Induktion von CD4-T-Zell-Toleranz durch sinusoidale Endothelzellen der Leber:
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2011
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG
1.1 DIE LEBER ALS IMMUNOLOGISCHES ORGAN 1
1.2 ANTIGEN-PRAESENTIERENDE ZELLEN DER LEBER 2
1.2.1 SINUSOIDALE ENDOTHELZELLEN (LSEC) 2
1.2.2 KUPFFERZELLEN (KC) 4
1.2.3 DENDRITISCHE ZELLEN (DC) 6
1.2.4 ITOZELLEN 6
1.2.5 HEPATOZYTEN 7
1.3 INTRAHEPATISCHE LYMPHOZYTEN 8
1.4 MECHANISMEN HEPATISCHER T ZELLTOLERANZ 8
1.4.1 CD4 T ZELL-DIFFERENZIERUNG 8
1.4.2 HEPATISCHE CD4 EFFEKTOR T ZELLANTWORTEN 9
1.4.3 IMMUNDEVIATION HEPATISCHER CD4 T ZELLANTWORTEN 10
1.4.4 INHIBITORISCHE T ZELL STIMULATION IN DER LEBER: CTLA-4 UND
PD-1/PD-L1 11 1.4.5 DAS INHIBITORISCHE ZYTOKINMILIEU IN DER LEBER: IL-10
& TGF-SS 12
1.4.6 REGULATORISCHE T ZELLEN 14
1.4.7 INDUKTION REGULATORISCHER T ZELLEN 16
1.4.8 INTRAHEPATISCHE REGULATORISCHE T ZELLEN 17
1.5 TIERMODELLE 19
1.5.1 MODELL DER MULTIPLEN SKLEROSE: EXPERIMENTELLE AUTOIMMUNEN
ENZEPHALOMYELITIS (EAE) 19
1.5.2 MODELL DER SEPSECS-INDUZIERTEN AUTOIMMUNEN HEPATITIS (AIH) 20
1.6 ZIELSETZUNG 2 2
2 . MATERIAL & METHODEN
2.1 GERAETE 2 4
2 . 2 MATERIALIEN 2 4
2 . 3 PUFFER 2 7
2 . 4 VERSUCHSTIERE 2 8
2 . 5 ISOLATION PRIMAERER ZELLEN 2 8
2.5.1 ISOLATION VON CD4 T LYMPHOZYTEN AUS DER MILZ 28
2.5.2 ISOLATION VON CD4+CD25- UND CD4+CD25+ T LYMPHOZYTEN AUS DER MILZ
29 2.5.3 ISOLATION VON CD11C+ DENDRITISCHEN ZELLEN AUS MILZ UND
MESENTERIELLEN LYMPHKNOTEN 30
2 . 5 . 4 ISOLATION NICHTPARENCHYMATOESER LEBERZELLEN (SINUSOIDALE
ENDOTHELZELLEN, KUPFFERZELLEN, DENDRITISCHE ZELLEN) 30
2 . 5 . 5 ISOLATION VON HEPATOZYTEN 3 2
2.5.6 ISOLATION VON LYMPHKNOTENZELLEN AUS DEN POPLITEALEN LYMPHKNOTEN 32
2 . 6 ZELLKULTUR 3 2
2.6.1 ZELLZAHLBESTIMMUNG 32
2.6.2 ZELLKULTURMEDIEN 33
2.6.3 KULTUR VON PRIMAEREN LSEC, KC UND DC 33
2.6.4 KOKULTUR VON CD4+CD25- T LYMPHOZYTEN UND APC 33
2.6.5 KOKULTUR VON CD4 T LYMPHOZYTEN MIT LSEC UND /ODER DC 34
2.6.6 KOKULTUR VON CD4 T LYMPHOZYTEN MIT LSEC UND /ODER DC IM TRANSWELL
34 2.6.7 KOKULTUR VON LSEC+DC ODER DC MIT LYMPHKNOTENZELLEN 35
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IMAGE 2
2.6.8 RESTIMULATION VON ZELLEN FUER DIE DETEKTION VON ZYTOKINEN IM
ZELLKULTURUEBERSTAND 35
2.6.9 RESTIMULATION FUER DIE INTRAZELLULAERE ZYTOKINFAERBUNG 35
2 . 7 CHARAKTERISIERUNG VON ZELLEN 3 6
2.7.1 VITALITAETSTEST 36
2.7.2 PROLIFERATIONSTEST ; 36
2.7.3 FAERBUNG VON OBERFLAECHENMARKERN 37
2.7.4 INTRAZELLULAERE ZYTOKINFAERBUNG 37
2.7.5 FAERBUNG VON REGULATORISCHEN T ZELLEN 38
2.7.6 DURCHFLUSSZYTOMETRIE 38
2.7.7 ZYTOKINBESTIMMUNG IM ZELLKULTURUEBERSTAND 38
2 . 8 HISTOLOGIE . 3 9
2 . 9 MODELL DER EXPERIMENTELLEN AUTOIMMUNEN ENZEPHALOMYELITIS ( E A E )
3 9
2 . 1 0 INDUKTION EINER AUTOIMMUNEN HEPATITIS 4 0
2.11 STATISTISCHE AUSWERTUNG 4 1
3 . E R G E B N I S S E
3.1 L S E C SUPPRIMI EREN DC-INDUZIERTE PROINFLAMMATORISCHE C D 4 T
ZELLANTWORTEN 4 2
3.1.1 DIE ZYTOKINPRODUKTION VON DIFFERENZIERTEN TH1 UND TH17 ZELLEN WIRD
DURCH LSEC UNTERDRUECKT 42
3.1.2 LSEC INDUZIEREN KEINE PROINFLAMMATORISCHE CD4 T ZELLANTWORT UND
HEMMEN IN KOKULTUR DIE AKTIVIERUNG VON CD4 T ZELLEN DURCH DC 44
3.1.3 LSEC HEMMEN DIE PROLIFERATION DC-AKTIVIERTER CD4 T ZELLEN NICHT 45
3.1.4 DIE HEMMUNG DER DC-INDUZIERTEN CD4 T ZELLANTWORT DURCH LSEC LAESST
SICH DURCH ANTI-CD28 KOSTIMULATION AUFHEBEN 47
3.1.5 DIE HEMMUNG DER CD4 T ZELL-EFFEKTORANTWORT DURCH LSEC WIRD NICHT
DURCH LOESLICHE FAKTOREN VERMITTELT 47
3.1.6 DIE SUPPRESSION DER DC-INDUZIERTEN CD4 T ZELLAKTIVIERUNG DURCH
LSEC IST UNABHAENGIG VON IL-12 UND IL-10 48
3.1.7 LSEC AUS IL-10 KNOCKOUT MAEUSEN KOENNEN DIE DC-INDUZIERTE CD4 T ZELL
AKTIVIERUNG NICHT HEMMEN 50
3.1.8 ROLLE DES PD-L1/PD-1 SIGNALWEGS BEI DER LSEC-VERMITTELTEN
UNTERDRUECKUNG DER DC-INDUZIERTEN CD4 T ZELLANTWORT 52
3.1.9 BEDEUTUNG DER SUPPRESSION DER CD4 T ZELLAKTIVIERUNG DURCH LSEC IN
VIVO 53
3.2 L S E C INDUZIEREN DIE GENERIERUNG REGULATORISCHER T ZELLEN 5 9
3.2.1 DIE INHIBITION DER CD4 T ZELL-EFFEKTORANTWORTEN DURCH LSEC IST
TGF-SSABHAENGIG 59
3.2.2 LSEC INDUZIEREN CD4+FOXP3+ REGULATORISCHE T ZELLEN IN ABHAENGIGKEIT
VON TGF-SS 61
3.2.3 DIE LSEC INDUZIERTE TGF-SS-ABHAENGIGE GENERIERUNG VON ITREG WIRD
DURCH IL-6 GEHEMMT 65
3.2.4 DIE LSEC-INDUZIERTE GENERIERUNG VON ITREG IST UNABHAENGIG VON
RETINOLSAEURE.... 67 3.2.5 DIE BLOCKADE DES ARYLHYDROCARBONSAEUREREZEPTORS
(AHR) HAT KEINEN EINFLUSS AUF DIE ITREG-BILDUNG DURCH LSEC 68
3.2.6 LSEC BINDEN TGF-SS AUF IHRER MEMBRANOBERFLAECHE 69
3.2.7 HEPATOZYTEN UND KUPFFERZELLEN BEGUENSTIGEN DIE GENERIERUNG VON
ITREG 71 3.2.8 LSEC-INDUZIERTE ITREG SCHUETZEN IN VIVO IM MODELL DER
EXPERIMENTELLEN AUTOIMMUNEN ENZEPHALOMYELITIS (EAE) 74
3.2.9 LSEC-INDUZIERTE ITREG SCHUETZEN BESSER VOR DER EAE ALS ITREG, DIE
MITTELS DC AUS MESENTERIELLEN LYMPHKNOTEN GENERIERT WURDEN 75
IMAGE 3
4 . DISKUSSION
4.1 LSEC HEMMEN DC-INDUZIERTE PROINFLAMMATORISCHE CD4 T ZELLANTWORTEN ..
77
4.2 LSEC FOERDERN DIE GENERIERUNG REGULATORISCHER T ZELLEN 84
4 . 3 AUSBLICK Y 9 1
5 . ZUSAMMENFASSUNG 94
6. ANHANG
6.1 LITERATURVERZEICHNIS 96
6.2 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 108
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