Etablierung einer Methode zur Gewinnung von RNA aus Bürstenbiopsien der Mundschleimhaut:
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| adam_text | 1. EINLEITUNG 1
2. METHODEN ZUR ERFASSUNG ORALER MALIGNOME UND DEREN
VORSTUFEN 3
2.1. VISUALISIERUNGSHILFEN 4
2.1.1. AUTOFLUORESZENZ 4
2.1.2. INDUZIERTE FLUORESZENZ ! 5
2.1.3. REFLEKTION UND ABSORPTION VON LICHT. 6
2.1.4. TOLUIDINBLAU ?. 6
2.2.
ZYTOPATHOLOGISCHE DIAGNOSTIK 7
2.2.1. KONVENTIONELLE HISTOPATHOLOGISCHE DIAGNOSTIK.
7
2.2.2. COMPUTERGESTUETZTE ZYTOPATHOLOGISCHE ANALYSE 8
2.2.3. DNA ZYTOMETRIE 8
3. RNA 10
3.1. KLASSIFIKATION UND AUFBAU ;....
10
3.1.1. TRANSKRIPTION 10
3.1.2. POSTTRANSSKRIPTIONELLE MODIFIKATION 11
3.1.3. TRANSLATION 12
3.2. RIBONUKLEASEN (RNASEN) 14
3.2.1. DIETHYLPYROCARBONAT (DEPC) 15
3.2.2. GUANIDINTHIOCYANAT. 15
3.2.3. PROTEINASE K. 16
3.2.4. PHENOL / CHLOROFORM / ISOAMYLALKOHOL. 16
4.
GRUNDLAGEN DER RNA-ISOLATION 17
4.1. FLUESSIGKEITSBASIERTEPHASENAUFTRENNUNG 17
4.2. SAEULENCHROMATOGRAPHIE 18
5. MATERIAL UND METHODEN 19
5.1. GERAETSCHAFTEN UND REAGENZIEN 19
5.1.1. RNA- ISOLATIONSKITS 19
5.1.2. WEITERE REAKTIONSKITS 20
5.1.3. WEITERE REAGENZIEN 20
5.1.4. GERAETSCHAFTEN 21
5.1.5. SEQUENZEN DER VERWENDETEN PRIMER 21
5.2. PATIENTENGUT UND PROBENGEWINNUNG 22
5.2.1. PROZEDUR RNA-ISOLATION MIT RNEASY MINIKIT (SAEULENCHROMATOGRAPHIE)
22
5.2.2. PROZEDUR RNA-ISOLATION MITPEQGOLD RNAPURE (FLUESSIGKEITSBASIERTE
PHASENAUFTRENNUNG) 23
5.2.3. PROZEDUR RNA-ISOLATION MITPEQGOLD MICROSPIN RNA KIT
(SAEULENCHROMATOGRAPHIE) 24
5.2.4. PROZEDUR RNA-ISOLATION MIT MRNA CAPTURE KIT 25
HTTP://D-NB.INFO/1044047526
5.3. WEITERVERARBEITUNG DER PROBEN 25
5.3.1. PHOTOMETRISCHE VERMESSUNG DER ISOLIERTEN RNA 25
5.3.2. UMSCHREIBUNG DER ISOLIERTEN RNA IN CDNA MITTELS RT-PCR 25
5.3.3. SEMIQUANTITATIVE BESTIMMUNG DES RNA
-GEHALTS DURCH AMPLIFIKATION DER
CDNA MITTELS PCR UND ANSCHLIESSENDER ELEKTROPHORESE 26
5.3.4. ERMITTLUNG DER RNA-QUALITAET DURCH ELEKTROPHORESE DES RNA-ISOLATS
26
6. ERGEBNISSE 28
6.1. MESSWERTE 28
6.2. ELEKTROPHORESE 33
6.2.1. RNEASY MINIKIT 33
6.2.2. PEQGOLD RNAPURE 34
6.2.3. RNEASY MICROKIT 36
6.2.4. MRNA CAPTURE KIT 37
6.2.5. PCR GEL NACHKONTROLLE 38
6.2.6. DENATURIERENDES RNA GEL 40
6.2.7. POOLVERSUCH 40
6.2.8. ERGEBNISSE DER ELEKTROPHORESE MIT MODIFIZIERTER ISOLATIONSMETHODE
41
7. DISKUSSION DER ERGEBNISSE : 43
7.1. VERSCHIEDENE FRUEHERKENNUNGSMETHODEN UND IHRE PRAKTISCHE
RELEVANZ 43
7.2. DER MOLEKULARBIOLOGISCHE ANSATZ
- DISKUSSION DER EXPERIMENTELLEN
ERGEBNISSE 46
7.3. RELEVANZ DER RESULTATE 49
8. ZUSAMMENFASSUNG 51
9. TABELLENANHANG 53
10. LITERATURVERZEICHNIS 62
11. BILDNACHWEIS 66
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