Bacillus Calmette Guerin (BCG) zur adjuvanten Therapie des Harnblasenkarzinoms: Eignung eines modernen Verfahrens zur Kultivierung von BCG S4 Jena
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2013
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I N H A L T S V E R Z E I C H N I S
INHALTSVERZEICHNIS I I
A B B I L D U N G S V E R Z E I C H N I S V
TABELLENVERZEICHNIS V I
A B K UE R Z U N G S V E R Z E I C H N I S V I I
1 Z U S A M M E N F A S S U N G 1
2 E I N L E I T U N G 3
2.1 DAS HARNBLASENKARZINOM 3
2.1.1 EPIDEMIOLOGIE 3
2.1.2 AETIOLOGIE UND RISIKOFAKTOREN 3
2.1.3 PATHOLOGIE UND KLASSIFIKATION 4
2.1.4 KLINIK UND DIAGNOSTIK 6
2.2 DIE THERAPIE DES NICHT-MUSKELINVASIVEN HARNBLASENKARZINOMS 6
2.2.1 TRANSURETHRALE RESEKTION (TUR) 6
2.2.2 ADJUVANTE INTRAVESIKALE THERAPIE 7
2.2.2.1 INDIKATION 7
2.2.2.2 ADJUVANTE INTRAVESIKALE BCG-THERAPIE 8
2.3 BCG ALS ORGANISMUS 9
2.3.1 ENTSTEHUNG VON BACILLUS CALMETTE GUERIN - BCG 9
2.3.2 BCG S4 JENA 12
2.3.3 DIE HINTERGRUENDE DER ANTI-TUMOR-AKTIVITAET 14
2.3.4 ANTEIL VON BCG AN DER ANTI-TUMOR-AKTIVITAET 16
2.3.5 BEEINFLUSSUNG VON BCG DURCH DIE KULTIVIERUNG 18
3 ZIELSTELLUNG 2 2
4 M A T E R I A L I E N 2 3
5 M E T H O D E N 3 2
5.1 ZELLBIOLOGISCHE METHODEN 32
5.1.1 ZELLLINIEN 32
5.1.2 KULTIVIERUNG UND PFLEGE DER ZELLEN 32
5.1.3 KRYOKONSERVIERUNG DER ZELLEN 32
5.1.4 SUBKULTIVIERUNG 33
5.1.5 BESTIMMUNG DER LEBENDZELLZAHL MITTELS TRYPANBLAU 33
5.2 MIKROBIOLOGISCHE METHODEN 33
5.2.1 BCG S4 JENA - STAMMHERKUNFT UND ETABLIERUNG EINER NEUEN KUL
TIVIERUNGSMETHODE 33
5.2.2 HERSTELLUNG EINER BCG-SUSPENSION 34
5.2.3 PRUEFUNG DER SUSPENSION 35
5.3 PRUEFUNG DER WIRKSAMKEIT DES S4 JENA STAMMES 35
5.3.1 INAKTIVIERUNG DER BCG-SUSPENSION 35
5.3.2 ZELLPROLIFERATIONSASSAY MIT DEM TETRAZOLIUMSALZ WST-1 35
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
III
5.3.2.1 PRINZIP 35
5.3.2.2 PROLIFERATION DER ZELLEN NACH BCG-ZUGABE 36
5.3.3 INTERNALISIERUNGSASSAY 36
5.3.3.1 BCG MIT FLUORESCEINISOTHIOCYANAT (FITC) MARKIEREN . . . 36
5.3.3.2 PRIMAEREN ANTIKOERPER (RABBIT ANTI-BCG ANTIKOERPER) ABSOR BIEREN
36
5.3.3.3 PRINZIP DER DURCHFLNSSZYTOMETRIE 37
5.3.3.4 INTERNALISIERUNG VON BCG AM DURCHFLUSSZYTOMETER . . . . 37
5.3.3.5 INTERNALISIERUNG AM RASTERELEKTRONENMIKROSKOP (REM) . . 38
5.3.3.6 KONFOKALE LASER SCANNING MIKROSKOPIE 39
5.3.3.7 INTERNALISIERUNGSASSAY AM LASER SCANNING MIKROSKOP (LSM) 40
5.3.4 ZELLZYKLUSANALYSEN 41
5.3.4.1 PRINZIP DER ZELLZYKLUSANALYSE IN DER DURCHFLUSSZYTOMETRIE 41
5.3.4.2 ZELLZYKLUSANALYSEN NACH BCG-INFEKTION MIT DEM DURCHFLUSS
ZYTOMETER 41
5.3.5 ANNEXIN V-ASSAY 42
5.3.5.1 PRINZIP DES ANNEXIN V-ASSAYS 42
5.3.5.2 ANNEXIN V IN DER DURCHFLUSSZYTOMETRIE NACH BCG-INKUBATION 43
6 E R G E B N I S S E 4 4
6.1 ETABLIERUNG EINES NEUEN ANZUCHTVERFAHRENS FUER BCG S4 JENA 44
6.2 PRUEFUNG DER SUSPENSION 44
6.2.1 EINFLUSS VERSCHIEDENER SAUTONLOESUNGEN AUF PHARMAZEUTISCHE
KRITERIEN 45 6.3 PRUEFUNG DER WIRKSAMKEIT VON BCG S4 JENA AN
HARNBLASENKARZINOMZELLLINIEN 47 6.3.1 PROLIFERATION DER
HARNBLASENKARZINOMZELLEN NACH BCG-INKUBATION . 47
6.3.2 INTERNALISIERUNG VON BCG 49
6.3.2.1 INTERNALISIERUNG IN DER DURCHFLUSSZYTOMETRIE 49
6.3.2.2 INTERNALISIERUNG AM LASER SCANNING MIKROSKOP 53
6.3.2.3 INTERNALISIERUNG IN DER RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE . . . . 56
6.3.3 EINFLUSS VON BCG AUF DEN ZELLZYKLUS 61
6.3.4 EINFLUSS VON BCG AUF DIE PRAESENTATION VON PHOSPHATIDYLSERIN . . . .
67
7 D I S K U S S I O N 7 5
7.1 ETABLIERUNG EINES NEUEN ANZUCHTVERFAHRENS FUER BCG S4 JENA 75
7.2 PRUEFUNG DER SUSPENSION 75
7.3 EINFLUSS VERSCHIEDENER SAUTONLOESUNGEN AUF PHARMAZEUTISCHE KRITERIEN
. . . 78 7.4 ZELLPROLIFERATION 79
7.5 INTERNALISIERUNG 83
7.6 ZELLZYKLUSANALYSEN 87
7.7 EINFLUSS VON BCG AUF DIE TRANSLOKATION VON PHOSPHATIDYLSERIN 90
7.8 UEBERGREIFENDE DISKUSSION DER ERGEBNISSE 93
8 S C H L U S S F O L G E R U N G 9 8
LITERATURVERZEICHNIS 9 9
A N H A N G 126
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
EHRENWOERTLICHE E R K L AE R U N G
D A N K S A G U N G
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