Mechanismen idiosynkratischer Lebertoxizität: Einfluss von Arzneistoff-unabhängigen Stressfaktoren auf die Bildung reaktiver Metaboliten und zellulären Stress
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
2 KENNTNISSTAND 3
2.1 IDIOSYNKRATISCHE ARZNEIMITTELREAKTIONEN 3
2.1.1 ALLGEMEINES 3
2.1.2 DIE LEBER ALS ZIELORGAN 4
2.2 MECHANISMEN IDIOSYNKRATISCHER LEBERTOXIZITAET 5
2.2.1 ARZNEISTOFF-ABHAENGIGE RISIKOFAKTOREN 6
2.2.1.1 BILDUNG REAKTIVER METABOLITE 6
2.2.1.2 BILDUNG KOVALENTER PROTEINADDUKTE - DIE HAPTEN-HYPOTHESE 8
2.2.1.3 DIE DANGER-HYPOTHESE 9
2.2.1.4 ALARMSIGNALE 11
2.2.2 GENETISCHE PRAEDISPOSITION 14
2.2.2.1 ARZNEISTOFF-METABOLISIERENDE ENZYME UND TRANSPORTER 14
2.2.2.2 ANTIOXIDATIVE ABWEHR 16
2.2.2.3 ZYTOKINE UND FAKTOREN DES IMMUNSYSTEMS 16
2.2.3 UMWELTBEDINGTE RISIKOFAKTOREN 17
2.2.3.1 KRANKHEITEN 18
2.2.3.2 CO-MEDIKATION 19
2.2.3.3 ALTER UND GESCHLECHT 20
V 2.3 IDIOSYNKRATISCHE ARZNEIMITTELREAKTIONEN IM TIERMODELL 21
2.3.1 POSTULIERTE MECHANISMEN 21
2.3.2 TIERMODELLE 22
2.3.2.1 MITOCHONDRIALE STOERUNGEN 22
* 2.3.2.2 TEMPORAERE ENTZUENDUNGSREAKTIONEN 23
2.4 DICLOFENAC ALS MODELLSUBSTANZ FUER IDIOSYNKRATISCHE
ARZNEIMITTELREAKTIONEN 25
2.4.1 PHARMAKOLOGISCHE WIRKUNG UND TOXIZITAET VON DICLOFENAC 25
2.4.2 BIOTRANSFORMATION VON DICLOFENAC 27
3 ZIELSETZUNG DER ARBEIT 29
4 MATERIAL UND METHODEN 31
4.1 MATERIAL 31
4.1.1 TECHNISCHE GERAETE 31
4.1.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN 32
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IMAGE 2
*RA
INHALTSVERZEICHNIS
4.1.3 CHEMIKALIEN UND REAGENZIEN 32
4.1.4 PUFFER UND LOESUNGEN 34
4.1.5 VERWENDETE KITS 35
4.1.6 ANTIKOERPER 35
4.1.7 RT 2 PROFILER PCR ARRAY 36
4.1.8 OLIGONUKLEOTIDE 38
4.2 METHODEN 39
4.2.1 TIEREXPERIMENTELLE STUDIEN 39
4.2.1.1 ALLGEMEINE HALTUNGSBEDINGUNGEN, TOETUNG DER TIERE UND
PROBENENTNAHME 39
4.2.1.2 KLINISCHE CHEMIE 40
4.2.1.3 HISTOPATHOLOGIE 40
4.2.1.4 VORVERSUCHE ZUR DOSISFINDUNG 41
4.2.1.5 7-TAGES-STUDIEN MIT DICLOFENAC UND STRESSFAKTOREN 43
4.2.2 ZELLBIOLOGISCHE METHODEN 46
4.2.2.1 ARBEITEN MIT ZELLKULTUREN 46
4.2.2.2 HEPG2 ZELLLINIE 46
4.2.2.3 KULTIVIERUNG VON HEPG2-ZELLEN 46
4.2.2.4 BEHANDLUNG DER ZELLEN MIT DICLOFENAC, DICLOFENAC-METABOLITEN UND
STRESSFAKTOREN 47
4.2.2.5 ZYTOTOXIZITAETSASSAY 50
4.2.2.6 BESTIMMUNG DER DICLOFENAC-METABOLITEN AUS DEM UEBERSTAND 50
4.2.3 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 51
4 2.3.11 ALLGEMEINER UMGANG MIT RNA 51
4.2.3.2 RNA-ISOLIERUNG UND QUANTIFIZIERUNG 51
4.2.3.3 CDNA-SYNTHESE UND QRT-PCR ARRAY ANALYSE 52
4.2.3.4 CDNA-SYNTHESE UND QRT-PCR VON EINZELNEN GENEN 55
4.2.4 PROTEINBIOCHEMISCHE METHODEN 56
4.2.4.1 IMMUNHISTOCHEMISCHE DETEKTION VON NEUTROPHILEN IM LEBERGEWEBE 56
4.2.4.2 MULTIPLEX ZYTOKIN ASSAY 58
4.2.4.3 ELISA MESSUNG VON NGAL UND HMGB1 60
4.2.4.4 BESTIMMUNG DER GLUTATHIONKONZENTRATION IN LEBER 62
4.2.5 INSTRUMENTELLE ANALYTIK 64
4.2.5.1 HPLC-MS/MS ANLAGE 65
4.2.5.2 EXTRAKTION VON DICLOFENAC UND DICLOFENAC-METABOLITEN AUS PLASMA
UND
LEBERGEWEBE 66
4.2.5.3 EXTRAKTION VON KOVALENT GEBUNDENEM DICLOFENAC AUS LEBERGEWEBE 66
4.2.5.4 LC-MS/MS METHODE ZUR BESTIMMUNG VON DICLOFENAC UND
DICLOFENAC-METABOLITEN . 68
4.2.5.5 EXTRAKTION VON ARACHIDONSAEUREMETABOLITEN AUS LEBERGEWEBE 70
4.2.5.6 LC-MS/MS METHODE ZUR BESTIMMUNG VON ARACHIDONSAEUREMETABOLITEN 71
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
III
5 ERGEBNISSE 73
5.1 VORVERSUCHE ZUR DOSISFINDUNG 73
5.1.1 ERMITTLUNG EINER NICHT-HEPATOTOXISCHEN DICLOFENAC-DOSIS 73
5.1.2 ERMITTLUNG NICHT-HEPATOTOXISCHER DOSEN DER STRESSFAKTOREN 74
5.2 EINFLUSS VON STRESSFAKTOREN AUF DIE TOXIZITAET VON DICLOFENAC 76
5.2.1 ANZEICHEN ALLGEMEINER TOXIZITAET UND LEBERGEWICHTE 76
5.2.2 EINFLUSS VON DICLOFENAC UND STRESSFAKTOREN AUF KLINISCH-CHEMISCHE
PARAMETER FUER LEBERTOXIZITAET 78
5.2.3 HISTOPATHOLOGISCHE BEURTEILUNG 79
5.2.4 EINFLUSS VON STRESSFAKTOREN AUF DIE MIGRATION VON IMMUNZELLEN IN
DIE LEBER 82
5.2.5 GLUTATHIONDEPLETION 83
5.3 EINFLUSS ARZNEISTOFF-UNABHAENGIGER STRESSFAKTOREN AUF DIE
BIOTRANSFORMATION VON DICLOFENAC 85
5.3.1 LC-MS/MS ANALYSE REAKTIVER DICLOFENAC-METABOLITEN 85
5.3.2 VERAENDERUNGEN IN DER EXPRESSION NRF2-ABHAENGIGER GENE 90
5.3.2.1 GENE DER ANTI-OXIDATIVEN ABWEHR UND ANTWORT AUF ZELLSTRESS 92
5.3.2.2 GENE DES PHASE I UND II METABOLISMUS UND LEBERTRANSPORTES 93
5.4 EINFLUSS VON DICLOFENAC UND ARZNEISTOFF-UNABHAENGIGEN STRESSFAKTOREN
AUF DIE AKTIVIERUNG CO-STIMULATORISCHER SIGNALWEGE 95
5.4.1 NFKB/MAPK-REGULIERTE ZYTOKINE UND CHEMOKINE 99
5.4.2 . STRESS- UND HITZESCHOCKANTWORT 100 % T 5.4.3 REGULATION
APOPTOTISCHER FAKTOREN 101
5.5 EINFLUSS VON DICLOFENAC UND ARZNEISTOFF-UNABHAENGIGEN STRESSFAKTOREN
AUF DEN ARACHIDONSAEURE-METABOLISMUS 102
5.5.1 GENEXPRESSION VON ARACHIDONSAEURE METABOLISIERENDEN ENZYMEN 102
5.5.2 QUANTIFIZIERUNG VON ARACHIDONSAEUREMETABOLITEN IM LEBERGEWEBE 103
5.6 EINFLUSS VON DICLOFENAC UND ARZNEISTOFF-UNABHAENGIGEN STRESSFAKTOREN
AUF DIE AUSSCHUETTUNG VON ZYTOKINEN, CHEMOKINEN UND ALARMSIGNALEN INS
PLASMA 107
5.7 EINFLUSS VON STRESSFAKTOREN AUF DIE ZYTOTOXIZITAET VON DICLOFENAC UND
DICLOFENACMETABOLITEN SOWIE AUF DIE BIOTRANSFORMATION VON DICLOFENAC IN
HEPG2-ZELLEN.109
5.7.1 ZYTOTOXIZITAET VON DICLOFENAC UND DICLOFENAC-METABOLITEN 109
5.7.2 EINFLUSS VON LPS, POLY L:C, BSO UND TNF-A AUF DIE ZYTOTOXIZITAET
VON DICLOFENAC ..109
5.7.3 EINFLUSS VON TNF-A AUF DIE ZYTOTOXIZITAET VON
DICLOFENAC-METABOLITEN 111
5.7.4 EINFLUSS VON TNF-A UND BSO AUF DIE METABOLISIERUNG VON DICLOFENAC
111
IMAGE 4
I V
INHALTSVERZEICHNIS
6 DISKUSSION 113
6.1 EINFIUSS ARZNEISTOFF-UNABHAENGIGER STRESSFAKTOREN AUF DIE TOXIZITAET
VON DICLOFENAC 113
6.1.1 POTENZIERUNG DER LEBERTOXIZITAET IN VIVO 113
6.1.2 EINFIUSS VON STRESSFAKTOREN AUF DIE ZYTOTOXIZITAET VON DICLOFENAC
IN VITRO 117
6.2 EINFIUSS ARZNEISTOFF-UNABHAENGIGER STRESSFAKTOREN AUF DIE
BIOTRANSFORMATION VON DICLOFENAC 119
6.2.1 CYP450-ABHAENGIGE REAKTIVE METABOLITEN 119
6.2.2 UGT-ABHAENGIGE REAKTIVE METABOLITEN 122
6.2.3 VERAENDERUNGEN IN DER GENEXPRESSION VON LEBEREFFLUXPUMPEN 124
6.2.4 HEMMUNG NRF2-ABHAENGIGER SIGNALWEGE 126
6.2.5 ZUSAMMENFASSUNG 129
6 . 3 EINFIUSS VON DICLOFENAC UND ARZNEISTOFF-UNABHAENGIGEN
STRESSFAKTOREN AUF DIE AKTIVIERUNG N F K B - UND MAPK/ AP1-ABHAENGIGER
SIGNALWEGE 1 3 1
6.3.1 ENTZUENDUNGSREAKTIONEN UND MIGRATION VON IMMUNZELLEN 131
6.3.1.1 FREISETZUNG VON ZYTOKINEN 132
6.3.1.2 CHEMOKINE UND MIGRATION VON NEUTROPHILEN 136
6.3.2 BILDUNG VON ALARMSIGNALEN UND ANTWORT AUF ZELLSTRESS 140
6.3.2.1 INDUKTION CO-STIMULATORISCH WIRKENDER ALARMSIGNALE 140
6.3.2.2 EFFEKT AUF FAKTOREN DER ZELLULAEREN STRESSANTWORT 144
6.3.3 VERAENDERUNGEN IM ARACHIDONSAEURE-METABOLISMUS UND EINFIUSS VON
DICLOFENAC UND
SJRESSFAKTOREN AUF DIE HITZESCHOCKANTWORT 146
6.3.3.1 INDUKTION LIPOXYGENASE-ABHAENGIGER METABOLITEN 146
6.3.3.2 HEMMUNG CYCLOOXYGENASE-ABHAENGIGER METABOLITEN 148
6.3.3.3 HEMMUNG DER HITZESCHOCKANTWORT 149
6.4 SCHLUSSFOLGERUNG 153
7 ZUSAMMENFASSUNG 157
8 SUMMARY 159
9 LITERATURVERZEICHNIS 161
10 ANHANG 175
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| spelling | Ramm, Susanne Verfasser (DE-588)1029719926 aut Mechanismen idiosynkratischer Lebertoxizität Einfluss von Arzneistoff-unabhängigen Stressfaktoren auf die Bildung reaktiver Metaboliten und zellulären Stress von Susanne Ramm Mechanisms of idiosyncratic hepatotoxicity - Impact of drug independent stress factors on reative metabolite formation and cellular stress 2012 VI, 183 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Würzburg, Univ., Diss., 2012 Toxizität (DE-588)4078372-8 gnd rswk-swf Diclofenac (DE-588)4239268-8 gnd rswk-swf Leber (DE-588)4034933-0 gnd rswk-swf Arzneimittel (DE-588)4003115-9 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Arzneimittel (DE-588)4003115-9 s Toxizität (DE-588)4078372-8 s Leber (DE-588)4034933-0 s Diclofenac (DE-588)4239268-8 s DE-604 Erscheint auch als Online-Ausgabe urn:nbn:de:bvb:20-opus-74342 https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:bvb:20-opus-74342 Resolving-System kostenfrei Volltext DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=025498470&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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