Chondrogene Hypertrophie von fettgewebe-assoziierten mesenchymalen Stammzellen in Abhängigkeit von BMP-6 und [TGF-beta-1]:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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2013
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| Beschreibung: | 72 Bl. graph. Darst. 30 cm |
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 7
1.1 ALLGEMEINE EINFUEHRUNG ZU GELENKKNORPELDEFEKTEN 7
1.2 AUTOLOGE CHONDROZYTENTRANSPLANTATION
8
1.3 ALTERNATIVE ZELLQUELLEN FUER DIE ZELLBASIERTE THERAPIE HYALINER
KNORPELDEFEKTE 10
1.4 CHONDROGENE DIFFERENZIERUNG ADULTER MESENCHYMALER
STAMMZELLEN 10
1.5 HYPERTROPHIE UND KOLLAGEN TYP X 11
1.6 REGULATION VON KOLLAGEN TYP X 13
1.6.1 REGULATION DURCH TRANSKRIPTIONSFAKTOREN 13
1.6.1.1 RUNT-RELATED TRANSCRIPTION FACTOR 2 (RUNX2)..: 13
1.6.1.2 SPECIFICITY PROTEINE 1
UND 3 14
1.6.2 REGULATION DURCH WACHSTUMSFAKTOREN UND
HORMONE 15
1.6.2.1 TRANSFORMING GROWTH FAKTORSS 15
1.6.2.2 BONE MORPHOGENESE PROTEINS (BMPS) 15
1.6.2.3 SMAD-SIGNALWEG 16
1.6.2.4 WEITERE AN DER KOLLAGEN TYP X-EXPRESSION BETEILIGTE
WACHSTUMSFAKTOREN 17
2 ZIELE DIESER ARBEIT 18
2.1 CHONDROGENESE-HYPERTROPHIE-PROFIL IN DER REAL-TIME PCR.. 19
2.2 HYPERTROPHE KONVERSION UND POTENTIELLE REGULATION IM
ZEITLICHEM VERLAUF. 19
2.2.1 REAL-TIME PCR 19
2.2.2 PROMOTOR-BINDUNGSAKTIVITAET 19
2.3 HEMMUNG DER SP3/SP1-VERMITTELTEN SIGNALTRANSDUKTION DURCH
MITHRAMYCIN A 20
3 MATERIAL UND METHODEN 21
3.1 MATERIALIEN 21
3.1.1 GERAETE 21
3.1.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN 22
3.1.3 CHEMIKALIEN UND
BIOCHEMIKALIEN 23
3.1.4 WACHSTUMSFAKTOREN 23
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INHALTSVERZEICHNIS
3.1.5 GEBRAUCHSLOESUNGEN 24
3.1.6 KITS 25
3.1.7 PRIMER 25
3.2 METHODEN 27
3.2.1 VORBEMERKUNG 27
3.2.2 ZELLISOLATION 27
3.2.3 FACS-ANALYSE 27
3.2.4 ZELLKULTUR 28
3.2.4.1 AUFTAUEN UND AUSSAAT DER ZELLEN
28
3.2.4.2 SPLITTING DER ZELLEN 29
3.2.4.3 EINFRIEREN VON ZELLEN 29
3.2.4.4 PELLETKULTUR. 30
3.2.5 RNA-EXTRAKTION UND
REAL-TIME PCR 30
3.2.5.1 RNA-EXTRAKTION MIT DER RNEASY
METHODE 30
3.2.5.2 CDNA-SYNTHESE 31
3.2.5.3 REAL-TIME PCR 31
3.2.6 PROTEINANALYSE 33
3.2.6.1 ISOLATION DER NUKLEAREN PROTEINFRAKTION 33
3.2.6.2 PROTEINQUANTIFIZIERUNG 34
3.2.6.3 ELISA-BASIERTE BESTIMMUNG DER
TRANSKRIPTIONSFAKTORAKTIVIERUNG VON RUNX2,
SP1 UND SP3 MIT DER TRANSAM
METHODE VON ACTIVE
MOTIF 34
3.2.6.4 RUNX2-PROMOTOR-BINDUNGSAKTIVIERUNG 35
3.2.6.5 SP3/SP
1 -PROMOTOR-BINDUNGSAKTIVIERUNG 36
3.2.7 STATISTISCHE AUSWERTUNG 38
4 ERGEBNISSE 39
4.1 CHONDROGENESE- UND HYPERTROPHIE-PROFIL 39
4.1.1 REAL-TIME PCR 39
4.1.1.1 AGGRECAN 40
4.1.1.2 COMP 40
4.1.1.3 COL2A1 40
4.1.1.4 COL10A1 40
4.1.1.5 AP 40
INHALTSVERZEICHNIS
4.2 HYPERTROPHE KONVERSION UND POTENTIELLE REGULATION IM
ZEITLICHEM VERLAUF. 41
4.2.1 REAL-TIME PCR 41
4.2.1.1 COL10A1 41
4.2.1.2 RUNX2 44
4.2.1.3 SP3 UND SP1 46
4.2.2 TRANSAM:
PROMOTOR-BINDUNGSAKTIVITAET DER
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN RUNX2, SP3 & SP1 49
4.2.2.1 RUNX2-PROMOTOR-BINDUNGSAKTIVITAET 49
4.2.2.2 SP3/SP1-PMMOTOR-BINDUNGSAKTIVITAET 51
4.3 HEMMUNG DER SP3/SP1-VERMITTELTEN SIGNALTRANSDUKTION DURCH
MITHRAMYCIN A 54
5 DISKUSSION 57
5.1 DISKUSSION DER ERGEBNISSE DES CHONDROGENESE- UND
HYPERTROPHIE-PROFILS 58
5.2 DISKUSSION DER ERGEBNISSE ZUR CHONDROGENEN HYPERTROPHIE
UND IHRER POTENTIELLEN REGULATION 59
5.2.1 KOLLAGEN TYP X-EXPRESSION 59
5.2.2 EINFLUSS AUF TRANSKRIPTIONSFAKTOREN 60
5.3 HEMMUNG DES SP3/SP1 SIGNALWEGS MITTELS MITHRAMYCIN A. 63
5.4 IMPLIKATIONEN FUER DIE KONTROLLIERTE CHONDROGENESE VON
MESENCHYMALEN STAMMZELLEN DES FETTGEWEBES 64
6 ZUSAMMENFASSUNG 67
7 LITERATUR 68
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