Zytosolische DNA aktiviert das AIM2-Inflammasom in Keratinozyten bei Psoriasis:
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 7
1.1 PSORIASIS 7
1.2 ANTIMIKROBIELLE PEPTIDE 10
1.2.1 CATHELICIDIN 12
1.2.2 CATHELICIDIN UND PSORIASIS 1 4
1.3 INFLAMMASOME 15
1.3.1 AIM2-LNFLAMMASOM 18
1.4 ZIEL DER UNTERSUCHUNG 20
2. MATERIAL UND METHODEN 22
2.1 MATERIAL 22
2.1.1 HAUTPROBEN VON PATIENTEN 2 2
2.1.2 ZELLEN UND ZELLKULTUR 22
2.2 ANALYSEMETHODEN 23
2.2.1 STIMULATION UND TRANSFEKTION D E R ZELLEN 2 3
2.2.2 SYNTHESE VON BIOTINYLIERTER O D E R FITC-MARKIERTER DNA 2 4
2.2.3 QUANTITATIVE REAL-TIME PCR 2 5
2.2.3.1 RNA-EXTRAKTION 2 5
2.2.3.2 CDNA-SYNTHESE 2 5
2.2.3.3 QRT-PCR 2 6
2.2.4 WESTERN-BIOT 2 7
2.2.4.1 PROTEINISOLIERUNG UND -AUFBEREITUNG 2 7
2.2.4.2 PROTEINKONZENTRATIONSMESSUNG 2 7
2.2.4.3 WESTERN-BLOT 2 8
2.2.4.4 GEL-ELEKTROPHORESE 2 8
2.2.4.5 BLOTTEN AUF PVDF-MEMBRAN 2 9
2.2.4.6 FAERBUNG UND INKUBATION MIT ANTIKOERPERN 29
2.2.5 IMMUNHISTOCHEMIE 3 0
2.2.6 IMMUNFLUORESZENZ 3 1
2.2.7 TUNEL-FAERBUNG ZUM NACHWEIS FREIER DSDNA 3 1
2.2.8 PRAEPARATION D E R ZYTOSOLEXTRAKTE 32
4
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IMAGE 2
2.2.9 ISOLIERUNG D E R BIOTINYLIERTEN DNA
UND BESTIMMUNG D E S DNA-GEBUNDENEN LL- 37 (DOT-BLOT) 3 3
2.2.10 ISOLIERUNG GENOMISCHER DNA (GDNA) 3 4
2.2.11 EXPERIMENTELLE ZERSTOERUNG D E R OBERFLAECHLICHEN HAUTBARRIERE 3 4
2.2.12 BESTIMMUNG D E R ZELLULAEREN LL-37-AUFNAHME 3 4
2.2.13 IL-LSS-ELISA 3 4
2.2.14 STATISTISCHE ANALYSE 3 6
3. ERGEBNISSE 37
3.1 IL-LSS IST IN PSORIATISCHEN LAESIONEN AKTIVIERT 37
3.2 KERATINOZYTEN IN PSORIATISCHEN LAESIONEN PRODUZIEREN
ERHOEHTE MENGEN AN AIM2 38
3.3 ZYTOSOLISCHE DNA INDUZIERT DIE IL-LSS-AUSSCHUETTUNG
IN KERATINOZYTEN UEBER DAS AIM2-LNFLAMMASOM 42
3.4 ZYTOSOLISCHE DNA IST IN KERATINOZYTEN
IN PSORIATISCHEN LAESIONEN IN VIVO VORHANDEN 47
3.5 DAS ANTIMIKROBIELLE CATHELICIDIN PEPTID LL-37 VERMINDERT
DIE AIM2-ABHAENGIGE IL-LSS-SEKRETION DURCH BINDUNG
AN ZYTOSOLISCHE DNA 50
3.6 LL-37 BINDET AN DNA IM ZYTOSOL UND VERHINDERT SO DIE
AIM2INFLAMMASOMBILDUNG 53
4. DISKUSSION 62
4.1 EIN AKTIVES AIM2-LNFLAMMASOM IN PSORIASIS 62
4.2 ZYTOSOLISCHE DNA ALS EIN ENTSCHEIDENDES
KRANKHEITS-ASSOZIIERTES MOLEKULARES MUSTER IN PSORIASIS 6 3
4.3 LL-37 ALS REGULATOR DER AUTOINFLAMMATION IN PSORIASIS 64
5
IMAGE 3
4.4 POSTTRANSKRIPTIONALE REGULATION DER IL-LSS-SEKRETION
ALS THERAPIEANSATZ IN PSORIASIS 66
4.5 CATHELICIDIN ALS ANGRIFFSPUNKT FUER NEUE THERAPIEN
IN DER BEHANDLUNG DER PSORIASIS 67
5. ZUSAMMENFASSUNG 68
6. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 7 1
7. ABBILDUNGSVERZEICHNIS 7 4
8. LITERATURVERZEICHNIS 7 8
VEROEFFENTLICHUNG D E R ARBEIT 84
DANKSAGUNG, LEBENSLAUF 8 5
6
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