16
3.1.1 BESTIMMUNG DER ZELLZAHL 16
3.1.2 EINFRIEREN UND AUFTAUEN 16
3.1.3 GEWINNUNG VON MONOZYTEN 17
3.1.4 KULTIVIERUNG VON MONOZYTEN UND GEWINNUNG DENDRITISCHER ZELLEN 18
3.1.5 KULTIVIERUNG VON DENDRITISCHEN ZELLEN ZUR WEITEREN ANALYSE 19
3.2 DURCHFLUSSZYTOMETRIE 19
3.2.1 ANALYSE DER VITALITAET VON MONOZYTEN 19
3.2.2 ANALYSE DER OBERFLAECHENANTIGENEXPRESSION DENDRITISCHER ZELLEN 20
3.3 ZYTOKINMESSUNG MITTELS ELISA 21
3.4 PROLIFERATIONSTEST 21
3.4.1 GEMISCHTE LYMPHOZYTENREAKTION 21
3.4.2 T-ZELLPROLIFERATION OHNE DENDRITISCHE ZELLEN ALS STIMULATOREN 22
I
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INHALTSVERZEICHNIS
3.5 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 22
3.5.1 RNA-ISOLIERUNG 22
3.5.2 REVERSE TRANSKRIPTION 23
3.5.3 POLYMERASE-KETTENREAKTION 23
3.6 PROTEINBIOCHEMISCHE METHODEN 25
3.6.1 PROTEINLYSATE 26
3.6.2 PROTEINBESTIMMUNG 26
3.6.3 SDS-GELELEKTROPHORESE 27
3.6.4 WESTERN-BLOT 29
3.7 STATISTIK 31
4 ERGEBNISSE 32
4.1 EINFLUSS VON 5 -DEOXY-5 -METHYLTHIOADENOSIN (MTA) AUF DIE VITALITAET
VON
MONOZYTEN UND DENDRITISCHEN ZELLEN 32
4.1.1 APOPTOSEINDUKTION IN MONOZYTEN
DURCH MTA 32
4.1.2 ZELLAUSBEUTE DER DENDRITISCHEN ZELLEN BEI
INKUBATION MIT MTA 33
4.2 OBERFLAECHENANTIGENEXPRESSION AUF UNREIFEN, REIFEN DENDRITISCHEN
ZELLEN UND
FAST DCS UNTER DEM EINFLUSS VON MTA 34
4.2.1 OBERFLAECHENANTIGENEXPRESSION AUF IDCS
NACH MTA-ZUGABE 35
4.2.2 OBERFLAECHENANTIGENEXPRESSION AUF MDCS DURCH MTA-ZUGABE 36
4.2.3 OBERFLAECHENANTIGENEXPRESSION AUF FDCS UNTER MTA-ZUGABE 37
4.3 IL-12- UND IL-10-PRODUKTION VON STIMULIERTEN DCS UNTER MTA-ZUGABE 38
4.4 GEMISCHTE LYMPHOZYTENREAKTION (MIXED LYMPHOCYTE REACTION, MLR)
IN
GEGENWART VON MTA 39
4.5 HEMMUNG DER T-LYMPHOZYTENPROLIFERATION DURCH MTA-ZUGABE 42
4.6 REGULATION VON ANTIGENPROZESSIERUNGS-ASSOZIIERTEN FAKTOREN IN
DENDRITISCHEN
ZELLEN DURCH MTA AUF MRNA- UND PROTEINEBENE 44
4.6.1 ANALYSE DES EINFLUSSES VON
MTA AUF DIE GENEXPRESSION VON TAP1,
TAP2, TAPASIN, LMP2, PSMB8 IN DCS DURCH MTA 44
4.6.2 ANALYSE DES EINFLUSSES VON MTA AUF DIE
EXPRESSION VON TAP1, TAP2
UND LMP2 AUF PROTEINEBENE 46
5 DISKUSSION 47
5.1 EINFLUSS VON 5 -DEOXY-5 -METHYLTHIOADENOSIN (MTA)
AUF HUMANE DENDRITISCHE
ZELLEN 47
5.1.1 HEMMUNG DER DC-REIFUNG DURCH MTA 47
5.1.2 MODULATION DER ZYTOKINPRODUKTION DURCH MTA 49
II
INHALTSVERZEICHNIS
5.1.3 HEMMUNG DER T-ZELLAKTIVIERUNG
UND -PROLIFERATION DURCH MTA 50
5.1.4 HEMMUNG DER ANTIGENPROZESSIERUNGSMASCHINERIE IN DCS 52
6 ZUSAMMENFASSUNG 54
7 LITERATURVERZEICHNIS 55
DANKSAGUNG 70
III
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