Optimierung der axial vaskularisierten primär stabilen Knochengewebszüchtung im arteriovenösen Gefäßschleifenmodell des Schafes mit dem Ziel der Therapie von Knochendefekten kritischer Größe:
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS V
1 EINLEITUNG 1
2 LITERATURUEBERSICHT 3
2.1 KNOCHENGEWEBE - FUNKTION, AUFBAU, REGENERATION 3
2.1.1 FUNKTION UND AUFBAU VON KNOCHENGEWEBE 3
2.1.2 KNOCHENNEUBILDUNG UND REGENERATIONSPOTENZIAL 8
2.1.3 DERZEITIGE THERAPIEOPTIONEN VON KNOCHENDEFEKTEN 10
2.2 TISSUE ENGINEERING VON KNOCHENGEWEBE 13
2.2.1 KNOCHENERSATZMATERIALIEN 14
2.2.2 OSTEOGENE ZELLEN 18
2.2.3 KNOCHENWACHSTUMSFAKTOREN 20
2.2.4 BISHERIGE STRATEGIEN ZUR ZUECHTUNG VON VASKULARISIERTEM
KNOCHENERSATZ 22 2.3 MIKROCHIRURGISCHE TIERMODELLE UND DAS
GERINNUNGSSYSTEM 27
2.3.1 MIKROCHIRURGIE UND THROMBOEMBOLIEPROPHYLAXE 27
2.3.2 UEBERBLICK UEBER DAS GERINNUNGSSYSTEM 29
2.3.3 UNTERSCHIEDE IM GERINNUNGSSYSTEM VON MENSCH UND SCHAF 34
2.3.4 ANTIKOAGULATIONSSTRATEGIEN IM MENSCHEN UND IM TIERMODELL SCHAF 36
2.3.4.1 ACETYLSALICYLSAEURE, CLOPIDOGREL UND TICAGRELOR 36
2.3.4.2 ENOXAPARIN-NATRIUM 40
2.3.4.3 DABIGATRANETEXILAT 41
2.3.5 ZIELSETZUNG 43
3 MATERIAL UND METHODEN 45
3.1 V ERSUCHSTIERE 45
3.1.1 ART, RASSE UND HERKUNFT 45
3.1.2 HALTUNGSSYSTEM 45
3.2 VERSUCHE ZUR GERINNUNGSHEMMUNG 46
3.2.1 DIAGNOSTIK 46
3.2.1.1 VERWENDETES MATERIAL 46
3.2.1.2 IMPEDANZAGGREGOMETRIE (MULTIPLATE) 47
3.2.1.3 LICHTTRANSMISSIONSAGGREGOMETRIE 48
3.2.1.4 REFERENZWERTE FUER DIE AGGREGOMETRISCHEN UNTERSUCHUNGEN 50
3.2.1.5 CLOPIDOGREL- UND CLOPIDOGRELCARBONSAEUREKONZENTRATION IM
BLUTPLASMA 50 3.2.1.6 BLUTUNGSZEIT 51
3.2.1.7 ANTI-FAKTOR XA BESTIMMUNG 51
3.2.1.8 DABIGATRANKONZENTRATION IM BLUTPLASMA 52
3.2.2 VERSUCHSGRUPPEN - GERINNUNGSHEMMUNG 53
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IMAGE 2
3.2.3 STATISTISCHE AUSWEITUNG - GERINNUNGSHEMMUNG 56
3.3 KNOCHEN TISSUE ENGINEERING 57
3.3.1 NANOBONE 57
3.3.2 ISOLATIONSKAMMER 58
3.3.3 MESENCHYMALE STAMMZELLEN 59
3.3.3.1 VERWENDETES MATERIAL 59
3.3.3.2 GEWINNUNG DER MESENCHYMALEN STAMMZELLEN 60
3.3.3.3 AUFARBEITUNG DER MESENCHYMALEN STAMMZELLEN 61
3.3.3.4 DIL MARKIERUNG 63
3.3.4 W ACHSTUMSFAKTOR RHBMP-2 64
3.3.5 MATRIX 64
3.3.6 NARKOSEREGIME UND PERIOPERATIVES MANAGEMENT 64
3.3.6.1 VERWENDETES MATERIAL 64
3.3.6.2 ANAESTHESIE DER SCHAFE 66
3.3.6.3 VERSUCHSABSCHNITT 1: SUBKUTANE VERSUCHSGRUPPEN 67
3.3.6.4 VERSUCHSABSCHNITT 2: AV-LOOP VERSUCHSGRUPPE 69
3.3.7 HISTOLOGISCHE AUSWERTUNG 72
3.3.7.1 VERWENDETES MATERIAL 72
3.3.7.2 AUFARBEITUNG DER PROBEN 75
3.3.7.3 HISTOLOGISCHE FAERBUNGEN 76
3.3.7.4 IMMUNHISTOLOGISCHE FAERBUNGEN 78
3.3.7.5 AUSWERTUNG DER FAERBUNGEN/HISTOMORPHOMETRIE 81
3.3.8 RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE/ENERGIEDISPERSIVE ROENTGENSPEKTROSKOPIE
84 3.3.9 MOLEKULARBIOLOGISCHE UNTERSUCHUNG MITTELS QUANTITATIVER
REAL-TIME PCR 84 3.3.9.1 VERWENDETES MATERIAL 84
3.3.9.2 SUBKUTANE VERSUCHSGRUPPEN 85
3.3.10 BILDGEBENDE DIAGNOSTIK 88
3.3.10.1 FARBKODIERTE DOPPLERSONOGRAPHIE 88
3.3.10.2 INTRAVITALE MAGNETRESONANZTOMOGRAPHIE 88
3.3.10.3 MIKRO-COMPUTERTOMOGRAPHIE 90
3.3.11 STATISTISCHE AUSWERTUNG - KNOCHEN TISSUE ENGINEERING 91
4 ERGEBNISSE 93
4.1 ETABLIERUNG EINER OPTIMALEN GERINNUNGSHEMMUNG IM SCHAF. 93
4.1.1 VERFAHREN ZUR MESSUNG DER THROMBOZYTENFIINKTION IM SCHAF 93
4.1.2 VERTRAEGLICHKEIT DER MEDIKAMENTE 93
4.1.3 WIRKUNG VON ACETYLSALICYLSAEURE AUF DIE OVINE
THROMBOZYTENAGGREGATION 94 4.1.4 WIRKUNG VON CLOPIDOGREL AUF DIE OVINE
THROMBOZYTENAGGREGATION 95 4.1.5 BLUTPLASMAKONZENTRATION VON CLOPIDOGREL
UND CLOPIDOGRELCARBONSAEURE 98 4.1.6 WIRKUNG VON TICAGRELOR AUF DIE OVINE
THROMBOZYTENAGGREGATION 100
4.1.7 ANTI-FAKTOR XA SPIEGEL NACH ENOXAPARIN-NATRIUM GABE 102
4.1.8 THROMBININHIBITOR DABIGATRANETEXILAT IM SCHAF 105
4.2 KNOCHEN TISSUE ENGINEERING 107
IMAGE 3
4.2.1 ERGEBNISSE DER SUBKUTANEN VERSUCHSGRUPPEN 107
4.2.1.1 OPERATIVER UND POSTOPERATIVER VERLAUF 107
4.2.1.2 MAKROSKOPISCHE BEURTEILUNG DER EXPLANTATE 107
4.2.1.3 HISTOLOGISCHE ANALYSE DER EXPLANTATE 108
4.2.1.4 KNOCHENNEUBILDUNGSRATE 110
4.2.1.5 QUANTIFIZIERUNG DER QUERSCHNITTSFLAECHE 116
4.2.1.6 QUANTIFIZIERUNG DER NANOBONE FLAECHE 117
4.2.1.1 MATRIXWECHSEL UND VITALFLAECHE VON NANOBONE 119
4.2.1.8 OSTEOKLASTISCHE AKTIVITAET IM GRUPPENVERGLEICH 122
4.2.1.9 MESENCHYMALE STAMMZELLEN - DIREKT REIMPLANTIERT VERSUS
KULTIVIERT 124 4.2.1.10 VASKULARISIERUNG NACH 12 WOCHEN
IMPLANTATIONSDAUER 127
4.2.2 ERGEBNISSE DER AV-LOOP VERSUCHSGRUPPE 129
4.2.2.1 OPERATIVER UND POSTOPERATIVER VERLAUF 129
4.2.2.2 HISTOLOGISCHE ANALYSE DER EXPLANTATE 129
4.2.2.3 ZUSAMMENSETZUNG DES GEWEBES IN DEN AV-LOOP KONSTRUKTEN 130
4.2.2.4 MATRIXWECHSEL UND VITALFLAECHE VON NANOBONE 133
4.2.2.5 OSTEOKLASTISCHE AKTIVITAET 136
4.2.2.6 ZELLPROLIFERATION UND APOPTOSEVERHALTEN 137
4.2.2.7 VASKULARISIERUNG NACH 18 WOCHEN IMPLANTATIONSDAUER 138
5 DISKUSSION 145
5.1 ETABLIERUNG EINER OPTIMALEN GERINNUNGSHEMMUNG IM SCHAF 145
5.1.1 METHODEN ZUR MESSUNG DER THROMBOZYTENAGGREGATION IM SCHAF 145
5.1.2 THROMBOZYTENAGGREGATIONSHEMMUNG MIT ACETYLSALICYLSAEURE,
CLOPIDOGREL UND TICAGRELOR 147
5.1.3 ANTIKOAGULATION MIT ENOXAPARIN-NATRIUM UND DABIGATRANETEXILAT 154
5.1.4 VERIFIZIERUNG DER ERGEBNISSE IM AV-LOOP MODELL 158
5.2 KNOCHEN TISSUE ENGINEERING 159
5.2.1 VERHALTEN IMPLANTIERTER NANOBONE BLOECKE 160
5.2.1.1 NANOBONE - EIN BIOKOMPATIBLES KNOCHENERSATZMATERIAL 160 5.2.1.2
UNTERSCHIEDE IN RESORPTION UND BIODEGRADIERBARKEIT 161
5.2.1.3 ERFOLGREICHER MATRIXWECHSEL 166
5.2.2 NANOBONE BLOCK ALS KNOCHENAUFBAUMATERIAL 167
5.2.2.1 OPTIMALE ZELLPOPULATION: UEBERLEGENHEIT DER KULTIVIERTEN
MESENCHYMALEN STAMMZELLEN 168
5.2.2.2 OPTIMIERUNG DER KNOCHENBILDUNG DURCH ZUGABE VON RHBMP-2 174
5.2.2.3 MODERATE KNOCHENNEUBILDUNGSRATE IM AV-LOOP MODELL 176
5.2.3 VASKULARISIERUNG VON NANOBONE BLOCK 178
5.2.4 DAS AV-LOOP MODELL UND ALTERNATIVE STRATEGIEN ZUR GENERIERUNG VON
AXIAL VASKULARISIERTEM KNOCHENGEWEBE 185
5.2.5 RELEVANZ FUER DIE TIERMEDIZIN 187
6 ZUSAMMENFASSUNG 189
IMAGE 4
7 SUMMARY 191
8 LITERATURVERZEICHNIS 193
9 ANHANG 211
A.L DATEN 211
A.2 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 218
A.3 TABELLENVERZEICHNIS 222
10 WISSENSCHAFTLICHE PUBLIKATIONEN 225
10.1 ORIGINALARBEITEN 225
10.2 KONFERENZBEITRAEGE 225
11 DANKSAGUNG 227
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