TREM-1 als Zielstruktur zur Verlängerung des Transplantatüberlebens nach Herztransplantation:
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GABRIELA SCHIECHL INHALTSVERZEICHNIS
I N H A L T S V E R Z E I C H N I S
1. E I N L E I T U N G 1
1.1. GESCHICHTE DER ORGANTRANSPLANTATION 1
1.2. GRUNDLAGEN DER TRANSPLANTATIONSIMMUNOLOGIE 3
1.2.1 BEGRIFFSDEFINITION IN DAR TRANSPLANTATION 3
1.2.2 ERKENNUNG VON ALLOANTIGENEN 4
1.2.3 FORMEN DER ABSTOSSUNGSREAKTION 6
1.2.3.1 HYPERAKUTE ABSTOSSUNG 6
1.2.3.2 AKUTE ABSTOSSUNG 6
1.2.3.3 CHRONISCHE ABSTOSSUNG 7
1.3. IMMUNSUPPRESSIVA NACH ORGANTRANSPLANTATION 9
1.3.1 RISIKEN EINER IMMUNSUPPRESSIVEN BEHANDLUNG 9
1.4. IMMUNSYSTEM UND ABSTOSSUNG 10
1.4.1 MYD88ALS WICHTIGER FAKTOR IN DER ANGEBORENEN IMMUNITAET 10
1.4.1.1 MYD88 IN DER ORGANTRANSPLANTATION 12
1.4.2 KO-STIMUIATORISCHE REZEPTOREN - TREM-1 12
1.4.2.1 TREM-1 UND DESSEN AMPLIFIZIERENDE FUNKTION IN DER PRR
SIGNALKASKADE 13
1.4.2.2 KLINISCHE RELEVANZ VON TREM-1 14
1.5. ZIELSETZUNG 16
2. M A T E R I A L UND M E T H O D E N 17
2.1. MATERIAL 17
2.1.1 ALLGEMEINES MATERIAL 17
2.1.2 HUMANES GEWEBEMATERIAL 22
2.1.3 MAEUSE 22
2.2. METHODEN 22
2.2.1 HERZTRANSPLANTATION 22
2.2.1.1 TIERMODELLE 23
2.2.1.2 OPERATIONSTECHNIK DER HETEROTROPEN HERZTRANSPLANTATION 24
2.2.2 ANTAGONISTISCHES PEPTID ZUR INHIBIERUNG VON TREM-1 27
2.2.3 HISTOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN 27
2.2.3.1 HEMATOXYLIN/EOSIN FAERBUNG (H.E.) 27
2.2.3.2 MASSON-TRICHROMFAERBUNG 28
2.2.3.3 IMMUNHISTOLOGISCHE FAERBUNGEN 28
2.2.4 ZELLBIOLOGISCHE METHODEN 30
I
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IMAGE 2
GABRIELA SCHIECHL
INHALTSVERZEICHNIS
2.2.4.1 ISOLATION VON INFILTRIERENDEN LEUKOZYTEN IM TRANSPLANTAT 30
2.2.4.2 GEWINNUNG VON PBMC S AUS DEM BLUT DES REZIPIENTEN 30
2.2.4.3 LYMPHOZYTENISOLIERUNG AUS DER MILZ 31
2.2.4.4 ZELLZAHL- UND VITALITAETSBESTIMMUNG 31
2.2.4.5 ZELLKULTURBEDINGUNGEN 32
2.2.4.6 MAGNETISCHE SORTIERUNG VON ZELLEN 32
2.2.4.7 AKTIVITAETSANALYSE DER CD11B ZELLEN 32
2.2.4.8 GEMISCHTE LEUKOZYTEN REAKTION 33
2.2.4.9 ENZYME-LINKED IMMUNOSORBAND ASSAY (ELISA) 33
2.2.5 IN VIVO METHODEN - ADOPTIVER TRANSFER VON LYMPHOZYTEN 33
2.2.6 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 34
2.2.6.1 RNA ISOLATION 34
2.2.6.2 RNA-QUANTIFIZIERUNG 35
2.2.6.3 REVERSE TRANSKRIPTION 35
2.2.6.4 PRIMER 35
2.2.6.5 REAL-TIME POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR) 36
2.2.6.6 DNA-ELEKTROPHORESE 37
2.2.6.7 ISOLIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN DURCH GELEXTRAKTION 38
2.2.6.8 DNA-SEQUENZIERUNG 38
2.2.7 DURCHFTUSSZYTOMETRIE 38
2.2.7.1 FACS FAERBEMETHODE 40
2.2.8 BESTIMMUNG VON ZYTOKINEN MITTELS CYTOMETRIC BEAD ARRAY (CBA) 41
2.2.9 STATISTIK 42
3. E R G E B N I S S E 43
3.1. CHARAKTERISTIKA EINER CHRONISCH ABSTOSSUNGSREAKTION NACH HERZ
TRANSPLANTATION 43
3.2. MYD88 IN DER CHRONISCHEN TRANSPLANTATABSTOSSUNG 54
3.3. DETERMINIERUNG DES KO-REZEPTORS TREM-1 IM VERLAUF EINER
TRANSPLANTATABSTOSSUNG 56
3.3.1 TREM-1 IN DER HUMANEN ORGANTRANSPLANTATION 56
3.3.2 TREM-1* APC IN DER MURINEN CHRONISCHEN TRANSPLANTATABSTOSSUNG 57
3.4. INHIBIERUNG VON TREM-1 IM VERLAUF DER ORGANABSTOSSUNG 61
3.4.1 VERMINDERUNG DER CHRONISCHEN ABSTOSSUNGSREAKTION BEI BLOCKADE VON
TREM-1 61
3.4.2 FUNKTION ALLOREAKTIVER CD11B* TREM-1* APC AUF DIE
ZYTOKINEXPRESSION CD4* T LYMPHOZYTEN 68
3.4.3 SPEZIFISCHE UNTERSUCHUNGEN DER ADAPTIVEN IMMUNANTWORT IM VERLAUF
EINER INHIBIERUNG VON TREM-1 69
3.4.4 TREM-1* CD11B* APC WIRKEN ZELLTOXISCH AUF NAIVE CD4* LYMPHOZYTEN
IN VITRO 73
3.5. INITIALE INHIBIERUNG VON TREM-1 IM VERLAUF DER CHRONISCHEN
ABSTOSSUNGSREAKTION 77
3.5.1 AUSWIRKUNGEN EINER INITIALEN INHIBIERUNG VON TREM-1 AUF DIE
ADAPTIVE IMMUNANTWORT 83
UE
IMAGE 3
GABRIELA SCHIECHL INHALTSVERZEICHNIS
3.6. TREM-1 IN DER AKUTEN TRANSPLANTATABSTOSSUNG 86
3.6.1 BLOCKADE VON TREM* 1 IM VERLAUF EINER SUBAKUTEN ABSTOSSUNG IST
INSUFFIZIENT FQR DAS UEBERLEBEN DER TRANSPLANTATE 88
3.7. ZUSAMMENFASSUNG DER ERGEBNISSE 95
4. D I S K U S S I O N 97
4.1. INFILTRATION ALLOREAKTIVER ZELLPOPULATIONEN IM VERLAUF DER
CHRONISCHEN ABSTOSSUNGSREAKTION IM HETEROTROPEN MAUSMODELL 98
4.2. DAS THERAPEUTISCHE POTENTIAL VON MYD88 IN DER ORGANTRANSPLANTATION
99
4.3. DETEKTION VON TREM-1 IM SPENDERORGAN WAEHREND EINER CHRONISCHEN
ABSTOSSUNGSREAKTION IM MENSCHEN 100
4.4. FUNKTION VON TREM-1 IN MURINEN ABSTOSSUNGSREAKTIONEN NACH KARDIALER
ORGANTRANSPLANTATION 101
4.5. TREM-1* CD11B* A P C AKTIVIEREN DIE DIFFERENZIERUNG VON EFFEKTOR T
ZELLEN IM VERLAUF DER CHRONISCHEN ABSTOSSUNGSREAKTION 104
4.6. REGULIERUNG DES FIBROTLSCHEN ORGANUMBAUS IN DER CHRONISCHEN
ABSTOSSUNGSREAKTION DURCH TREM-1 106
5. Z U S A M M E N F A S S U N G . 108
6. L I T E R A T U R V E R Z E I C H N I S 110
7. A B K UE R Z U N G S V E R Z E I C H N I S 118
8. A B B I L D U N G S V E R Z E I C H N I S 122
9. T A B E L L E N V E R Z E I C H N I S 126
10. L E B E N S L A U F 127
11. W O R T E D E S D A N K E S 130
III
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