Die Rolle der organischen Kationentransporter für die zelluläre Aufnahme von Imatinib in Fibroblasten:
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG -1 -
1.1 DIE ZELLULAERE AUFNAHME VON MEDIKAMENTEN - 1 -
1.2 IMATINIB MESYLATE - 2 -
1.2 RHEUMATOIDE ARTHRITIS - 6 -
1.3 SYSTEMISCHE SKLEROSE - 8 -
1.4 ORGANISCHE KATIONENTRANSPORTER (OCT) - 9 -
1.5 ZIEL DER ARBEIT - 1 2 -
2. MATERIAL.. - 1 3 -
2.1 ZELLLINIEN - 1 3 -
2.1.1 HEK293-ZELLEN - 1 3 -
2.1.2 ZELLLINIEN AUS MAUSMODELLEN - 1 3 -
2.1.3 PATIENTENMATERIAL - 1 4 -
2.2 PRIMER OLIGONUKLEOTIDE FUER DIE QUANTITATIVE PCR - 1 5 -
2.3 KULTURMEDIEN - 1 6 -
2.4 LOESUNGEN UND PUFFER - 1 7 -
2.5 KITS - 1 7 -
2.6 CHEMIKALIEN - 1 8 -
2.7 GERAETE - 1 9 -
3. METHODEN - 20-
3.1 HUMANE EMBRYONALE NIERENZELLEN (HEK293-ZELLEN) - 20 -
3.1.1 ZELLKULTUR - 2 0 -
3.2 FIBROBLASTEN - 21 -
3.2.1 ISOLIERUNG VON FIBROBLASTEN -21 -
3.2.2 KULTIVIERUNG VON FIBROBLASTEN - 23 -
3.2.3 STIMULIERUNG DER FIBROBLASTEN - 23 -
3.3 ZELLZAEHLUNG IM CASY CELLCOUNTER - 24 -
3.4 ASP + -MIKROFLUORIMETRIE - 25 -
3.4.1 PRINZIP DER MESSUNG MIT TECAN-INFINITY - 26 -
3.4.2 VERSUCHSDURCHFUEHRUNG - 27 -
3.4.3 AUSWERTUNG - 27 -
3.5 HPLC-MASSENSPEKTOMETRIE - 29 -
3.5.1 FUNKTIONSPRINZIP DER HPLC MIT MASSENSPEKTOMETRIE - 29 -
3.5.2 VERSUCHSDURCHFUEHRUNG - 30 -
3.5.3 AUSWERTUNG - 32 -
3.6 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN - 32 -
3.6.1 ISOLIERUNG DER MESSENGER RNA - 33 -
3.6.2 SYNTHESE DER KOMPLEMENTAEREN DNA - 33 -
3.6.3 REAL-TIME POLYMERASE KETTENREAKTION (RT-PCR) - 34 -
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IMAGE 2
3.6.4 AUSWERTUNG DER QUANTITATIVEN PCR - 37
3.7 STATISTISCHE AUSWERTUNG DER ERGEBNISSE - 38
4. ERGEBNISSE - 39
4.1 IMATINIBAUFNAHME IN HEK293-ZELLEN - 39
4.1.1 HEMMUNG DER HOCT-VERMITTELTEN ASP + -AUFNAHME DURCH IMATINIB - 39
4.1.2 AKKUMULATION VON IMATINIB IN HEK293-ZELLEN - 40
4.1.3 EXPRESSION DER ORGANISCHEN KATIONENTRANSPORTER IN WT-HEK-ZELLEN -
42
4.2 IMATINIBAUFNAHME IN FIBROBLASTEN - 43
4.2.1 AKKUMULATION IN FIBROBLASTEN - 43
4.2.2 EXPRESSION DER TRANSPORTER IN FIBROBLASTEN - 44
4.3 IMATINIBAUFNAHME IN MAUSFIBROBLASTEN - 45
4.3.1 IMATINIBAKKUMULATION IN OCT -FIBROBLASTEN - 45
4.4 IMATINIBAUFNAHME UNTER ZYTOKINSTIMULATION . - 47
5. DISKUSSION - 49
5.1 DIE ZELLULAERE AUFNAHME VON IMATINIB UEBER HOCT1 UND HOCT2 - 49
5.2 DIE AUFNAHME VON IMATINIB IN FIBROBLASTEN - 52
5.3 IMATINIBAUFNAHME IM PATHOGENEN MILIEU - 53
6. ZUSAMMENFASSUNG UND AUSBLICK - 56
7. LITERATURVERZEICHNIS - 58
7.1 WISSENSCHAFTLICHE PUBLIKATIONEN - 58
7.2 INTERNETQUELLEN - 67
7.3 LITERATUR - 67
8. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS - 68
9. CURRICULUM VITAE - 71
9. DANKSAGUNGEN - 72
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