Induktion und funktionelle Charakterisierung von tolerogenen dendritischen Zellen:
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2012
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS V
1. ZUSAMMENFASSUNG 1
2. EINLEITUNG 3
2.1 DENDRITISCHE ZELLEN 3
2.1.1 ALLGEMEINES 3
2.1.2 ROLLE DER DENDRITISCHEN ZELLEN BEI DER ENTWICKLUNG DER IMMUNITAET 3
2.1.2.1 REIFUNGSPROZESS UND MIGRATION DER DENDRITISCHEN ZELLEN 3
2.1.2.2 INTERAKTION DER DENDRITISCHEN ZELLEN MIT T-ZELLEN 4
2.1.3 ROLLE DER DENDRITISCHEN ZELLEN BEI DER AUFRECHTERHALTUNG DER
TOLERANZ 6
2.1.3.1 ALLGEMEINES 6
2.1.3.2 ZENTRALE TOLERANZ 6
2.1.3.3 PERIPHERE TOLERANZ 8
2.1.4. AUTOIMMUNITAET 9
2.1.5 TOLEROGENE DENDRITISCHE ZELLEN 12
2.1.5.1 NATUERLICH VORKOMMENDE TOLEROGENE SUBTYPEN DENDRITISCHER ZELLEN
12
2.1.5.2 DENDRITISCHE ZELLEN UNTER STEADY STATE-BEDINGUNGEN 13
2.1.5.3 AUFNAHME APOPTOTISCHER ZELLEN DURCH DENDRITISCHE ZELLEN 15
2.1.5.4 DESIGNER DCS 16
2.1.5.5 DENDRITISCHE ZELLEN UND DER TRANSKRIPTIONSFAKTOR NF-KAPPAB 18
2.2 FRAGESTELLUNG UND EXPERIMENTELLER ANSATZ 20
3. MATERIALIEN UND METHODEN 22
3.1 GERAETE UND MATERIALIEN 22
3.1.1 GERAETE 22
3.1.2 MATERIALIEN 23
I
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
3.1.3 CHEMIKALIEN 23
3.1.4 VERWENDETE KULTURMEDIEN, LOESUNGEN UND PUFFER 25
3.1.4.1 LOESUNGEN FUER ZELLKULTUR, -SORTIERUNG UND -ANALYSE 25
3.1.4.2 PUFFER FUER ELISA 26
3.1.4.3 LOESUNGEN FUER HISTOLOGIE 27
3.1.5 VERWENDETE ANTIKOERPER 28
3.2 GEWINNUNG, AUFREINIGUNG, KULTIVIERUNG UND BEHANDLUNG DENDRITISCHER
ZELLEN.... 28
3.2.1 MATERIALIEN UND REAGENZIEN 28
3.2.2 GEWINNUNG DENDRITISCHER ZELLEN 28
3.2.3 AUFREININGUNG DER DENDRITISCHEN ZELLEN 29
3.2.4 KULTIVIEREN DER DENDRITISCHEN ZELLEN 30
3.2.5 BELADEN DER DENDRITISCHEN ZELLEN MIT MBSA ALS ANTIGEN 30
3.3 EXPERIMENTE MIT DENDRITISCHEN ZELLEN 30
3.3.1 BEHANDLUNG DER DENDRITISCHEN ZELLEN MIT NF-KAPPAB-LNHIBITOREN 30
3.3.2 BESTIMMUNG DER EXPRESSION DER OBERFLAECHENMOLEKUELE DER DCS MITTELS
FACS
31
3.3.3 EXPERIMENTE ZUR UEBERPRUEFUNG DER FAEHIGKEIT DER ANTIGENAUFNAHME DER
MIT
NF-KAPPAB-LNHIBITOREN BEHANDELTEN DENDRITISCHEN ZELLEN 32
3.3.4 ZYTOKIN-ELISA 32
3.3.5 MIXED LEUKOCYTE REACTION (MLR) 33
3.4. ARTHRITISEXPERIMENTE 33
3.4.1 VERSUCHSTIERE UND HALTUNGSBEDINGUNGEN 33
3.4.2 IMMUNISIERUNG UND ARTHRITISINDUKTION 33
3.4.3 BEURTEILUNG DER SCHWERE DER ARTHRITIS 34
3.4.3.1 GELENKSCHWELLUNG 34
3.4.3.2 HISTOLOGIE 34
3.5 MESSUNG DER ZELLULAEREN IMMUNREAKTIVITAET 35
3.5.1 VERZOEGERTE UEBEREMPFINDLICHKEITSREAKTION 35
I!
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
3.5.2 UNTERSUCHUNG DER ZELLULAEREN IMMUNREAKTIVITAET IN VIVO MIT HILFE VON
PROLIFERATIONSASSAYS ; 36
3.6 DARSTELLUNG DER ERGEBNISSE UND STATISTISCHE ANALYSE 36
4. ERGEBNISSE 37
4.1. IN-VITRO-CHARAKTERISIERUNG VON CD40-/-,DENDRITISCHEN ZELLEN 37
4.1.1. BESTIMMUNG DES PHAENOTYPS DER CD40-/- DENDRITISCHEN ZELLEN 37
4.1.2 BESTIMMUNG DES ZYTOKINPROFILS DER CD40-/- DENDRITISCHEN ZELLEN 38
4.1.3 MESSUNG DER T-ZELL-PROLIFERATION IN DER ALLOGENIC MIXED LEUKOCYTE
REACTION
(MLR) 40
4.1.4 ANALYSEN DER ANTIGENAUFNAHME DURCH DENDRITISCHE ZELLEN 42
4.1.5 ZUSAMMENFASSUNG 43
4.2. IN-VIVO-FUNKTION DER CD40-/- DCS 43
4.2.1 BEEINFLUSSUNG DER DTH-REAKTION UND ZELLULAERE PROLIFERATION 43
4.2.2 THERAPIE DER ARTHRITIS MIT CD40-/- DENDRITISCHEN ZELLEN 46
4.2.2.1 PRAEVENTIVE THERAPIE 46
4.2.2.2 KURATIVE THERAPIE 48
4.2.3 ZUSAMMENFASSUNG 50
4.3. IN-VITRO-CHARAKTERISIERUNG VON DENDRITISCHEN ZELLEN, DIE MIT
VERSCHIEDENEN NFKAPPAB-LNHIBITOREN BEHANDELT WURDEN 50
4.3.1 MORPHOLOGISCHE BEURTEILUNG DER DENDRITISCHEN ZELLEN NACH DER
BEHANDLUNG
MIT NF-KAPPAB-LNHIBITOREN 50
4.3.2 PHAENOTYP DER MIT NF-KAPPAB-LNHIBITOREN BEHANDELTEN DENDRITISCHEN
ZELLEN 51
4.3.3 ZYTOKINPROFIL DER MIT BAY11-7082- ODER
ACETYLSALICYLSAEURE-BEHANDELTEN DCS
52
4.3.4 T-ZELL-PROLIFERATION IN DER ALLOGENIC MIXED LEUKOCYTE REACTION 53
4.3.5 ANTIGENAUFNAHME 55
4.4. BAY11-7082-DCS UND ACETYLSALICYLSAEURE-DCS IN VIVO 57
4.5. KURATIVE THERAPIE DER AIA MIT BAY11-7082-DCS UND
ACETYLSALICYLSAEURE-DCS.. 59
III
IMAGE 4
INHALTSVERZEICHNIS
5. DISKUSSION 61
5.1 DENDRITISCHE ZELLEN UND REGULATION DER AUTOIMMUNITAET 61
5.2 IN-VITRO-EXPERIMENTE MIT EINSATZ VON CD40-DEFIZIENTEN DENDRITISCHEN
ZELLEN 63
5.3 IN-VITRO-EXPERIMENTE MIT EINSATZ VON DENDRITISCHER ZELLEN, DIE MIT
NF-KAPPAB- LNHIBITOREN BEHANDELT WURDEN 64
5.4. WERTUNG DER IN-VITRO-EXPERIMENTE 68
5.5 IN-VIVO- EXPERIMENTE IM DTH-MODELL 71
5.6 THERAPIE DER ANTIGEN-INDUZIERTEN ARTHRITIS MIT TOLEROGENEN
DENDRITISCHEN ZELLEN 72
5.6.1 PRAEVENTIVE UND KURATIVE THERAPIE DER AIA MIT TOLEROGENEN
CD40-/DENDRITISCHEN ZELLEN 74
5.6.2 KURATIVE THERAPIE DER AIA MIT TOLEROGENEN ASPIRIN- UND
BAY11-7082BEHANDELTEN DENDRITISCHEN ZELLEN 77
6. SCHLUSSFOLGERUNGEN UND AUSBLICK 80
LITERATURVERZEICHNIS 82
EHRENWOERTLICHE ERKLAERUNG 1044
IV
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