Differentielle Genexpressionsanalyse im Ischämie- und Reperfusionsschaden des Pankreas:
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3
INHALTSVERZEICHNIS:
ABBILDUNGS- UND TABELLENVERZEICHNIS 6
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 7
1. EINLEITUNG 11
1.1 DIE TRANSPLANTATPANKREATITIS ALS PANKREASSPEZIFISCHE KOMPLIKATION IN
DER TRANSPLANTATIONSMEDIZIN 11
1.2 DER ISCHAEMIE/REPERFUSIONSSCHADEN ALS WESENTLICHER FAKTOR IN DER
PATHOGENESE DER TRANSPLANTATPANKREATITIS 13
1.2.1 MULTIFAKTORIELLES GESCHEHEN IN DER PATHOPHYSIOLOGIE DES
ISCHAEMIE/REPERFUSIONSSCHADENS 16
1.3 GENEXPRESSION IM ISCHAEMIE/REPERFUSIONSSCHADEN 29
1.4 FRAGESTELLUNG, ZIELSETZUNG UND VORGEHEN DER ARBEIT 33
2. MATERIAL UND METHODEN 34
2.1 TIEREXPERIMENT 34
2.1.1 VERSUCHSTIERE 34
2.1.2 ANAESTHESIE DER VERSUCHSTIERE 35
2.1.3 VERSUCHSABLAUF....: 35
2.1.4 EINTEILUNG DER VERSUCHSGRUPPEN 35
2.1.5 GEWEBEASSERVIERUNG 36
2.1.6 RNA-EXTRAKTION UND UEBERPRUEFUNG AUF REINHEIT UND AUSBEUTE 36
2.1.7 PHENOL- CHLOROFORM- EXTRAKTION 37
2.1.8 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON NUCLEINSAEURELOESUNGEN MITTELS
ABSORPTIONSSPEKTROMETRIE 38
2.2 DIFFERENTIAL DISPLAY 39
2.2.1 DNA-VERDAU 39
2.2.2 REVERSE TRANSKRIPTION 39
2.2.3 DD-PCR 40
2.2.4 ISOLIERUNG DER DNA-FRAGMENTE 41
2.3 KLONIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN 41
2.3.1 ANZUECHTUNG EINER UEBER-NACHT-KULTUR 43
2.3.2 PRAEPARATION VON PLASMID-DNA 43
2.3.3 SEQUENZIERUNG DER PLASMID-DNA 43
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IMAGE 2
4
2.3.4 ENTFERNUNG DER FARBSTOFFTERMINATOREN MIT QIAGEN-DYE-EX SPIN KIT 44
2.3.5 IDENTIFIZIERUNG DER EXPRIMIERTEN GENE 44
3. ERGEBNISSE 44
3.1 ISOLIERUNG DER DNA-FRAGMENTE 45
3.2 SEQUENZEN UND IDENTIFIZIERTE GENE 45
3.3 BESCHREIBUNG UND ZUORDNUNG DER EXPRIMIERTEN GENE 52
3.4 ZUORDNUNG DER EXPRIMIERTEN GENE ZU GRUPPEN GLEICHEN
EXPRESSIONSVERHALTENS 53
4. DISKUSSION DER ERGEBNISSE 59
4.1 ENTWICKLUNG DES TIERMODELLS 59
4.2 DIFFERENTIAL DISPLAY 60
4.3 GENEXPRESSION IM ISCHAEMIE-REPERFUSIONSSCHADENS DES PANKREAS 61
4.3.1 EXOKRINE PANKREASENZYME 61
4.3.1.1 PANKREATISCHES TRYPSIN 61
4.3.1.2 PANKREATISCHE ELASTASE 1 64
4.3.1.3 CARBOXYPEPTIDASE A 2 64
4.3.1.4 PANKREATISCHE LIPASE 65
4.3.1.5 PANKREATISCHE AMYLASE 66
4.3.1.6 PHOSPHOLIPASE A 2 66
4.3.2 ABWEHR UND REPARATUR 68
4.3.2.1 PANKREATITIS ASSOZIIERTES PROTEIN 68
4.3.2.2 GADD 153 70
4.3.2.3 HEAT-SHOCK PROTEIN HSP 27 : 71
4.3.2.4 LIPOCORTIN 1 73
4.3.3 ZELLADHAESION 75
4.3.3.1 PROTEIN-TYROSIN-PHOSPHATASE 75
4.3.3.2 GLYKOPROTEIN 65 76
4.3.4 IMMUNABWEHR 76
4.3.4.1 T-ZELL REZEPTOR 76
4.3.4.2 LY6C-ANTIGEN 77
4.3.5 ZELLZYKLUS 77
IMAGE 3
5
4.3.5.1 AXIN 77
4.3.5.2 REGENERATING ISLET DERIVED-1A 78
4.3.6 TRANSLATION/TRANSKRIPTION 80
4.3.6.1 EUKARYOTIC TRANSLATION INITIATION FACTOR 2 80
4.6.3.2 ZINK FINGER PROTEIN 451 81
4.3.7 WEITERE EXPRIMIERTE GENE 82
4.3.7.1 RIBOSE-5-PHOSPHAT-LSOMERASE 82
4.3.7.2 MYSPDZ 83
4.3.7.3 PYROPHOSPHATASE 1 83
4.3.7.4 MITOCHONDRIALES GENOM 83
4.4 LIMITATION, AUSBLICK UND MOEGLICHE IMPLIKATIONEN FUER DIE KLINIK 85
5. ZUSAMMENFASSUNG 86
6. LITERATURVERZEICHNIS 87
7. ANHANG - PCR PRODUKTE MIT BANDENMUSTERN 119
8. DANKSAGUNG 120
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