Einfluss verschiedener Immunmechanismen auf die Therapie der chronisch myeloischen Leukämie:
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2013
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS 4
VORBEMERKUNG 7
1 EINLEITUNG 9
1.1 KLINISCHE GRUNDLAGEN DER CML 9
1.2 DAS PHILADELPHIA CHROMOSOM 10
1.3 MOLEKULARE GRUNDLAGEN DER CML 12
1.3 DIE THERAPIE DER CML 14
1.4 ALLOGENE STAMMZELLTRANSPLANTATION 16
1.5 IMMUNTHERAPEUTISCHE STRATEGIEN BEI DER CML 17
1.6 DAS PROTEASOM UND DER MHC-KLASSE I TRANSPORTWEG 18
1.7 ZIELE DER ARBEIT 20
1.7.1 ZIELSETZUNG DES THEMAS DIE TYROSINKINASE-INHIBITOREN IMATINIB UND
NILOTINIB
BEEINFLUSSEN DIE MHC-KLASSE I PRAESENTIERUNG DURCH DIE MODULIERUNG DER
PROTEASOMALEN AKTIVITAET 20
1.7.2 ZIELSETZUNG DES THEMAS INTERFERON Y BEEINFLUSST DIE
THERAPEUTISCHEN EFFEKTE
DER TYROSINKINASE-INHIBITOREN IN CML ZELLEN 20
2 MATERIAL 22
2.1 GERAETE 22
2.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN 23
2.3 CHEMIKALIEN 23
2.4 MEDIEN UND REAGENZIEN 23
2.4.1 ZELLKULTUR 23
2.4.2 PROTEINBIOCHEMIE 24
4
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IMAGE 2
2.4.3 PROTEASOME 25
2.4.4 ANTIKOERPER 26
2.4.5 MOLEKULARBIOLOGIE (PCR) 27
2.5 PUFFER UND STAMMLOESUNGEN 27
2.6 ZELLEN 29
3 METHODEN 30
3.1 ZELLBIOLOGISCHE METHODEN 30
3.1.1 ZELLKULTUR 30
3.1.2 ISOLIERUNG DER LEUKOZYTENPOPULATION AUS PATIENTENMATERIAL ODER
BUFFY COATS
30
3.1.3 ISOLIERUNG VON CD3 + T-ZELLEN 30
3.1.4 BESTIMMUNG DER LEBENDZELLZAHL 31
3.1.5 AUFTAUEN UND EINFRIEREN VON ZELLEN 31
3.1.6 DURCHFLUSSZYTOMETRIE 32
3.1.7 PROLIFERATIONSMESSUNG 33
3.2 MOLEKUIARBIOLOGISCHE METHODEN 34
3.2.1 HERSTELLUNG VON ZELLLYSATEN 34
3.2.2 PROTEINKONZENTRATIONSBESTIMMUNG 34
3.2.3 HERSTELLUNG VON KEMEXTRAKTEN 35
3.2.4 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) 35
3.2.5 ACTIVE SITE LABELING 37
3.2.6 WESTERN BLOT 37
3.2.7 RNA GEWINNUNG 38
3.2.8 HERSTELLUNG VON CDNA 39
3.2.9 REVERSE TRANSKRIPTASE-POLYMERASEKETTENREAKTION (RT-PCR) 39
3.2.10 FLUORIMETRISCHE MESSUNG VON ISOLIERTEN 20S PROTEASOMEN 40
4 ERGEBNISSEI 41
4.1 REDUZIERUNG DER PROTEASOMAKTIVITAET NACH BEHANDLUNG VON K-562 ZELLEN
MIT
IMATINIB 41
5
IMAGE 3
4.2 UNTERSUCHUNG DER HLA-ABC EXPRESSION NACH ZUGABE VON TKI 42
4.3 BCR-ABL-UNABHAENGIGE REDUKTION DER PROTEASOMAKTIVITAET UNTER IMATINIB.
46
4.4 UNTERSCHIEDLICHE PROTEASOMAKTIVITAET NACH BEHANDLUNG MIT ANDEREN
TKI... 47
4.5 DIE WIRKUNG VON TKI AUF ISOLIERTE 20S PROTEASOME 48
4.6 DER EINFLUSS VON PHOSPHATASEN AUF DIE PROTEASOMAKTIVITAET 49
5 DISKUSSION 1 51
6 ERGEBNISSE II 54
6.1 PMA/LONOMYCIN-AKTIVIERTE CD3* T-ZELLEN VERHINDERN DIE
TKI-VERMITTELTE
APOPTOSE-INDUKTION 54
6.2 DIE TKI-INDUZIERTE KERNFRAGMENTIERUNG VON CML ZELLEN KANN DURCH
INTERFERON Y VERMINDERT WERDEN 56
6.2 DIE ZUGABE VON INTERFERON Y ZU TKI-BEHANDELTEN CML ZELLEN FUEHRT ZU
EINER
ERHOEHUNG DER PROLIFERATIONSRATE 59
6.3 ERHOEHUNG DER HLA-ABC-EXPRESSION DURCH INTERFERON Y IN
TKI-BEHANDELTEN
CML ZELLEN 64
7 DISKUSSION II 66
8 ZUSAMMENFASSUNG 69
9 LITERATUR 71
10 DANKSAGUNG 81
11 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 83
12 LEBENSLAUF 86
13 EIGENE PUBLIKATIONEN 88
6
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