Biologische Charakterisierung von makroporösen b-Tricalciumphosphat-Oberflächen [Beta-Tricalciumphosphat-Oberflächen]:
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2012
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INHALTSVERZEICHNIS ^
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG UND AUFGABENSTELLUNG 1
2 STAND DER ERKENNTNIS 4
2.1 BIOLOGIE DES MENSCHLICHEN KNOCHENS - STRUKTUR UND MORPHOGENESE 4
2.1.1 DIE KNOCHENMATRIX 4
2.1.2 DIE KNOCHENSPEZIFISCHEN ZELLEN U N D DAS R A N K U R A N K /
OPG-SYSTEM 5
2.2 KNOCHENERSATZMATERIALIEN IN DER KLINISCHEN MEDIZIN 7
2.2.1 GRUNDLEGENDE MECHANISMEN U N D BEGRIFFE IN D E R
KNOCHENREGENERATION 7
2.2.2 ANFORDERUNGEN AN KNOCHENERSATZ UND KNOCHENLAGER 9
2.2.3 KNOCHENERSATZMATERIALIEN BIOLOGISCHEN URSPRUNGS: AUTO-, ALLO-,
XENOGEN 10
2.2.4 DIE SYNTHETISCHEN (ALLOPLASTISCHEN) KNOCHENERSATZMATERIALIEN 12
2.3 GRENZFLAECHENKOMPATIBILITAET UND OSSEOINTEGRATION 14
2.3.1 PROTEIN- UND ZELLADHAESION, POROSITAET, KNOCHENEINWUCHS,
VASKULARITAET 14
2.3.2 PORENGROESSE U N D POROSITAET VON STRUKTUREN 15
3 MATERIAL UND METHODEN 18
3.1 HERSTELLUNGSVERFAHREN UND FORMGEBUNG VON SS-TCP-PROBEKOERPERN 18
3.2 REINIGUNG UND STERILISATION DER SS-TCP-PROBEKOERPER 2 0
3.3 ZELLKULTUREN: L929-FIBROBLASTEN UND HUMANE MESENCHYMALE STAMMZELLEN
20
3.4 GRUNDLEGENDE TECHNIKEN BEI ZELLKULTURSYSTEMEN 2 2
3.4.1 KRYOKONSERVIERUNG U N D LAGERUNG VON L929-FIBROBTASTEN 22
3.4.2 AUFTAUEN VON L929-FIBROBLASTEN 2 3
3.4.3 PASSAGIEREN ADHAERENTER ZELLEN 23
3.4.4 WECHSEL DES ZELLKULTURMEDIUMS 24
3.5 PRAEEXPERIMENTELLE BESTIMMUNG VON ZELLZAHL UND OPTIMALER
AUSSAATDICHTE 2 5
3.6 BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG 2 6
3.6.1 LEBEND-TOT-FAERBUNG 2 1
3.6.2 HAEMALAUNFAERBUNG 28
3.6.3 CELLTITER-BLUE CELL VIABILITY A S S A Y 2 8
3.6.4 C F . O T O X - O N E HOMOGENEOUS MEMBRANE INTEGHTY A S S A Y 29
3.6.5 RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE 3 1
3.7 MATERIALANALYTISCHE UNTERSUCHUNGEN: EDX- UND ICP-ANALYSE 3 1
3.8 STATISTIK- ANGEWANDTE METHODIK 33
4 ERGEBNISSE 34
4.1 BESTIMMUNG D E R OPTIMALEN AUSSAATDICHTE 34
4.2 REM-AUFNAHMEN VON L929-FIBROBLASTEN A U F SS-TCP VOR
ULTRASCHALLREINIGUNG 3 6
4.3 PARTIKELABRIEB UND ULTRASCHALLREINIGUNG 3 8
4.4 ZYTOTOXIZITAETSTESTS MIT L929-FIBROBLASTEN 4 0
4.4.1 L929-FIBROBLASTEN A U F GLASKONTROLLE 4 0
4.4.2 DIREKTER ZYTOTOXIZITAETSTEST MIT L929-FIBROBLASTEN A U F SS - T C P
(MERCK) 4 0
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS IV
4.4.3 INDIREKTER ZYTOTOXIZITAETSTEST MIT L929-FIBROBTASTEN (MERCK U N D
BIOVISION) 4 1
4.5 ERGAENZENDE ZYTOTOXIZITAETSTESTS MIT L929-FIBROBLASTEN 4 3
4.5.1 L929-FIBROB/ASTEN A U F GLASKONFRODE 4 3
4.5.2 DIREKTER ZYTOTOXIZITAETSTEST MIT L929-FIBROBIASTEN A U F SS - T C P
(MERCK) 4 3
4.5.3 INDIREKTER ZYTOTOXIZITAETSTEST M I T L929-FIBROBLASTEN (MERCK UND
BIOVISION) 4 5
4.6 ZYTOTOXIZITAETSTESTS MIT N.MSCS (SPENDER 1) 4 5
4.6.1 HMSCS (SPENDER 1) A U F GLASKONTROLLE 45
4.6.2 DIREKTER ZYTOTOXIZITAETSTEST M I T H M S C S (SPENDER 1) A U F SS -
T C P (MERCK U N D BIOVISION) 4 6
4.6.3 INDIREKTER ZYTOTOXIZITAETSTEST MIT H M S C S (SPENDER 1) (MERCK U N
D BIOVISION) 47
4.7 REM-BEURTEILUNG VON SS-TCP-OBERFLAECHEN NACH ULTRASCHALLREINIGUNG 4 9
4.7.1 SS-TCP-OBERFLAECHEN OHNE ZELLAUSSAAT 49
4.7.2 REM-AUFNAHMEN VON H M S C S (SPENDER 1) 50
4.8 MATERIALANALYTISCHE UNTERSUCHUNGEN 5 4
4.8.1 EDX-ANALYSE 54
4.8.2 ICP-ANALYSE 55
4.9 PROLIFERATIONS- UND ZYTOTOXIZITAETSASSAYS 5 6
4.9.1 PROLIFERATIONSASSAY M I T L929-FIBROBLASTEN 56
4.9.2 PROLIFERATIONSASSAY M I T H M S C S (SPENDER 1) 57
4.9.3 CYTOTOX-ONE A S S A Y MIT L929-FIBROBLASTEN 58
4.9.4 C Y T O T O X - O N E A S S A Y M I T H M S C S (SPENDER 1) 58
4.10 ZYTOTOXIZITAETSTESTS MIT HMSCS (SPENDER 2) 5 9
4.10.1 H M S C S (SPENDER 2) A U F GLASKONTROLLE 59
4.10.2 DIREKTER ZYTOTOXIZITAETSTEST MIT H M S C S (SPENDER 2) A U F SS - T
C P (MERCK) 60
4.10.3 DIREKTER ZYTOTOXIZITAETSTEST MIT H M S C S (SPENDER 2) A U F SS - T
C P (BIOVISION) 61
4.10.4 INDIREKTER ZYTOTOXIZITAETSTESTS MIT H M S C S (SPENDER 2) (MERCK U
N D BIOVISION) 62
5 DISKUSSION 64
6 ZUSAMMENFASSUNG 81
7 LITERATURVERZEICHNIS 83
8 ANHANG 91
8.1 T ABELLENVERZEICHNIS 9 1
8.2 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 91
8.3 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 9 3
8.4 MATERIALLISTEN UND BEZUGSQUELLENNACHWEIS 9 5
9 DANKSAGUNG 98
10 DATENAUFBEWAHRUNG 99
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