Validierung fluoreszierender Peptidkonjugate für die optische Bildgebung gastrointestinaler Tumormodelle in der Nacktmaus:
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Berlin
Mensch-und-Buch-Verl.
2013
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS VIII
ABBILDUNGSVERZEICHNIS XI
TABELLENVERZEICHNIS XIII
1 EINLEITUNG 1
2 LITERATUR 3
2.1 KOLOREKTALE TUMOREN 3
2.1.1 EPIDEMIOLOGIE 3
2.1.2 URSACHEN 4
2.1.3 TUMORWACHSTUM UND METASTASIERUNG 5
2.1.4 DIAGNOSTIK 6
2.1.4.1 FAEKALER OCCULTER BLUTTEST (FOBT) 7
2.1.4.2 SIGMOIDOSKOPIE 7
2.1.4.3 KOLOSKOPIE 8
2.1.5 THERAPIE 9
2.2 PRAEKLINISCHE TUMORMODELLE 10
2.2.1 MUTATIONSMODELLE 10
2.2.2 TRANSPLANTATIONSMODELLE 11
2.2.3 DIAGNOSTISCHE BILDGEBUNG 13
2.2.4 BIOLUMINESZENZ-BILDGEBUNG 14
2.2.5 FLUORESZENZ-BILDGEBUNG 15
2.2.6 INTEGRINE ALS ZIELSTRUKTUREN FUER DIE MOLEKULARE BILDGEBUNG 17
3 ARBEITSHYPOTHESE UND STRATEGIE DES DISSERTATIONSPROJEKTES 18
4 MATERIAL UND METHODEN 19
4.1 MATERIAL 19
4.1.1 BIOLOGISCHES MATERIAL 19
4.1.1.1 EUKARYOTISCHE ZELLEN 19
4.1.2 ZELLKULTURMEDIEN UND DEREN ZUSAETZE 20
4.1.3 ANTIKOERPER 20
4.1.4 KITS 21
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INHALTSVERZEICHNIS
4.1.5 PUFFER UND LOESUNGEN 21
4.1.6 CHEMIKALIEN/REAGENZIEN 21
4.1.7 NIR-KONTRASTMITTEL 22
4.1.8 SONSTIGE MATERIALIEN 22
4.1.9 BILDGEBENDE UNTERSUCHUNGSGERAETE 24
4.1.10 SOFTWARE DER BILDGEBUNGSGERAETE 25
4.1.11 GERAETE FUER DIE ZELLKULTUR 25
4.2 METHODEN 26
4.2.1 ZELLBIOLOGISCHE METHODEN 26
4.2.1.1 KULTIVIERUNG UND PASSAGIEREN 26
4.2.1.2 EINFRIEREN UND AUFTAUEN 26
4.2.1.3 ZELLZAHLBESTIMMUNG 26
4.2.1.4 MESSUNG DER LUCIFERASEAKTIVITAET IN VITRO 27
4.2.2 TIEREXPERIMENTELLE METHODEN 28
4.2.2.1 VERSUCHSTIERE UND HALTUNG 28
4.2.2.2 SUBCUTANE IMPLANTATION 28
4.2.2.3 VORBEREITUNG ZUR ORTHOTOPEN IMPLANTATION 29
4.2.2.4 IMPLANTATION DER TUMORZELLEN INS KOLON 29
4.2.2.5 POSTOPERATIVES KLINISCHES MANAGEMENT DER VERSUCHSTIERE 30
4.2.3 BILDGEBENDE VERFAHREN 31
4.2.3.1 ENDOSKOPISCHE UNTERSUCHUNG DER TIERE 31
4.2.3.2 VERSUCHSABLAUF 32
4.2.3.3 BIOLUMINESZENZ-BILDGEBUNG 33
4.2.3.4 ERSTELLUNG EINER IN VIVO-KINETIK 34
4.2.3.5 NAH-INFRAROTFLUORESZENZ-BILDGEBUNG 34
4.2.3.6 VORVERSUCH ZUR AUTOFLUORESZENZ 34
4.2.3.7 VORVERSUCH: NIR-KONTRASTMITTEL FUER DAS NIR-FASERENDOSKOP ..35
4.2.3.8 INTEGRIN-BILDGEBUNG MIT DEM NIR-FASERENDOSKOP 36
4.2.3.9 EX VIVO EINSATZ DES NIR-FASERENDOSKOPES 36
4.2.4 EX VIVO AUFARBEITUNG 37
4.2.4.1 SEKTION 37
INHALTSVERZEICHNIS
4.2.5 HE-FAERBUNG UND IMMUNHISTOCHEMISCHE METHODEN 39
4.2.5.1 HERSTELLUNG VON GEFRIERSCHNITTEN 39
4.2.5.2 HAEMATOXYLIN-EOSIN-FAERBUNG (HE-FAERBUNG) 40
4.2.5.3 IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNGEN 40
5 ERGEBNISSE 42
5.1 CHARAKTERISIERUNG DER KOLOREKTALEN ZELLLINIEN 42
5.1.1 ERMITTLUNG DER PHOTONENAUSBEUTE 42
5.1.2 IN V/YRO-LUCIFERASESTABILITAET 43
5.1.3 IN VI VO-LUCIFERASESTABILITAET 45
5.2 ETABLIERUNG DER ORTHOTOPEN IMPLANTATION 46
5.2.1 ORTHOTOPE TUMORIMPLANTATION 46
5.2.2 GRUPPENAUFTEILUNG 47
5.2.2.1 KLINISCHE SYMPTOME FUER DAS TUMORWACHSTUM 49
5.2.2.2 GEWICHTSENTWICKLUNG 51
5.2.3 MONITORING DES TUMORWACHSTUMS 51
5.2.3.1 KOLOSKOPIE UND BEURTEILUNG DER TUMORGROESSE 53
5.2.3.2 BIOLUMINESZENZ BILDGEBUNG (BLI) 54
5.2.4 ANWACHSRATE IN ABHAENGIGKEIT VON DER OPERATIONSMETHODE 57
5.2.4.1 ORTHOTOPES TUMORWACHSTUM 58
5.2.4.2 EX VIVO-CHARAKTERISIERUNG 64
5.2.4.3 METASTASIERUNG 65
5.2.4.4 IMMUNHISTOCHEMISCHER NACHWEIS HUMANER TUMORZELLEN 67
5.3 NAHINFRAROT EXPERIMENTE 70
5.3.1 ANALYSE DER AUTOFLUORESZENZ VERSCHIEDENER FUTTERMITTEL 70
5.3.2 NIR-BILDGEBUNG DER ORTHOTOPEN KOLOREKTALEN TUMOREN 73
5.3.2.1 AUSWAHL EINES GEEIGNETEN KONTRASTMITTELS 73
5.3.2.2 KOLOKALISATION VON FLUORESZENZ UND BIOLUMINESZENZ 75
5.3.2.3 ETABLIERUNG DER NIR-BILDGEBUNG MIT DEM FASERENDOSKOP 76
5.3.2.4 QUANTITATIVE ANALYSE DER NIR-FLUORESZENZSIGNALE 78
5.3.2.5 NIR-FLUORESZENZBILDGEBUNG DER KRYOSCHNITTE 85
5.3.2.6 QUANTIFIZIERUNG DES FLUORESZENZSIGNALES DER KRYOSCHNITTE 86
INHALTSVERZEICHNIS
6 DISKUSSION 89
6.1 DAS ORTHOTOPE KOLOREKTALE TUMORMODELL 89
6.2 MONITORING DES TUMORWACHSTUMS 92
6.2.1 KLINISCHE UEBERWACHUNG 93
6.2.2 BILDGEBENDE VERFAHREN 94
6.2.2.1 ENDOSKOPIE 95
6.2.2.2 BIOLUMINESZENZ 96
6.2.2.3 INTEGRINE ALS ZIELSTRUKTUREN IN DER BILDGEBUNG 98
6.3 UEBERTRAGBARKEIT DER ERGEBNISSE AUF DIE KLINIK 102
7 ZUSAMMENFASSUNG 105
8 SUMMARY 107
9 LITERATURVERZEICHNIS 109
10 ANHANG 132
11 VEROEFFENTLICHUNGEN 136
12 DANKSAGUNG 138
13 SELBSTSTAENDIGKEITSERKLAERUNG 139
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