Die Funktion des Interferon-regulierenden Faktors 4 in intrarenalen Antigen-präsentierenden Zellen beim akuten Nierenversagen:
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I N H A L T S V E R Z E I C H N I S
INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 2
1.1 AKUTE NIERENSCHAEDIGUNG 2
1.1.1 EPIDEMIOLOGIE DER AKUTEN NIERENSCHAEDIGUNG 2
1.1.2. PATHOPHYSIOLOGIE DER AKUTEN NIERENSCHAEDIGUNG 4
1.2. DAS IMMUNSYSTEM 10
1.2.1. DAS ANGEBORENE IMMUNSYSTEM 10
1.2.2. DAS ADAPTIVE IMMUNSYSTEM 16
1.2.3. IMMUNREAKTIONEN DURCH ISCHAEMIE-REPERFUSION IN DER NIERE 17
1.2.4. REGULATIONSMECHANISMEN VON IMMUNREAKTIONEN 23
1.2.5. INTERFERON-REGULIERENDE FAKTOREN 25
1.3. ZIEL DER UNTERSUCHUNG UND HYPOTHESE 32
2. MATERIAL UND METHODEN 34
2.1. TIERZUCHT UND TIERHALTUNG 36
2.2. GENOTYPISIERUNG DER MAEUSE 36
2.3. UNI- UND BILATERALE ABKLEMMUNG DER NIERENGEFAESSE 38
2.4. BEHANDLUNG DER MAEUSE VOR DER NIERENGEFAESSABKLEMMUNG 42
2.5. BLUTENTNAHME UND KREATININ- UND HARNSTOFFMESSUNG IM SERUM 44
2.6 RNA-GEWINNUNG UND UMSCHREIBEN IN CDNA 45
2.6.1. RNA-ISOLATION AUS NIERENGEWEBE 45
2.6.2. UMSCHREIBUNG DER MRNA IN CDNA 47
2.7 REAL-TIME QPCR (LIGHTCYCLER 480) 48
2.8 PERIODIC ACID SCHIFF-(PAS)-FAERBUNG 52
2.9 IMMUNHISTOCHEMIE: NEUTROPHILE, MAKROPHAGEN UND T-ZELLEN 54
2.10 WESTERN BLOT 56
2.11 ISOLATION VON ZELLPOPULATIONEN AUS NIEREN UND MILZ 63
2.11.1. ISOLATION VON MONOZYTEN AUS DER MILZ 63
2.11.2. ISOLATION VON TUBULUSEPITHELZELLEN 63
2.11.3. ISOLATION VON ZELLPOPULATIONEN DURCH MICROBEADS IM MAGNETFELD 65
2.12 STIMULATION VON ZELLEN MIT SAUERSTOFFRADIKALEN 66
2.13. STATISTISCHE AUSWERTUNG 67
L
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IMAGE 2
I N H A L T S V E R Z E I C H N I S
3. ERGEBNISSE 70
3.1 IRF4-MRNA-BASISEXPRESSION VERSCHIEDENER ORGANE DER C57BL/6-MAUS 70
3.2 ZYTOKIN-BASISEXPRESSION IN IRF4+/+ UND IRF4-/- MAEUSEN 71
3.3 IRF4-INDUKTION DURCH SAUERSTOFFRADIKALE 72
3.4 IRF4- UND IRF5-EXPRESSION NACH ISCHAEMIE-REPERFUSION IN DER NIERE 73
3.4.1 IRF4- UND IRF5-MRNA-LEVEL IN DER NIERE NACH RENALER IR 73
3.4.2 UNTERSUCHUNG DER IRF4-PROTEINE IN DER NIERE NACH RENALER IR 74
3.4 IRF4 WIRD IN CD45/CDLLC-DOPPELPOSITIVEN ZELLEN EXPRIMIERT 75
3.5 ANTIOXIDANTIEN HEBEN IR-INDUZIERTE IRF4-EXPRESSION AUF. 75
3.6 IRF4-/- VERSTAERKT DAS AUSMASS DES AKUTEN NIERENVERSAGENS 76
3.7 IRF4-/- VERSTAERKT DEN TUBULUSSCHADEN NACH ISCHAEMIE-REPERFUSION 77
3.8 IRF4-/- VERSTAERKT DIE ENTZUENDUNGSREAKTION NACH ISCHAEMIE-REPERFUSION
79
3.8.1 IRF4-/- GEHT MIT ERHOEHTER ZYTOKIN/CHEMOKIN-EXPRESSION EINHER 79
3.8.2 IRF4-/- GEHT MIT ERHOEHTER NEUTROPHILEN-REKRUTIERUNG EINHER 81
3.9.1 RENALE MAKROPHAGEN- UND T-ZELL-REKRUTIERUNG 82
3.10 CLODRONAT REDUZIERT DIE ENTZUENDUNG UND DAS ANV IN IRF4-/- MAEUSEN 83
3.11 ETANERCEPT REDUZIERT DIE ENTZUENDUNG UND DAS ANV IN IRF4-/- MAEUSEN
85
4. DISKUSSION 88
5. ZUSAMMENFASSUNG 102
LITERATURANGABEN 106
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 114 ,
DANKSAGUNG 119
LEBENSLAUF 120
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