Isolierung, Kultivierung und Charakterisierung von Endothelzellen und Perizyten aus Arteriolen und Venulen des Rinderherzens:
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I
INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 1
2. MATERIALIEN UND METHODEN 6
2.1. VERBRAUCHSMATERIALIEN 6
2.2. GERAETE 6
2.3. SPEZIALANFERTIGUNGEN 7
2.4. GASE UND GASGEMISCHE 7
2.5. FEINCHEMIKALIEN 7
2.6. LOESUNGEN 8
2.7. REAGENTIEN FUER DIE HISTOLOGIE 9
2.8. ZELLKULTURMEDIEN 10
2.9. METHODIK 10
2.9.1. ENZYMATISCHE DISSOZIATION VON HERZEN VERSCHIEDENER SPEZIES 10
2.9.1.1. ENZYMATISCHE DISSOZIATION VON RATTEN- UND
MEERSCHWEINCHENHERZEN 10
2.9.1.2. ENZYMATISCHE DISSOZIATION VON RINDERHERZEN 12
2.9.2. GEWINNUNG STARK ANGEREICHERTER ZELLSUSPENSIONEN ALS
AUSGANGSPRAEPARATE FUER VENULAERE UND ARTERIOLAERE ENDOTHELZELL
BZW. PERIZYTENKULTUREN 15
2.9.3. GEWINNUNG REINER ZELLKULTUREN ENDOTHELIALEN ODER PERIZYTAEREN
URSPRUNGS DURCH VERSCHIEDENE ZELLKULTIVATORISCHE METHODEN 16
2.9.3.1. ISOLIERUNG VENULOERER ENDOTHELZELLEN 16
2.9.3.2. ISOLIERUNG ARTERIOLAERER ENDOTHELZELLEN 18
2.9.3.3. ISOLIERUNG VON PERIZYTEN 19
2.9.4. HISTOLOGISCHE METHODEN 19
2.9.4.1. ENZYMHISTOCHEMISCHE UNTERSUCHUNGEN 19
2.9.4.2. FLUORESZENZHISTOLOGIE 20
2.9.5. MASSENKULTUR VON PERIZYTEN 21
2.9.5.1. MASSENKULTUR VON PERIZYTEN AUF MIKROCARRIERN 21
2.9.5.2. MASSENKULTUR VON PERIZYTEN IN SPEZIELLEN WACHSTUMSSAEULEN 23
2.9.6. WACHSTUMSBEOBACHTUNGEN AN LEBENDEN ZELLKULTUREN UNTER DEM
MIKROSKOP 25
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IMAGE 2
N
3. ERGEBNISSE 26
3.1. SCHAFFUNG VERBESSERTER APPARATIVER UND METHODISCHER VORAUSSETZUNGEN
ZUR VOLLSTAENDIGEN UND ROUTINEMAESSIGEN PROTEOLYTISCHEN DESINTEGRATION VON
HERZEN VERSCHIEDENER SPEZIES 26
3.2. SUCHE NACH EINER EINFACHEN METHODE ZUR GEWINNUNG STARK
ANGEREICHERTER
ZELLSUSPENSIONEN ALS AUSGANGSPRAEPARATE FUER ENDOTHELZELLEN UND PERIZYTEN
AUS VENULEN UND ARTERIOLEN DES MYOKARDGEWEBES 31
3.3. ERPROBUNG VERSCHIEDENER METHODISCHER VERFAHREN ZUR GEWINNUNG REINER
ZELLKULTUREN ENDOTHELIALEN UND PERIZYTAEREN URSPRUNGS 33 3.3.1. REINIGUNG
VON KULTUREN DURCH AUSSCHABETECHNIK 33
3.3.2. REINIGUNG VON KULTUREN DURCH SELEKTIVE VERMINDERUNG DER
ADHAESIVITAET VON PERIZYTEN 37
3.3.3. SELEKTIVE PROLIFERATION ARTERIOLAERER ENDOTHELZELLEN DURCH
KOMBINATION ZWEIER WACHSTUMSMEDIEN UND ANWENDUNG
EINES SPEZIELL ERPROBTEN ZEITPROTOKOLLES 39
3.4. HISTOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG DER ERHALTENEN ZELLKULTUREN 42
3.4.1. UNTERSUCHUNG VON ZELLEN VENULAEREN URSPRUNGS 42
3.4.2. UNTERSUCHUNG VON ZELLEN ARTERIOLAEREN URSPRUNGS 46
3.5. GEWINNUNG REINER PERIZYTENKULTUREN UND ERPROBUNG BZW.
WEITERENTWICKLUNG VON VERFAHREN ZUR MASSENKULTUR VON PERIZYTEN
MIKROVASKULAEREN URSPRUNGS AUS DEM BOVINEN KORONARSYSTEM 48
3.5.1. ISOLIERUNG REINER PERIZYTENKULTUREN IN GROESSEREM AUSMASS 48
3.5.2. MASSENKULTUR VON PERIZYTEN 51
4. DISKUSSION 56
4.1. PROTEOLYTISCHE DESINTEGRATION VON MYOKARD UND GEWINNUNG
ANGEREICHERTER ZELLSUSPENSIONEN 56
4.2. ISOLIERUNG VON MIKROVASKULAEREN ENDOTHELZELLEN VENULAEREN URSPRUNGS
58
4.3. ISOLIERUNG VON MIKROVASKULAEREN ENDOTHELZELLEN ARTERIOLAEREN
URSPRUNGS 60
4.4. ISOLIERUNG VON PERIZYTEN 61
4.5. IDENTIFIZIERUNG DER ISOLIERTEN ENDOTHELZELLEN UND PERIZYTEN 63
4.6. MASSENKULTUR AUF MIKROCARRIEM 64
5. ZUSAMMENFASSUNG 65
IMAGE 3
I N
LITERATURVERZEICHNIS 67
VERZEICHNIS DER VERWENDETEN ABKUERZUNGEN 72
DANKSAGUNG 73
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