Untersuchungen zum Einfluss von Shigatoxin auf Makrophagen und dendritische Zellen des Rindes:
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| Language: | German |
| Published: |
Giessen
DVG Service
2012
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
2 LITERATURUEBERSICHT 2
2.1 AUFGABEN VON MO UND DC IM RAHMEN DER IMMUNANTWORT 2
2.1.1 ANTIGENERKENNUNG IM UNSPEZIFISCHEN IMMUNSYSTEM 3
2.1.2 PATTERN RECOGNITION RECEPTORS (PRR) 3
2.1.3 DANGER HYPOTHESIS 5
2.2 PROFESSIONELL ANTLGEN-PRAESENTLERENDE ZELLEN: BIOLOGIE UND FUNKTION 6
2.2.1 MAKROPHAGEN (M0) 6
2.2.2 DENDRITISCHE ZELLEN 7
2.3 ANTIGENPRAESENTATION UND T-ZELL-AKTIVIERUNG 8
2.3.1 T-ZELLAKTIVIERUNG ODER ANERGIE 8
2.3.2 MOLEKULARE MECHANISMEN DER T-ZELLAKTIVIERUNG 9
2.4 BEDEUTUNG DES ANGEBORENEN IMMUNSYSTEMS IN DER ENTERALEN MUKOSA UND
BEI GASTROINTESTINALEN INFEKTIONEN 14
2.4.1 INTESTINALES IMMUNSYSTEM 14
2.4.2 EIGENSCHAFTEN INTESTINALER M0 15
2.5 SHIGATOXIN-BILDENDE ESCHERICHIA COLI (STEC) 17
2.5.1 AUFBAU UND WIRKUNG DES TOXINS 17
2.5.2 TYPEN VON SHIGATOXINEN 18
2.5.3 SHIGATOXIN-REZEPTOR GB 3 (CD77): LOKALISATION, STRUKTUR UND
EINFLUSS AUF DIE ZYTOTOXIZITAET 18 2.5.4 TOXINBINDUNG UND TLR4 20
2.5.5 MAP-KINASEN UND RIBOTOXIC STRESS RESPONSE 21
2.6 WIRKUNG DES STX AUF MB 23
2.6.1 EINFLUSS VON STX AUF HUMANE MO 23
2.6.2 STX UND PHAGOZYTOSE 25
2.6.3 STX UND APOPTOSE 27
2.7 PATHOGENESE DER EHEC INFEKTION DES MENSCHEN 28
2.8 ARBEITSHYPOTHESE 29
3 MATERIAL UND METHODEN 30
3.1 TIERE UND BLUTENTNAHME 30
3.2 PRIMAERE BOVINE MAKROPHAGEN (MO) 30
3.2.1 ISOLATION DER PERIPHEREN MONONUKLEAEREN ZELLFRAKTION (PBMC):
METHODE A 30 3.2.2 GENERIERUNG EINER MO-KULTUR AUS PBMC 31
3.2.3 INKUBATION BOVINER MO MIT STX1 32
3.2.4 ERNTE DER M0 32
3.3 PRIMAERE BOVINE DENDRITISCHE ZELLEN (DC) 34
3.3.1 ISOLATION DER PERIPHEREN MONONUKLEAEREN ZELLFRAKTION (PBMC):
METHODE B 34 3.3.2 GENERIERUNG EINER DC-KULTUR AUS PBMC 34
3.3.3 INKUBATION BOVINER DC MIT STX1 35
3.3.4 ERNTE DER DC 35
3.4 IMMUNFLUORESZENZMIKROSKOPIE 36
3.4.1 PRAEPARATEVORBEREITUNG ZUR IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG 36
3.5 DURCHFLUSSZYTOMETRIE (DFZM) 37
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
3.5.1 PROBENVORBEREITUNG 37
3.5.2 PROBENMESSUNG UND -ANALYSE 41
3.5.3 MAKROPHAGEN (MA) 43
3.5.4 DENDRITISCHE ZELLEN (DC) 44
3.6 UNTERSUCHUNGEN ZUM NACHWELS BOVINER ZYTOKIN- UND CHEMOKINGENE 46
3.6.1 QUANTITATIVE RNA-BESTIMMUNG IM PHOTOMETER 48
3.6.2 QUALITATIVE KONTROLLE DER RNA DURCH GELELEKTROPHORESE 48
3.6.3 REVERSE TRANSKRIPTION 49
3.6.4 PCR ZUR UEBERPRUEFUNG AUF DNA-KONTAMINATIONEN 50
3.6.5 REAL TIME TAQMAN PCR 53
3.7 NACHWEIS VON IL-10 IM UEBERSTAND PRIMAERER MO-KULTUREN MITTELS ELISA
56
3.7.1 AUFKONZENTRIERUNG DER KULTURUEBERSTAENDE 56
3.7.2 DURCHFUEHRUNG DES ELISA 56
3.8 STATISTISCHE AUSWERTUNG 58
4 ERGEBNISSE 59
4.1 CHARAKTERISIERUNG PRIMAERER BOVINER MAKROPHAGEN (MO) 59
4.1.1 MORPHOLOGIE 59
4.1.2 ZYTOSKELETTAUSSTATTUNG UND OBERFLAECHENANTIGENE 60
4.1.3 SHIGATOXIN-REZEPTOR (CD77)-EXPRESSION 6 3
4.1.4 KOMPETITIONSSTUDIE MIT ANTI-CD77 ANTIKOERPER UND RSTXBI 65
4.1.5 EINFLUSS VON STX1 67
4.2 CHARAKTERISIERUNG PRIMAERER BOVINER DENDRITISCHER ZELLEN (DC) 78
4.2.1 MORPHOLOGIE 78
4.2.2 EXPRESSION VON OBERFLAECHENANTIGEN INKL. CD77 78
4.2.3 BINDUNGSSTUDIE MIT RSTXBI 80
4.2.4 EINFLUSS VON STX1 81
5 DISKUSSION 83
6 ZUSAMMENFASSUNG 98
7 SUMMARY 100
8 LITERATURVERZEICHNIS 101
9 ANHANG 116
9.1 PUFFER UND LOESUNGEN 116
10 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 120
10.1 ABBILDUNGEN 120
10.2 TABELLEN 120
11 DANKSAGUNG 121
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