Funktionelle Charakterisierung von Typ-III-Effektorproteinen in Pflanzen:
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2013
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG 1
SUMMARY 4
1 EINLEITUNG 6
1.1 DAS PFLANZLICHE IMMUNSYSTEM 6
1.1.1 DIE BASALE ABWEHR - PAMP-VERMITTELTE IMMUNITAET (PTI) 8
1.1.2 PRRS 8
1.1.3 EREIGNISSE WAEHREND PTI 9
1.1.4 REGULATION DER PTI 11
1.2 PATHOGENE WAEHREN SICH: PATHOGENITAET- UND VIRULENZFAKTOREN
GRAM-NEGATIVER
BAKTERIEN 11
1.2.1 DAS TYP-ILL-SEKRETIONSSYSTEM 11
1.2.2 TYP-LLL EFFEKTORPROTEINE UND IHRE FUNKTION 13
1.2.2.1 EFFEKTOREN DIE PLASMAMEMBRAN KOMPONENTEN ZUM ZIEL HABEN 14
1.2.2.2 MAPK SIGNALWEG 15
1.2.2.3 TRANSKRIPTION 15
1.2.2.4 VESIKELTRANSPORT 16
1.3 R-PROTEIN-VERMITTELTE ABWEHR VON PFLANZEN - EFFEKTOR-VERMITTELTE
ABWEHR 16
1.3.1 ROLLE DER R-PROTEINE IN DER ETI 17
1.3.2 R-PROTEIN STABILITAET UND GENETISCHE VORAUSSETZUNG FUER DIE ETI 18
1.3.3 GEMEINSAMKEITEN DER ETI UND PTI 19
1.4 ROLLE DER SALIZYLSAEURE IN DER PATHOGENABWEHR 20
1.5 DAS PFLANZENPATHOGEN XANTHOMONAS CAMPESTRIS PV. VESLCATORIA 23
1.6 YOPJ-FAMILIE 24
1.6.1 XOPJ AUS XANTHOMONAS CAMPESTRIS PV. VESICATORIA 25
1.7 ZIELSETZUNG DIESER ARBEIT 26
2 MATERIAL UND METHODEN 27
2.1 MATERIAL 27
2.1.1 CHEMIKALIEN, ENZYME UND VERBRAUCHSMATERIALIEN 27
2.1.2 ANTIKOERPER 27
2.1.3 OLIGONUKLEOTIDE UND SEQUENZIERUNGEN 28
2.1.4 VEKTOREN 30
2.1.5 BAKTERIENSTAEMME 31
2.1.6 HEFESTAEMME 33
2.1.7 PFLANZENMATERIAL UND ANZUCHTBEDINGUNGEN 33
2.2 METHODEN 33
2.2.1 PFLANZENTRANSFORMATION 33
2.2.1.1 TRANSIENTE TRANSFORMATION VON NICOTIANA BENTHAMIANA 33
2.2.1.2 VIRUS-INDUZIERTES GENE SITENCING (VIGS) IN N. BENTHAMIANA UND
PAPRIKA 34
2.2.2 MIKROBIOLOGISCHE METHODEN 34
2.2.2.1 BAKTERIENANZUCHT 34
2.2.2.2 ANZUCHT UND TRANSFORMATION VON HEFE 35
2.2.2.3 INFEKTION VON PAPRIKA ODER N. BENTHAMIANA PFLANZEN MIT XCV 35
2.2.3 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 36
2.2.3.1 MOLEKULARBIOLOGISCHE STANDARDMETHODEN 36
2.2.3.2 ORTSGERICHTETE MUTAGENESE 36
2.2.3.3 ISOLIERUNG VON GESAMT-RNA AUS PFLANZEN 36
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2.2.3.4 DNASE VERDAU UND CDNA SYNTHESE 36
2.2.3.5 QUANTITATIVE REAL-TIME PCR (QRT-PCR) 37
2.2.3.6 TRIPARENTALE KONJUGATION 37
2.2.4 BIOCHEMISCHE UND PHYSIOLOGISCHE METHODEN 38
2.2.4.1 INDUKTION UND AUFREINIGUNG VON AFFINITAETSMARKIERTEN PROTEINEN
AUS E. COLI 38
2.2.4.2 GFP-TRAP AUS N. BENTHAMIANA FUER KOIMMUNPRAEZIPITATION 38
2.2.4.3 IN VITRO KO-IMMUNOPRAEZIPITATION 39
2.2.4.4 PRATEINGELELEKTROPHORESE UND WESTERN BLOT 39
2.2.4.5 WESTERN BUST-STRIPPING 40
2.2.4.6 BESTIMMUNG DER PROTEASOM-UND CYSTEIN-PROTEASEAKTIVITAET 40
2.2.4.7 BESTIMMUNG DES XCV WACHSTUM IN PLANTA 41
2.2.4.8 MESSUNG DER IONEN-LECKAGE 41
2.2.4.9 BESTIMMUNG DER GEHALTE AN SALIZYLSAEURE 41
2.2.5 MIKROSKOPISCHE METHODEN UND HISTOLOGISCHE FAERBUNGEN 42
2.2.5.1 ANILIN-BLAU FAERBUNG VON ARABIDOPSIS TFIALI ANA-BLAETTERN 42
2.2.5.2 TRYPANBLAU FAERBUNG 42
2.2.5.3 KONFOKALE LASERSCANNING MIKROSKOPIE (KLSM) 43
3 ERGEBNISSE 44
3.1 XOPJ 44
3.1.1 IN PLANTA INTERAKTION VON XOPJ UND MUTANTEN MIT RPT6 44
3.1.2 IN VITRO INTERAKTION VON XOPJ UND RPT6 46
3.1.3 SPEZIFISCHE INHIBITION DES PROTEASOMS DURCH XOPJ 47
3.1.4 REKOMBINANTES XOPJ INHIBIERT PROTEASOMAKTIVITAET IN
PFLANZENEXTRAKTEN 49
3.1.5 VIRULENZFUNKTION DES XCV EFFEKTORS XOPJ IN EINER KOMPATIBLEN
INTERAKTION 51
3.1.5.1 EINFLUSS DES EFFEKTORPROTEINS XOPJ AUF DIE XANTHOMONAS
CAMPESTRIS PV. VESICATORIA
(XCV)-PAPRIKA (CAPSICUM ANNUUM ECW) INTERAKTION 51
3.1.5.2 ERHOEHTE PROTEASOMAKTIVITAET WAEHREND DER XCV-PAPRIKA INTERAKTION
52
3.1.5.3 VERLUST VON XOPJ LOEST NEKROSEN IN PAPRIKA AUS 54
3.1.5.4 PHAENOTYPISCHE VERAENDERUNGEN IN PAPRIKABLAETTER NACH XCV INFEKTION
58
3.1.5.5 INHIBITION DES PROTEASOMS VERMINDERT DIE ZELLTOD-REAKTION IN
PAPRIKA 59
3.1.5.6 FUNKTION VON RPT6 WAEHREND DER KOMPATIBLEN INTERAKTION 60
3.1.6 XOPJ SUPPRIMIERT SA-ABHAENGIGE ABWEHRANTWORTEN IN EINER KOMPATIBLEN
INTERAKTION 62
3.1.6.1 MESSUNG DER SA GEHALTE IN XCV INFIZIERTEN PAPRIKA PFLANZEN 62
3.1.6.2 EXOGENE SA BEHANDLUNG IMITIERT DEN VON XCV UEXOPJ-AUSGELOESTEN
PHAENOTYP IN
PAPRIKA 63
3.1.6.3 EXPRESSIONSANALYSE VON SA- UND SENESZENZ-ABHAENGIGEN MARKERGENEN
64
3.1.7 BESTEHT EIN ZUSAMMENHANG ZWISCHEN DEM PROTEASOM UND DER
SA-VERMITTELTEN ANTWORT?
68
3.1.7.1 SA STIMULIERT DIE PROTEASOMAKTIVITAET UND RPT6 GENEXPRESSION 68
3.1.7.2 DIE INHIBITION DES PROTEASOMS DURCH XOPJ (OHRT ZUR AKKUMULATION
VON NPR1 70
3.1.7.3 VERMINDERUNG DER NPR1 UND ICS MRNA-MENGE IN N. BENTHAMIANA UND
PAPRIKA ...71
3.1.8 EINFLUSS DES PROTEASOMS AUF BASALE ABWEHRANTWORTEN 73
3.1.9 MODIFIKATION VON RPT6 DURCH XOPJ 75
3.2 IDENTIFIZIERUNG VON XOPJ-AEHNLICHEN TYP-III EFFEKTOREN 80
3.2.1 POPJ IST EIN XOPJ-HOMOLOG MIT HOHER SEQUENZIDENTITAET 80
3.2.2 POPJ INTERAGIERT MIT RPT6 IN HEFE 83
3.2.3 LOKALISIERUNG VON POPJ IN N. BENTHAMIANA 84
3.2.4 IN PLANTA INTERAKTIONSNACHWEIS ZWISCHEN POPJ UND RPT6 86
3.2.5 ANALYSEN ZUM EINFLUSS VON POPJ AUF DIE PROTEASOMAKTIVITAET IN N.
BENTHAMIANA 88
3.3 ANALYSE DER SSEF-ABHAENGIGEN HR IN N. BENTHAMIANA 91
3.3.1 BEEINFLUSSUNG DER SSEF-INDUZIERTEN HR IN N. BENTHAMIANA PFLANZEN
MIT VERMINDERTER
ENDOGENEN NDR1 UND EDS1 TRANKSRIPTMENGEN 91
3.3.Z TRANSLOKATION DES SALMONELLA EFFEKTORPROTEINS SSEF OBER DAS
XANTHOMONAS T3SS 95
3.3.2.1 ERSTELLUNG DES
CHIMAEREN
AVRRPT2-SSEF KONSTRUKTS UND TEST AUF FUNKTIONALITAT 95
3.3.2.2 DIE TRANSLOKATION DER AVRRPT2-SSEF FUSION OBER DAS T3SS VON XCV
LOEST HR-
AEHNLICHE ANTWORTEN IN N. BENTHAMIANA AUS 96
3.3.3 EINFLUSS DER SEKRETION DES AVRRPT2-SSEF PROTEINS WAHREND DER
KOMPATIBLEN INTERAKTION
VON XANTHOMONAS CAMPESTRIS PV. VESICATORIA MIT PAPRIKA 99
3.3.4 MUTATIONSANALYSE VON SSEF 100
3.3.5 DIE INTERAKTION VON SALMONELLA MIT N. BENTHAMIANA 102
4 DISKUSSION 103
4.1 XCV TYP-LLL EFFEKTORPROTEIN XOPJ 103
4.1.1 XOPJ INTERAGIERT MIT DER PROTEASOMUNTEREINHEIT RPT6 IN VIVO UND IN
VITRO ZUR
BEEINTRAECHTIGUNG DER PROTEASOMAKTIVITAET 103
4.1.2 VERZOEGERUNG DER NEKROSE-BILDUNG DURCH DIE XOPJ-ABHAENGIGE
INHIBITION DES PROTEASOMS
IN DER KOMPATIBLEN INTERAKTION VON XCV MIT PAPRIKA 110
4.1.3 BEEINTRAECHTIGUNG DER SA- UND SENESZENZ-ABHAENGIGEN ANTWORTEN DURCH
XOPJ 113
4.1.4 DESTABILISIERUNG VON RPT6 DURCH XOPJ 118
4.2 POPJ IST EIN XOPJ-HOMOLOG AUS PSEUDOMONAS SYRINGAE PV. LACHRYMANS
121
4.2.1 HOHE SEQUENZIDENTITAET VON XOPJ UND POPJ 121
4.2.2 POPJ LOKALISIERT AN DER PLASMAMEMBRAN 122
4.2.3 INHIBITION DES PROTEASOMS DURCH DIE IN PLANTA INTERAKTION VON POPJ
UND RPT6 123
4.3 DAS TYP-LLL EFFEKTORPROTEIN SSEF AUS DEM TIERPATHOGEN SALMONELLA
LOEST
IMMUNREAKTIONEN IN PFLANZEN AUS 126
4.3.1 DIE SSEF-INDUZIERTE HR IST ABHAENGIG VON NDR1 126
4.3.2 DELETIONEN IN DER TRANSMEMBRAN-DOMAENE 2 FUEHREN ZUM VERLUST DER
ERKENNUNG VON
SSEF IN PLANTA 129
4.3.3 SALMONELLA LOEST KEINE HR-AEHNLICHEN SYMPTOME AUF N. BENTHAMIANA AUS
130
LITERATURVERZEICHNIS 132
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS, 158
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| spelling | Üstün, Şuayıb 1983- Verfasser (DE-588)1044032707 aut Funktionelle Charakterisierung von Typ-III-Effektorproteinen in Pflanzen von Şuayıb Üstün 2013 163 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Erlangen-Nürnberg, Univ., Diss., 2013 Proteasom (DE-588)4315827-4 gnd rswk-swf Xanthomonas campestris vesicatoria (DE-588)4345698-4 gnd rswk-swf Phytopathologie (DE-588)4130197-3 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Xanthomonas campestris vesicatoria (DE-588)4345698-4 s Phytopathologie (DE-588)4130197-3 s Proteasom (DE-588)4315827-4 s DE-604 Erscheint auch als Online-Ausgabe urn:nbn:de:bvb:29-opus4-37138 http://d-nb.info/1075474116/34 Langzeitarchivierung Nationalbibliothek https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:bvb:29-opus4-37138 kostenfrei Volltext http://opus4.kobv.de/opus4-fau/frontdoor/index/index/docId/3713 Verlag kostenfrei Volltext DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=026826596&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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