Der Coxsackievirus- und Adenovirus-Rezeptor (CAR) in Umstrukturierungsprozessen des embryonalen und adulten Herzens:
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2013
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INHALTSVERZEICHNIS
1 ZUSAMMENFASSUNG 1
2 SUMMARY 2
3 EINLEITUNG 3
3.1 DAS HERZ- KREISLAUFSYSTEM 3
3.1.1 DIE MORPHOLOGIE DES HERZENS 3
3.1.2 DER BLUTKREISLAUF 4
3.1.3 DIE BLUTVERSORGUNG DES HERZENS 5
3.1.4 DER HERZZYKLUS 6
3.1.5 DER AUFBAU UND DIE FUNKTION DES ERREGUNGSLEITUNGSSYSTEMS 6
3.1.6 DAS ELEKTROKARDIOGRAMM 7
3.1.7 DIE PRAEVALENZ KARDIOVASKULAERER ERKRANKUNGEN 8
3.2 DER COXSACKIEVIRUS- UND ADENOVIRUS-REZEPTOR (CAR) 9
3.2.1 DAS C/ R-GEN UND DIE CAR-SPLEISSVARIANTEN 9
3.2.2 DIE CAR-PROTEINSTRUKTUR 11
3.2.3 DIE LOKALISATION VON CAR UND SEINE INTERAKTIONSPARTNER 12
3.2.4 DIE REGULATION DER CAR-EXPRESSION .. 15
3.2.5 ERKENNTNISSE AUS CAR-KNOCKOUT-MAEUSEN 16
3.3 CAR BEI HERZERKRANKUNGEN 17
3.3.1 HERZRHYTHMUSSTOERUNG 17
3.3.2 MYOKARDINFARKT 18
3.3.3 MYOKARDITIS 19
3.4 ZIELSTELLUNG DER ARBEIT 22
4 MATERIAL 24
4.1 CHEMIKALIEN 24
4.2 GERAETE 24
4.3 ENZYME 25
4.4 KITS 26
4.5 ANTIKOERPER 26
4.5.1 PRIMAERE ANTIKOERPER 26
4.5.2 SEKUNDAERE ANTIKOERPER 27
4.6 OLIGONUKLEOTIDE 27
4.6.1 OLIGONUKLEOTIDE ZUR GENOTYPISIERUNG 27
4.6.2 OLIGONUKLEOTIDE ZUR KLONIERUNG 27
4.6.3 OLIGONUKLEOTIDE ZUR REAL-TIME PCR 28
5 METHODEN 29
5.1 TIEREXPERIMENTELLE PRAXIS 29
5.1.1 GENOTYPISIERUNG 29
5.1.2 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 32
5.1.3 TAMOXIFENBEHANDLUNG 33
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INHALTSVERZEICHNIS
5.1.4 LIGATION DER LINKEN KORONARARTERIE 33
5.1.5 ECHOKARDIOGRAPHIE 34
5.1.6 ELEKTROKARDIOGRAPHIE 34
5.1.7 MESSUNG DER KOERPERZUSAMMENSETZUNG 35
5.1.8 VIRUSINFEKTION VON MAEUSEN 35
5.2 NUKLEINSAEUREANALYTIK 35
5.2.1 AMPLIFIZIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN 35
5.2.2 DNA-GELEXTRAKTION 36
5.2.3 RESTRIKTIONSVERDAU VON DNA 36
5.2.4 PCR-AUFREINIGUNG 36
5.2.5 LIGATION VON DNA-FRAGMENTEN 37
5.2.6 TRANSFORMATION 37
5.2.7 ISOLATION VON PLASMID-DNA AUS BAKTERIEN 37
5.2.8 ISOLATION VON RNA AUS GEWEBEN 38
5.2.9 RNA-AUFREINIGUNG 38
5.2.10 MESSUNG DER RNA-QUALITAET 38
5.2.11 LLLUMINA GENEXPRESSIONSANALYSE 38
5.2.12 CDNA-SYNTHESE 39
5.2.13 QUANTITATIVE REAL TIME -PCR 39
5.3 PROTEINCHEMISCHE METHODEN 40
5.3.1 PROTEINISOLATION AUS GEWEBE 40
5.3.2 PROTEINKONZENTRATIONSBESTIMMUNG DURCH AMIDOSCHWARZ 41
5.3.3 DISKONTINUIERLICHE SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE 41
5.3.4 WESTERN BLOTTING 42
5.3.5 IMMUNOLOGISCHER NACHWEIS VON PROTEINEN 42
5.3.6 IMMUNFAERBUNG VON PROTEINEN 43
5.3.7 COXSACKIEVIRUS B3 SERUM ELISA 43
5.3.8 MULTIPLEX BEAD-LMMUNOASSAY 43
5.4 ZELLKULTURTECHNIKEN 44
5.4.1 TRANSFEKTION VON SAEUGERZELLEN 44
5.4.2 INFEKTION VON SAEUGERZELLEN 44
5.4.3 PLAQUEASSAY 44
5.5 HISTOLOGISCHE ARBEITEN 45
5.5.1 EINBETTEN VON GEWEBE IN PARAFFIN 45
5.5.2 HAEMATOXYLIN-EOSIN-FAERBUNG 45
5.5.3 MASSON-TRICHROM-FAERBUNG 46
5.5.4 CVB3 IN SITU HYBRIDISIERUNG 46
5.5.5 ELEKTRONENMIKROSKOPIE 46
5.6 STATISTIK 47
6 ERGEBNISSE 48
6.1 CAR IN DER HERZENTWICKLUNG 48
6.1.1 ERZEUGUNG DER HERZSPEZIFISCHEN CAR-RESCUE-MAUS 48
6.1.2 VERIFIZIERUNG DER CAR-RESCUE-MAUS 50
6.2 CAR IN DER CVB3-PATHOGENESE 54
6.2.1 INFEKTIONSSTUDIEN IN DER CAR-RESCUE-MAUS 54
6.2.2 VIRUSREPLIKATION IN ABHAENGIGKEIT VERSCHIEDENER CAR-SPEZIES 59
6.3 CAR IM VERLAUF DES MYOKARDINFARKTS 62
6.3.1 ANALYSE DER UMSTRUKTURIERUNGSPROZESSE NACH MYOKARDINFARKT 62
6.3.2 MOLEKULARE VERAENDERUNGEN NACH MYOKARDINFARKT 67
II
INHALTSVERZEICHNIS
7 DISKUSSION 72
7.1 DIE KARDIALE EXPRESSION VON CAR RETTET DEN LETALEN CAR-KO-PHAENOTYP
72
7.2 CAR-RESCUE-TIERE ENTWICKELN SICH NORMAL 74
7.3 CAR AUS DEM HUHN KANN DIE KARDIALE FUNKTION DES MURINEN CAR ERSETZEN
76
7.4 KARDIALE VERAENDERUNGEN INFOLGE DER UEBEREXPRESSION VON CAR SIND
DOSISABHAENGIG 77
7.5 DER HERZSPEZIFISCHE CAR-RESCUE IST VOR EINER CVB3-LNFEKTION
GESCHUETZT 78
7.6 CAR AUS DEM HUHN ERMOEGLICHT KEINE VIRUSREPLIKATION 80
7.7 SPEZIESSPEZIFISCHE UNTERSCHIEDE ZWISCHEN ZELLULAERER UND VIRALER
FUNKTION VON CAR.... 82
7.8 DIE DELETION VON CAR MINIMIERT DIE FOLGEN EINES MYOKARDINFARKTS 83
7.9 CAR BEEINFLUSST KARDIALE WACHSTUMSPROZESSE 85
7.10 THERAPIEANSAETZE ZUR VERBESSERUNG DER HERZFUNKTION NACH EINEM
MYOKARDINFARKT 88
8 LITERATURVERZEICHNIS 90
9 ABBILDUNGSVERZEICHNIS. 102
10 TABELLENVERZEICHNIS 103
11 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 104
11.1 ALLGEMEINE ABKUERZUNGEN 104
11.2 ABKUERZUNGEN VON PROTEINEN 106
12 DANKSAGUNGEN 107
13 ANHANG 108
III
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